乙酸局部注射治疗裸鼠移植性肝癌.doc

乙酸局部注射治疗裸鼠移植性肝癌 作者：闻勤生，赵永锋，贾战生，焦成松 【关键词】 肝肿瘤 关键词: 肝肿瘤;乙酸;裸鼠 摘 要:目的 观察局部注射乙酸对裸鼠移植性肝癌的治疗作用，为临床应用此方法治疗肝癌提供实验依据. 方法 建立裸鼠移植性肝癌模型，观察治疗后肿瘤体积、光镜及电镜变化. 结果 在第4次注射乙酸前，裸鼠移植瘤消失，疗效优于乙醇注射组（P<0.01），且无明显毒副作用. 结论 乙酸可用于肝癌的局部注射治疗，有较好的疗效. Keywords:liver neoplasms;acetic acid;nude mice Abstract:AIM To observe the effects of local acetic acid in-jection on hepatocellular carcinoma.METHODS By estab-lishing a model of transplanted tumor in nude mice，the changes of size and histology of tumor were observed after in-jecting acetic acid，ethanol and saline.RESULTS Trans-planted hepatocellular carcinoma disappeared before the fourth injecting acetic acid.The treatment effect of acetic acid injection on hepatocellular carcinoma was superior to ethanol injection.There were no significant toxic and side effects af-ter acetic acid injection.CONCLUSION Acetic acid can be used for local injection therapy on hepatocellular carcinoma. 0 引言 原发性肝癌是危害人类健康的常见恶性肿瘤之一，我国的肝癌发病数占世界总发病数的43.7%.由于肝癌进展快，多在肝硬化基础上发生，手术切除率低，故非手术疗法受到人们的极大重视.为了提高肝癌非手术治疗的效果，国内外学者做了很多探索和努力，寻找新药物，开辟治疗新途径.我们采用300mL・L-1 乙酸局部注射治疗Balb/c nu/nu裸鼠移植性肝癌（简称移植瘤），并与乙醇等局部注射治疗方法对比，旨在为临床应用此方法治疗原发性肝癌提供实验依据. 1 材料和方法 1.1 材料 无水乙醇及乙酸（西安精细化工厂提供，分析纯）、RPMI-1640细胞培养液（美国Gibco公司）、CO2 孵箱、倒置显微镜、透射电子显微镜（日本JEM-200EX）.Balb/c nu/nu裸鼠18只，46wk龄，体质量（202）g，雌雄兼有，在SPF条件下饲养，第四军医大学实验动物中心提供. 1.2 方法 人肝癌细胞（本校病理学教研室提供）在37，含50mL・L-1 CO2 孵箱内培养，于含100mL・L-1 小牛血清的RPMI-1640培养液中贴壁生长，以2.5g・L-1 胰酶消化液消化传代培养.收集培养的人肝癌细胞，调整细胞浓度为107 ・L-1 ，取0.1mL细胞悬液注入裸鼠右大腿背侧皮下，20d后肿瘤平均直径（肿瘤长径和横径之和的均值）为1.63cm，形成皮下移植瘤模型1 .将已接种人肝癌细胞的裸鼠随机分成乙酸组、乙醇组及生理盐水组，每组6只，用微量加样器在肿瘤组织中点局部注射给药，于移植后20d开始注射，每隔3d注射1次，共注射4次.乙酸组每只裸鼠每次注射300mL・L-1 乙酸0.15mL，乙醇组每次注射无水乙醇0.15mL.盐水组每次注射生理盐水0.15mL.于移植后33d处死裸鼠，每次注射前及处死前用精密卡尺测量瘤体横径和长径.所有裸鼠均做系统剖检，取肿瘤、心肺肝肾组织作病理检查，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察细胞和组织结构的变化.将肿瘤组织以戊二醛固定，常规脱水包埋，制成超薄切片，在透射电镜下观察肿瘤细胞超微结构的变化.统计学处理应用本校统计教研室SPCM软件处理. 2 结果 乙酸组及乙醇组的裸鼠生长良好，生理盐水组的裸鼠因移植瘤进行性增大而消瘦明显. 2.1 移植瘤体积的变化（Tab1，Fig1） 乙酸组及乙醇组的疗效均明显优于生理盐水组（P<0.01），但乙酸组的疗效又显著优于乙醇组（P<0.01）. 2.2 瘤体的病理学改变 光镜下生理盐水组瘤组织生长活跃（Fig2），电镜下各种细胞器结构良好.乙醇组光镜下可见大片的出血坏死、纤维组织及散在的肝癌细胞团（Fig3），电镜下可见细胞质内各种细胞器破损、核膜破裂、核染色质固缩外溢.乙酸组光镜下可见大量上皮细胞及纤维组织，未见肝癌细胞（Fig4）.各组裸鼠的心肺肝肾组织切片均未见异常. 表1 裸鼠移植瘤局部治疗前后瘤体直径变化 3 讨论 对不能手术切除的肝癌，目前多首选肝动脉栓塞或灌注治疗，对体积较小的肝癌，首选无水乙醇局部注射治疗2 .局部注射无水乙醇后，由于细胞的脱水和蛋白变性而导致肿瘤组织凝固性坏死，继而纤维化.有报道d<3cm的肝癌可经局部注射无水乙醇而治愈.但无水乙醇穿透组织的能力有限，需要多次较大量注射才能发挥疗效.此外，肿瘤组织内多有纤维分隔，质地不匀，影响乙醇扩散.不少肝癌发现时已较巨大，更难用注射乙醇的方法治疗. Ohnishi等3 首先报道用作用更强的乙酸局部注射治疗小肝癌，1996年分析了91例经乙酸注射治疗的小肝癌的预后，结果所有肿瘤都逐渐缩小，其中50%的肿瘤超声未探测到，1，2，3，4，5a的存活率分别为95%，87%，80%，63%和49%4 .乙酸除具有与乙醇相似的细胞脱水、蛋白凝固和血管闭塞作用外，在肿瘤组织中的浸润扩散能力及溶解穿透肿瘤组织内的纤维分隔的能力强于乙醇5-8 ，因而疗效优于无水乙醇，注射次数少于无水乙醇. Tanaka等 9 报道无水乙醇注射d<3cm的肝癌可达到治愈.本实验注射4次无水乙醇后仍有少量癌组织残留，可能与皮下移植瘤注射药物后缺乏周围非癌组织的压迫作用而外溢，或疗程不够有关.但同样条件下，注射3次乙酸后，癌组织即全部消失，表明乙酸疗效确实优于无水乙醇.注射乙酸后，裸鼠未出现明显异常反应，心肝肾肺等重要脏器未见明显异常改变，表明乙酸局部注射治疗安全可靠，可在临床应用.但如何掌握注射剂量、间隔时间及次数仍需进一步观察.此外，目前临床上发现的肝癌多数已达中晚期，体积大，无法手术，如何将乙酸局部注射治疗与介入治疗相配合、局部注射乙酸对大肝癌的疗效如何、大剂量注射乙酸后是否会出现副作用等仍需进一步探索. 参考文献: 1Mi L，Chen ZL，Xu LQ，Qi P，He FC，Liu CG，Bian HJ.Es-tablishment and application of nude mice model of HHCC J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1996;17（2）:107-108. 2Lee MJ，Muelle PR，Dawson SL，Gazella SG，Hahn PF，Gold-berg MA，Boland GW.Percutaneous ethanol injection for the treatment of hepatic tumors J.Am J Roentgenol，1995;164（1）:215-220. 3Ohnishi K，Ohyama N，Ito S，Fujiwara K.Small hepatocellular carcinoma:Treatment with US-guided intratumoral injection of acetic acid J.Radiology，1994;193（3）:747-752. 4Ohnishi K，Nomira F，Ito S，Kenji F.Prognosis of small hepa- tocellular carcinoma（less than3cm）after percutaneous acetic acid injection:Study of91cases J.Hepatology，1996;23（5）:994-1002. 5Ohnishi K，Yoshioka H，Ito S，Kenji F.Treatment of nodular hepatocellular carcinoma larger than3cm with ultrasound-guid-ed percutaneous acetic acid injection J.Hepatology，1996;24（6）:1379-1385. 6Liang HL，Yang CF，Pan HP，Lai KH，Cheng JS，Lo GH，Chen CK，Lai PH.Small hepatocellular carcinoma:Safety and efficacy of single high-dose percutaneous acetic acid injection for treatment J.Radiology，2000;214（3）:769-774. 7Hou C，Chen SC，Chang WY，Chen CH.Comparison of necrot-ic characteristics and benefits between50%acetic acid and pure ethanol in local hepatic injection:A study in rats J.Kao Hsi-ung I Hsueh Ko Hsueh Tsa Chih（The Kaohiung J Medi Sci），1999;15（7）:414-418. 8Ohnishi K.Comparison of percutaneous acetic acid injection and percutaneous ethanol injection for smalll hepatocellular carcino-ma J.Hepatogastroen