肾病综合征儿童淋巴细胞表型及细胞因子的变化分析.doc

肾病综合征儿童淋巴细胞表型及细胞因子的变化分析【关键词】 肾病综合征摘要: 目的:通过对原发性肾病综合征(PNS)儿童外周血T淋巴细胞表型及细胞因子（白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-）监测，探讨不同患病时期PNS儿童T淋巴细胞表型及白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-(TNF-)变化的临床意义。方法：选取我院儿科门诊及住院诊断为PNS患儿共40例，年龄在215岁，分活动期组及缓解期组，活动期及缓解期各检测一次。对照组为经过体格检查为正常健康儿童，年龄在214岁，共20例。流式细胞仪检测淋巴细胞表型CD3、CD4、CD8的阳性细胞百分率；酶联免疫技术对细胞因子（IL-6、TNF-）监测，组间进行比较t检验。结果：活动期与缓解期、对照组比较，CD4细胞数量明显降低(P<0.01)，CD8细胞数量明显升高(P<0.01)，CD4/CD8比值显著降低(P<0.01)，IL-6、TNF-含量均显著升高(P<0.01)。缓解期IL-6与对照组比较显著性(<0.01)。结论：PNS患儿免疫功能明显下降,免疫的辅助功能降低，CD4、CD8、IL-6、TNF-含量变化可作为判断PNS患儿病变活动或缓解和估计预后及治疗效果的一项参考指标。关键词: T淋巴细胞表型；IL-6；TNF-； PNSThe Variety Analysis of T-lymphocyte Type and Cell Factor of Nephropathy Syndrome ChildAbstract:Objective：examineing the outer blood T-lymphocyte type and cell factor(interleukin 6,tumor necrosis factor) of the primordial nephropathy syndrome(PNS) infant,to study the clinic meaning when T-lymphocyte type and interleukin 6(IL-6),tumor necrosis factor(TNF-a) change of the different sicken period children.Method： 40 PNS children in the policlinic and be in hospital,age 215 years,were selected and divided into active period group and alleviative period group, examine T-lymphocyte type and cell factor once in different period.The normal group were composed of 20 healthy children checked in the policlinic,age 214 years. Use the cell hydro-apparatus examine the masculine percent of T-lymphocyte type CD3、CD4、CD8 cell, ELISA (enzyme linked immunosorbant assay)to examine cell factor,and compared different group with t-test. Result: Compare the normal group、 active period group and alleviative period group,CD4 cell amount obviously depress (P<0.01),CD8 cell amount obviously raise(P<0.01),CD4/CD8 ratio obviously depress (P<0.01), IL-6、TNF-content obviously raise(P<0.01),. IL-6 be markedly raise compared the normal group to alleviative period group(<0.01). Conclusion: PNS child immunity function obviously depress, immunity assistant function also depress. The content change of CD4、CD8、IL-6、TNF- should be a referenced index to estimate the PNS clinic period and prognosis or cure effect.Key words：T-lymphocyte type;IL-6；TNF-；PNS 肾病综合征(NS)是儿童泌尿系统病中发病率比较高的一种疾病，它的发病、治疗及预后与淋巴细胞及细胞因子有直接的联系 。因此，对PNS患儿活动期和缓解期体外T淋巴细胞亚型（CD3、CD4、CD8）及细胞因子中的白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-(TNF-)进行检测，探讨淋巴细胞及细胞因子变化的在PNS中的临床意义。1 材料和方法1.1 研究对象：我院儿科门诊及住院诊断为原发性肾病综合征(PNS)患儿共40例，年龄在214岁，分活动期组及缓解期组，活动期及缓解期各检测一次。对照组为经过体格检查为正常健康儿童，年龄在213岁，共20例。1.2 淋巴细胞表型分析方法：分析方法参照陈英玉等的方法进行1,2。专用试管，每一管加经肝素(0.5ml)抗凝的静脉新鲜血3.0ml，用BPS 1：4稀释待用，每支离心管加淋巴细胞分离液2.0ml，处理标本3.0ml，18002000r/min离心20min。吸淋巴细胞层于另一管，用BPS冲洗三次，制淋巴细胞悬液2ml。取500l的血细胞悬液，标记单抗（FITC-CD3、FITC-CD4、PE-CD8美国试剂），染色15min，溶解红细胞后上机。每份样本测定2min，计算淋巴细胞表面分化抗原CD3、CD4、CD8的总数、阳性细胞数和阳性细胞的百分数。缓解期依上述方法。1.3 细胞因子测定：血IL-6、TNF-含量测定采用酶联免疫法(ELISA法)(IL-6、TNF-美国试剂),所有患儿均清晨空腹静脉血，分离血清在-20以下储存以备统一检测。缓解期依上述方法留取标本检测。1.4 统计学处理：阳性细胞的统计用百分数表示，数据用均数标准差表示,组间比较用t检验。2 结果PNS活动期与缓解期、对照组比较，CD4细胞数量明显降低(P<0.01)，CD8细胞数量明显升高(P<0.01)，CD4/CD8比值显著降低(P<0.01)，IL-6、TNF-含量均显著升高(P<0.01)。缓解期IL-6与对照组比较显著性(<0.01)，检测结果见表1：表1 血T淋巴细胞亚型阳性细胞及细胞因子的变化比较略3 讨 论小儿原发性肾病综合征的发病及病情的进展、预后与T淋巴细胞及细胞因子的异常有着密切的关系、两者的失衡导致免疫系统功能的混乱。在细胞免疫方面，T淋巴细胞亚群在细胞免疫中起非常重要作用，是机体的重要效应细胞3，研究结果表明，PNS活动期的CD4细胞数量明显地低于对照组(P<0.01)，CD8细胞数量比对照组明显升高(P<0.01)，CD4/CD8比值比对照组儿童显著降低(P<0.01)，说明PNS活动期患儿免疫功能明显下降；其免疫的辅助功能降低，变态反应减弱导致的免疫损伤的发生，表现为CD4/CD8比值降低。PNS缓解期与对照组比较没有显著性（P>0.05）,说明PNS治疗效果良好，患儿免疫细胞功能有所改善，免疫力不断增强，对病情的预后有一定的帮助。通过探讨T淋巴细胞亚群在其中的异常分布，对该病的病情预后，疗效判定有一定的参考价值；提示可以通过改善细胞免疫来影响该病的进程。 在细胞因子作用方面，IL-6和TNF-在PNS的发病中同时起着重要的作用。研究结果表明，PNS活动期的IL-6和TNF-的水平显著高于对照组，IL-6水平升高尤为明显, 说明PNS发病机制中有多种细胞因子参与，IL-6是重要的炎症因子。缓解期IL-6的水平仍高于对照组,显示体内免疫细胞的活化仍存在,产生各种炎性因子与自身抗体继续在起作用,与病情的慢性迁延、复发有一定的关系。TNF-水平与对照组差别无显著意义。因此对IL-6和TNF-的检测，有助于监测肾小球疾病急性期或进展期4。IL-6和TNF-作为一种重要的炎症介质，它们之间的作用主要通过诱导、促进、刺激等发挥作用，作用于肾小球，促进肾小球系膜的增生及系膜基质的生成，导致肾小球硬化发生和系膜细胞的增殖与硬化。 在治疗上，可通过测量细胞因子的变化,间接反应淋巴细胞亚群的变化5。PNS患儿IL-6和TNF-升高和细胞免疫功能异常有关,它们的浓度变化可作为PNS活动、疗效的指标。参考文献：1陈英玉，马树俊，刘白，等FITC 直标单抗及应用免疫学杂志，1993，9(1):封32陈英玉，马树俊，刘白，等PHA对人扁桃体T细胞CD4和CD8抗原复合物表达的研究.免疫学杂志，1993，9(13)：1603王