兽药残留分析方法概述报告.ppt

兽药残留分析方法概述报告,报告人: 单吉浩,报告内容, 兽药残留分析方法的特点 方法建立步骤 前处理方法 发展与展望,兽药残留分析方法的特点 ,1、待测物浓度低，浓度波动范围大 多数为ug/kg_mg/kg甚至更低的水平 浓度变化范围达1：1000以上 2、样品基质复杂，干扰物质多 生物材料 种属 器官 药物自身代谢 动物日粮 环境污染 3、以各种仪器分析方法为主,方法建立步骤 -分析原理,原理： 1）分离 一般占整个过程的90%以上 （1）1个提取步骤 将待测物从样品中释放进入溶液状态 （2）1-3个净化步骤； 除去部分干扰杂质 （3）1个分离步骤（分辨） 仪器在线分离过程 2）检测 紫外可见（UV/Vis)、红外（IR）、荧光（Fluor）、核磁共振（NMR）、质谱（MS）等,方法建立步骤 -分析原理,采样与样品制备（样品预处理） 提取 净化 浓缩 衍生化 分辨 检测,方法建立步骤 ,1、文献检索 获得某些信息或启示 站在巨人的肩膀上 了解待测物的理化性质（极性、溶解性、酸碱性、稳定性、熔点或蒸汽压、波谱学性质等） 体内过程（代谢物、组织分布、排泄途径和药动学性质） 药理毒学（理残留毒性、MRLs、WTD） 专业期刊： 分析化学、色谱等国内外 丛书或手册 药典,方法建立步骤 ,2、建立测定方法 紫外可见（UV/Vis)、红外（IR）、荧光（Fluor）、核磁共振（NMR）、质谱（MS）等 3、建立样品处理方法 最为重要的步骤 提取、净化、浓缩、衍生化 4、标准曲线（定量手段） 外标法 内标法（质谱一般用待测物的稳定同位素标记物）,方法建立步骤 ,5、稳定性试验 标准溶液 样品 温度、时间、环境 6、分析方法的评价 标准添加样品进行 至少3个浓度（10MRL、1MRL、0.1MRL） 每个浓度4次重复,方法建立步骤 ,6、分析方法的评价 （1）精密度（precision) RSD，（变异系数CV） 重复性：批内精密度、批间精密度 重现性：不同试验条件下（实验室、人员、仪器、试剂等）独立测定值之间 -与待测物浓度有关（参见相关部门规定范围） 精密度的要求： 待测物浓度(mg/kg) 批内 批间 100 1.5 2.3 10 7 11 1 11 16 0.1 17 26 0.01 21 32 0.001 30 45 0.0001 43 64,方法建立步骤 ,（2）准确度（accuracy) 通常采用添加回收率来表示 浓度（ug/kg) 允许范围（%） 小于1 50-120 1-10 60-120 10-100 70-110 大于100 80-110,方法建立步骤 ,6、分析方法的评价 （3）检测限与定量限 检测限:LOD（limit of detection) 一般LOD0.1MRL LOD=B+3SD 不作定量可靠性要求（精密度、回收率等） 定量限：LOQ（limit of quantitation) 一般LOD0.2MRL LOD=B+10SD 一般CV 20%，回收率70%,方法建立步骤 ,6、分析方法的评价 （4）线性范围 R0.9900，R2 （5）选择性 内源性物质的干扰 代谢物的干扰 其他药物的干扰 （6）与参比方法的分析结果比较 （7）实验室协同研究（collaborative study) -实际样品、添加样品 -一般3个实验室，影响方法至少8个 -考虑地域、气候、部门、行业等 7、分析方法报告 8、分析质量监控,前处理方法的建立,1、概述 目的：分离-检测 基本内容： 提取、净化、浓缩、衍生化 2、样品预处理 采集 制备 贮存,前处理方法的建立,3、提取方法 1） 样品种类 尿液、血浆、胆汁、奶、蛋、动物组织（肉、肝、肾等） 2）提取溶剂 -相似相溶原则 -一般采用乙腈、甲醇和丙酮等水溶性溶剂 -混合溶剂，增加选择性,前处理方法的建立,3）提取方法 -组织捣碎法（homogenization) -振荡法(shaking) -索氏提取法(Soxhlet extraction) -超声波辅助提取（SAE） -超临界流体萃取（SFE） -强化溶剂萃取（ASE） -微波辅助萃取（MAE） -消解法：酸消解、碱消解、酶消解 -其他技术：冷冻干燥、制备干混物、起泡分离,前处理方法的建立,4、净化方法 1）液液萃取LLE 2）固相萃取SPE 3）固相微萃取（SPME） 4）制备色谱法（HPLC、TLC） 5）凝胶渗透色谱法（GPC） 6）吹扫-捕集（P&T） 7）膜分离技术 8）浸透限制固定相（RAS） 9）基质固相分散技术（MSPD） 10）免疫亲和柱（IAC） 11）分子印迹技术（MIPs) 12)其他技术,前处理方法的建立,5、浓缩与富集 -旋转蒸发浓缩 -气流吹蒸法 -浓缩器浓缩 -真空离心浓缩 浓缩过程组分最容易损失,前处理方