胃癌中Pgp和LRP的表达及临床意义.doc

胃癌中P-gp和LRP的表达及临床意义【关键词】 ,胃,癌；,P-糖蛋白；,肺耐药蛋白摘要：目的：探讨P-糖蛋白（P-gp）和肺耐药蛋白（LRP）在胃癌中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化SABC法检测P-gp和LRP在80例胃癌组织和20例正常胃粘膜组织中的表达，探讨胃癌组织学类型、肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移对P-gp和LRP表达的影响。结果:P-gp和LRP在胃癌组织中的阳性表达率高于正常胃粘膜组织（P<0.05）；在高中分化腺癌中的表达显著高于低分化腺癌（P<0.05）；在浸润粘膜及粘膜下层组、肌层组、浆膜及浆膜外组表达率无显著差别（P0.05）；在有淋巴结转移组P-gp、LRP表达率显著高于无淋巴结转移组（P0.05）。结论:P-gp、LRP在胃癌原发性多药耐药中起重要作用，其表达与组织学类型、有无淋巴结转移有关而与肿瘤浸润深度无关，联合检测P-gp、LRP对于胃癌判断预后、制定化疗方案有一定的指导意义。关键词： 胃 癌； P-糖蛋白； 肺耐药蛋白Clinical Significance and Expression of P-gp and LRP in Gastric CarcinomaAbstract：Objective： To study the clinical significance and expression of glutathione-s-trannsferase(P-gp) and lung resistance protein(LRP) in gastric carcinoma tissue. Method： The expression of P-gp and LRP in 80 cases of gastric carcinoma and 20 cases of normal stomach tissues was detected by SABC immunohistochemical technique,its correlation with clinical pathologic characteristic of gastric carcinoma, including histological type,invasion degree and lymph node metastasis, was explored. Result： The positive expression rates of P-gp and LRP in gastric carcinoma were all higher than those in normal stomach tissues(P <0.05).The expression rates of P-gp and LRP in well-moderated differentiation adenocarcinoma were significantly higher than those in poor differentiation adenocarcinoma（P<0.05）. There was no significant differentiation between the expression rates of P-gp and LRP in the three groups invading mucoma and submocuma ,invading musculairs and invading serosa and beyond serosa（P>0.05）.The expression rates of P-gp and LRP in lymph metastasis were significantly higher than those in without lymph node metastasis（P<0.05）. Conclusion： P-gpand LRP play an important roles in the primary MDR of gastric carcinoma. The expression of them is associated with histological type and lymph node metaaastasis, while not associated with invased layer. The determination of P-gp and LRP may be useful for the estimatation of prognosis and the establishment of chemical therapy regimen in gastric carcinoma.Key words： Gastric carcinoma； P-glycopropein(P-gp)； Lung resistance protein(LRP) 胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤，化学治疗在胃癌的综合治疗中占有重要地位，而导致化疗失败最重要原因是肿瘤细胞对抗癌药物的耐药，其中多药耐药（multidrug resistance,MDR）机制是研究的重点14。肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)、P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）过度表达可能与多药耐药机制57有关。本文通过检测P-gp和LRP在正常胃粘膜、胃癌中的表达情况及其与胃癌病理因素的关系，旨在探讨其在胃癌多药耐药中所起的作用，有助于临床了解胃癌病人耐药情况、判断预后及指导术后化疗药物的选择。1 材料与方法1.1 一般情况：80例胃癌标本均取自2004年2月至2006年3月间在青岛大学医学院第二附属医院普外科接受胃癌根治性手术的患者。其中男性48例，女性32例；年龄2779岁。按照组织学类型分为高中分化腺癌22例、低分化腺癌32例及粘液癌26例；侵犯粘膜及粘膜下层3例，肌层15例，浆膜及浆膜外62例；有淋巴结转移58例，无淋巴结转移22例。全部患者手术前均未接受化疗和其他药物治疗。取材处为肿瘤组织中心部位及周边部位，同时取十二指肠球部溃疡术后胃壁组织、胃癌癌旁胃粘膜组织共20例作为正常对照组。1.2 免疫组化染色：采用SABC法，P-gp、 LRP试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司，严格按照试剂盒推荐的方法进行测定。免疫组化染色阴性对照以PBS代替抗，以已知正常胃粘膜组织标本作为阳性对照。1.3 结果判断：用光学显微镜进行观察，判定细胞膜、浆、核中存在粗细一致的棕黄色颗粒的细胞为表达阳性细胞， P-gp阳性颗粒分布于胞浆和/或胞膜, LRP阳性颗粒分布于胞浆。阳性细胞数25%为阳性，25%为阴性。光学显微镜400倍下计数200个癌细胞，计算阳性表达率。 1.4 统计学方法：实验资料的统计学处理通过SPSS10.0统计软件包进行。率的比较采用X2检验。设检验水平=0.05。2 结果2.1 P-gp和LRP在胃癌与正常胃粘膜组织的表达：由表1可见，P-gp和LRP在胃癌组织中的阳性表达率均高于在正常胃粘膜组织中的阳性表达率，具有显著统计学意义（<0.05）。表1 P-gp、LRP在胃癌与正常胃粘膜组织中的表达（略）注：与正常胃粘膜组比较有统计学意义P<0.052.2 胃癌P-gp和LRP表达与组织学类型、浸润深度、有无淋巴结转移的关系：GST-和LRP在高、中分化腺癌中的表达率显著高于低分化腺癌（P<0.05），在高、中分化腺癌中的阳性表达率与粘液癌相比无显著统计学意义（P>0.05），在粘液癌中的表达率与低分化腺癌相比无显著统计学意义（P>0.05）。见表2。表2 P-gp、LRP在胃癌中的表达与病理因素的关系（略） 注：与低分化腺癌比较有统计学意义；：与无淋巴结转移组比较有统计学意义3 讨论P-gp是MDR1基因编码跨膜糖蛋白，为ATP依赖性药物泵。P-gp在正常肝胆管、胰管、肾、肾上腺等具有分泌排泄功能的细胞均有表达，起着消除毒性化合物的作用，胃癌、乳腺癌、肺癌亦有较高表达。研究也发现P-gp的含量和细胞内药物的积聚量和耐药程度呈明显的相关性6，8。其耐药机制是在ATP参与下，P-gp发生能量依赖性变构，主动将扩散进入肿瘤细胞内的抗肿瘤药泵出细胞外，使细胞内药物浓度处于较低的非致死性水平，产生P-gp介导的MDR，即经典MDR9。由P-gp转运的药物通常为大分子量的亲脂化合物，包括长春新碱、喜树碱、VP-16、阿霉素、丝裂霉素、柔红霉素等，而5-氟脲嘧啶、顺铂、卡铂则与MDR1无关。本研究80例胃癌中，P-gp表达率71.25%，较Fujiiu10结果为高，提示P-gp表达是原发性胃癌MDR产生的因素之一。其中的高水平表达者一般会对上述可由P-gp转运的化疗药物耐药，而低水平表达和无表达者则反应良好。LRP是1993年Scheper11等在一株无P-糖蛋白表达的多种药物耐药的肺癌细胞株最先发现的一种与多药耐药有关的蛋白。它是人类的穹隆体主蛋白，参与胞核与胞质间物质交换和囊泡运输的调控，可能通过降低药物核质分布比率以降低核内药物浓度，及通过囊泡转运和胞吐将药物排出细胞外12。Izquierdo13等研究发现LRP在正常组织和肿瘤中广泛存在，其介导药物耐药非常广泛，包括一些P-gp所不能介导的耐药，如铂类及烷化剂。Kitazono14等发现LRP参与对阿霉素、依托泊甙、长春新碱等药物耐药。本研究表明LRP在胃癌中广泛表达（76.25%），提示LRP在胃癌MDR中亦具有重要作用。本研究结果显示， P-gp和LRP表达与胃癌浸润深度无关，而与组织学类型相关， P-gp、LRP在高、中分化腺癌中的表达高于低分化腺癌。提示高、中分化腺癌比低分化腺癌更易产生耐药，与临床低分化腺癌化疗效果较好相吻合。本研究同时发现P-gp和LRP的高表达与胃癌淋巴结转移有关。肿瘤的组织学类型、有无淋巴结转移是影响胃癌患者预后的重要因素，由于P-gp和LRP能反应肿瘤的这些生物学特性，所以此两种基因产物有可能成为判断胃癌预后有价值的指标。要提高胃癌的化疗效果，化疗药物的选择、配伍至关重要。P-gp高表达对亲脂性的生物碱类、蒽环类等药物耐药； LRP高表达对铂类、烷化剂等药物耐药。参照胃癌患者耐药基因具体表达情况，可以预测肿瘤对多种化疗药物的反应程度，有针对性地选择敏感药物，避开可能具有原发性耐药的药物，制定个性化的联合化疗方案，从而提高化疗效果，避免不必要的药物毒性对患者的损害。总之，联合检测胃癌P-gp和LRP的表达对于判断预后、指导化疗有重要意义，期待更多、更深入的研究来阐述胃癌的MDR基因及产物的表达和临床意义。参考文献：1 孙燕.肿瘤内科学.北京:人民卫生出版社,2001128-135.2 Kaye SB.Clinical drug resistance:the role of factors other than P-glycoprotein.Am Med,1995，9:40-51.3 Harrison DJ.Molecular mechanisms of drug resistance in tumorsJ Pathol,1995，175:7-144 Woodhouse JR.The genetic basis of resistance to cancer chemotherapy.Ann Med, 1995,27:157-164.5 易晓芳,丰有吉.肿瘤多药耐药机制的研究.中国实用妇科与产科杂志,2004,20:185-187.6 Labialle S,Gayet L,Marthinet E,et al.Transcriptional regulators of the human multidrug resistance 1 gene:recent views.Biochem Pharmacol，2002,64:943-9387 Borst P,Evers R.A family of drug transporters:the multidrug resistance associated proteins.Natl Cancer Inst,2000,92:1295-1302.8 Chia-Hung K,Shis-Ch.P-Glycoprotein multidrug resistance-related protein pressions in relation to techetiumj-99m methoxyisobutylisonitrile scintimammography findings.Cancer Research,2001,61:1412-1421.9 Gollesman MM,Pastan I.Biochemistry of multidrug resistance mediated by the multidrug transpor.er. 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