土壤中分解尿素的细菌的分离与记数2》(课件.ppt

培养基配方,在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。,选择培养基,选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞.使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.,加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物,1直接计数法： 最常用显微镜直接计数法。 先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。,测定微生物数量的方法：,背景知识,2间接计数法： 最常用稀释平板计数法。,土壤中分解尿素的细菌的分离与记数2,实验设计,土壤中分解尿素的细菌的分离与记数,土壤中某样品细菌的分离与计数,从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。,实验步骤,1土壤取样,制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基，准备好无菌试管和移液管。,实验步骤,2.制备培养基,制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基，准备好无菌试管和移液管。 注：每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。选用稀释倍数为103107的稀释液。,实验步骤,2.制备培养基,为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？,因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。,测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释液；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释液。,注： 样品的稀释,将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中,充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL水的无菌试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107至103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。,实验步骤,3.微生物的培养与观察,将涂布好的培养皿放在30下培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否变红。,不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在3037的温度下培养12d；放线菌一般在2528的温度下培养57d；而霉菌一般在2528的温度下培养34d。,注：,一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。,EMB培养基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属光边的菌落,当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。,实验步骤,4.细菌的计数,每克土壤样品菌数 = 某稀释倍数的菌落平均数稀释倍数细菌培养时所用的稀释液体积,实验录像,一无菌操作 1.取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2.应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。,操作提示,二做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 三规划时间,1.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）( ) A. 2.34108 B. 2.34109 C. 234 D. 23.4,练一练,1.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）( ) A. 2.34108 B. 2.34109 C. 234 D. 23.4,练一练,2.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比 （ ） A.比实际值高 B.比实际值低 C.和实际值一致 D.比实际值可能高也可能低,2.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比 （ ） A.比实际值高 B.比实际值低 C.和实际值一致 D.比实际值可能高也可能低,下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是A. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、琼脂、水 C. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、 尿素、琼脂、水 D. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水,练一练,下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是A. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、琼脂、水 C. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、 尿素、琼脂、水 D. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水,练一练,1关于灭菌和消毒的不正确的理解是 A消毒和灭菌实质上是相同的 B灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 C接种环用烧灼的方法灭菌 D常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法,A,2.将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱的目的是（ ） A.