XBP1调控胶质瘤细胞氧化应激的实验研究.ppt

XBP1调控胶质瘤细胞氧化应激的 实验研究,刘耀华 赵世光 陈晓丰 梁元 郑秉杰,哈尔滨医科大学附属第一医院 神经外科,Cancer Cell 14, December 9, 2008,Catalase SOD,Exogenous ROS: The last straw breaks the camels back.,The Achilles Heel of cancer cells(Cancer Cell. 2008;14(6):427-9 IF 24.962),肿瘤，包括胶质瘤可以产生高水平活性氧； 肿瘤细胞的Akt过度激活，决定了其对活性氧敏感; 大量活性氧可以杀伤肿瘤，很多化疗药物为活性氧诱导剂; 调控胶质瘤细胞氧化应激水平可能对其治疗具有积极意义。,活性氧（ROS）与胶质瘤,研究背景,Hypoxia ROS Nutrients Deprivation,Oxidative Stress,ER Stress,Protective molecules,?,研究背景：内质网应激、氧化应激、XBP1,CCAAT,antioxidant genes (Catalase, SOD1, etc),ERSE,CCAAT,transcripts,target genes,transcripts,transcripts,?,实验设计,胶质瘤细胞系U251MG进行RNA干扰，抑制XBP1基因表达后比较细胞对外源性活性氧H2O2的敏感性； 流式细胞技术检测ROS蓄积和线粒体膜电位； 检测比较细胞内抗氧化分子表达水平； 将细胞进行XBP1基因过表达，观察能否起到相反的效果； 应用启动子突变分析探讨XBP1促抗氧化分子转录活性的机制。,实验结果一,对H2O2的敏感性比较,H2O2处理后trypan blue检测细胞生存情况 *P0.05, *P0.01,实验结果一,Random,SiXBP1,13.0,流式细胞技术检测线粒体膜电位（MMP）,对H2O2的敏感性比较,实验结果二,抑制XBP1特异性增强细胞对氧化应激的敏感性,对活性氧诱导剂PTL的敏感性比较（*P0.05, *P0.01),实验结果二,抑制XBP1特异性增强细胞对氧化应激的敏感性,对其它2种化疗药物诱导的细胞死亡没有明显区别,VP16,FK228,实验结果二,XBP1缺失特异性增强细胞对氧化应激的敏感性,C,PTL,FK228,VP16,实验结果三,抑制XBP1细胞内活性氧（ROS）明显增高,Random,DCFH-DA孵育细胞，流式细胞技术检测细胞内ROS堆积： *P0.05, *P0.01,24.9,12.1,(4.6),(3.8),SiXBP1,实验结果三,抑制XBP1细胞内活性氧（ROS）明显增高,实验结果四,XBP1与细胞抗氧化分子的表达,抑制XBP1后细胞中抗氧化分子的mRNA水平 (*P0.01),实验结果四,XBP1与细胞抗氧化分子的表达,SOD1,TRX1,Catalase,GAPDH,C 1h 2h 3h,C 1h 2h 3h,Random,SiXBP1,C 3h 6h 9h,Catalase,14-3-3,C 3h 6h 9h,H2O2处理细胞后未见Catalase、SOD1和TRX1表达变化,Random,SiXBP1,实验结果四,XBP1与细胞抗氧化分子的表达,Catalase特异性抑制剂AT预处理的影响,Catalase,U251 XBP1过表达,实验结果五,XBP1可增强Catalase转录活性,XBP1,b-actin,SOD1,H2O2,mock,XBP1,实验结果六,XBP1可增强Catalase转录活性,荧光素酶（luciferase）活性分析,实验结果六,XBP1可增强Catalase转录活性,Catalase启动子突变,实验结果七,XBP1促进NF-Y与Catalase启动子结合,凝胶电泳迁移分析（EMSA）,实验结果七,XBP1促进NF-Y与Catalase启动子结合,染色质免疫沉降,小 结,CCAAT,Catalase gene,CCAAT,Catalase,Cat