《尿液化学检验》PPT课件.ppt

尿液化学检验,上海交通大学医学院附属第三人民医院检验科 陈华云,Chemical examination of urine,2.pH试纸法:,1.试带法:,模块有甲基红(pH4.6-6.2),溴麝香草酚蓝(pH6.0 - 7.6). 变色范围：黄5.0-绿7.0-蓝9.0，仪器或肉眼判读,多种混合指示剂(棕红色-深黑色), 与标准色板比较。,（一）测定原理,一、尿酸碱度测定（urine acidity）,3.指示剂法:,5.pH计法:,4.滴定法:,0.4g/L溴麝香草酚蓝滴于尿液黄-酸性,绿-中性,蓝-碱性. 受黄疸尿及血尿的影响.,pH电极.精确度较高,需仪器,烦琐,少用.,标准NaOH滴定,测总酸度.复杂,少用,（一）测定原理,一、尿酸碱度测定（urine acidity）,（二） 尿酸度测定的方法学评价,标本新鲜; 操作规范; 试带保存; 试剂配制标准; pH计校准.,（三）质量保证,一、 尿酸碱度测定（urine acidity）,正常饮食 晨尿pH：5.56.5，平均6.0; 随机尿pH： 4.68.0； 可滴定酸度： 2040mmol/24h尿,（四）参考值,一、 尿酸碱度测定（urine acidity）,(1)生理变化: 食物影响：蛋白类酸性; 果蔬类碱性. 碱潮:餐后胃酸,肾泌H+,Cl-重吸收 尿pH一过性. 生理活动：运动,饥饿,出汗,应急,夜间入睡呼吸 变慢体内酸性代谢产物pH.,（五）临床意义,一、 尿酸碱度测定（urine acidity）,(2)病理变化: 酸性尿：酸中毒,高热,慢性肾炎,白血病, 糖尿病酮症酸中毒,低钾血症,痛风 碱性尿：碱中毒,呕吐,尿路感染,型肾 小管性酸中毒,原发性醛固酮增多症,一、 尿酸碱度测定（urine acidity）,（五）临床意义,（3）药物影响： NaHCO3,K2CO3,枸橼酸钠碱化尿液防止酸性结晶(尿酸及胱氨酸)形成;促进酸性药物排泄. 氯化钙(铵、钾)、稀盐酸酸化尿液防止碱性结晶(磷/碳/草酸钙)形成;促进碱性药物排泄;预防细菌生长. 溶血时口服NaHCO3碱化尿液促进溶解及排泄Hb.,一、 尿酸碱度测定（urine acidity）,（五）临床意义,表5-6 常见影响尿液pH的因素,表5-6 常见影响尿液pH的因素,二、尿液蛋白质检查,健康人尿液中蛋白含量很少，定性为阴性。,尿液中蛋白质含量150mg/24h 或尿中蛋白质浓度100mg/L 蛋白定性为阳性，即 proteinuria.,1.蛋白尿 (proteinuria, PRO) ,(一)概述,二、尿液蛋白质检查,2.蛋白尿形成的原因,(1)肾小球滤过膜破坏或电荷屏障改变,(2)肾小管重吸收障碍,(3)溢出性,(4)肾组织性,(一)概述,【原理】 指示剂的蛋白质误差原理 溴酚蓝阴离子,(1)干化学试带法,【评价】,肉眼和仪器；对清蛋白灵敏(70-100mg/L)， 与Hb/Mb/BJP基本不反应； 简便快速，易标准化，应用普遍。 健康普查、肾病筛查。,pH3.2,pro+复合物 (淡黄绿色兰色),(二) 尿蛋白定性检查,1.测定原理与评价,表5-7 试带法检测的干扰因素及评价,(二) 尿蛋白定性检查,【评价】,(2)磺基水杨酸法,【原理】 pro+ + 磺基水杨酸根- 不溶性蛋白沉淀,简便快速，灵敏度高0.05-0.1g/L； 与清/球/本周蛋白反应；假阳性。 干化学法的参考方法，NCCLS推荐的 确证实验。,H+,(二) 尿蛋白定性检查,1.测定原理与评价,1,尿2-3ml+试剂0.1ml，立即混匀，1min内观察结果.,(2)磺基水杨酸法,【干扰因素】,(二) 尿蛋白定性检查,1.测定原理与评价,阴性()：不浑浊 微量()：轻微浑浊，PRO约0.1-0.15g/L 弱阳性()：明显白雾状，PRO约0.2-0.5g/L 阳性(2)：浑浊，明显颗粒，PRO约0.6-2.0g/L 强阳性(3)：大量絮片沉淀，浑浊，PRO约2-5g/L 最强阳性(4)：凝块，大量絮片沉淀，PRO5g/L,(3)加热乙酸法,【原理】加热PRO变性凝固， 加酸pH接近PRO等电点; 溶解碱性盐类结晶.,【评价】,(二) 尿蛋白定性检查,特异性高，干扰少，灵敏度0.15g/L； 与所有蛋白发生沉淀反应。 经典准确的、定性的确证实验.,1.测定原理与评价,(3)加热乙酸法,【干扰因素】,(二) 尿蛋白定性检查,1.测定原理与评价,定性：阴性,2.参考值,干化学测定尿蛋白原理,R-CH,NH2,COOH,H+,R-CH,NH3+,COOH,+,指示剂,显色,指示剂蛋白误差原理,pH 3.6,(二) 尿蛋白定性检查,(1)检测前：患者正常饮食;,(2)检测中： 室内质控；阳性及阴性对照。 试带法：按规程操作，浸渍时间适宜；阴凉 干燥；有效期。 加热乙酸法：盐类浑浊假阳性； 遵循加热-加酸-再加热； 5%乙酸为尿液的1/10. 加热乙酸法和磺基水杨酸法：调尿液pH为5-6,3.质量保证,(二) 尿蛋白定性检查,(3)检测后：报告审核;结果与临床不符，分析原因,(1)加热乙酸法： 加酸要合适; 无盐或低盐饮食，先加12滴饱和NaCL; PRO极少时，加酸后出现沉淀。,(2)磺基水杨酸法： 尿液浑浊，应先离心或过滤; 强碱性尿加5%乙酸数滴; 碘造影剂、青霉素及尿酸或尿酸盐假阳性。,(3)干化学法：尿液新鲜 超大剂量青霉素假阴性。,3.质量控制,(二) 尿蛋白定性检查,(1)沉淀法,【原理】 pro+生物碱沉淀物,【评价】,(三) 尿蛋白定量检查,费时、准确性差，已淘汰,H+,1.测定方法与评价,【评价】,(2)双缩脲比色法,【原理】 钨酸沉淀蛋白质，双缩脲法定量。,蛋白质定量的经典方法。,(三) 尿蛋白定量检查,1.测定方法与评价,【原理】,(3)染料结合法,【评价】,后两种灵敏高，简便快速，呈色稳定，干扰少，但易污染。 第一种烦琐，沉淀不完全-影响结果。,(三) 尿蛋白定量检查,1.测定方法与评价,蓝色 （600nm比色）,【原理】 单克隆抗体技术,(4)免疫法,【评价】,定量：0.15g/24h 0.1g/L,灵敏度和特异性更高，临床普遍应用,【原理】 SDS-PAGE、琼脂糖电泳,(5)电泳法,【评价】,灵敏度和特异性更高,(三) 尿蛋白定量检查,1.测定方法与评价,2.参考值,(三) 尿蛋白定量检查,定量：0.15g/24h 0.1g/L,2.参考值,(1)结合灵敏度和线性范围选择方法；,(2)离心取上清,(3)冷藏保存,(4)更换试剂重做标准曲线,3.质量控制,(三) 尿蛋白定量检查,(1)生理性 蛋白尿,功能性,(2)病理性 蛋白尿,肾后性,肾 性,肾小球性: 肾小管性: 混合性:,溢出性:,肾前性,体位性,偶然性:血、脓、粘液,Alb,2、1-M,Alb、2-M,Hb,Mb,BJP,TH糖蛋白,+；0.5g/24h；青少年,+，卧床后(-)；青少年,(三) 尿蛋白定量检查,4.临床意义,组织性:,蛋白尿的选择性,肾小球滤过膜损伤程度及尿中蛋白组分不同:,选择性蛋白尿：,非选择性蛋白尿：,MW49万,Alb,Tf;AT,前Alb. 3+4+;3.5g/24h;肾病综合症.,MW9万,Ig(G,A,M),C3；Alb,T-H. 1+4+;0.53.0g/24h. 持续肾衰；原/继发肾小球疾病.,(三) 尿蛋白定量检查,肾小球性：肾小球肾炎+，很少+； 肾小管性：+，很少+. 混合性性：肾病综合征+. 组织性： +，很少+.,(三) 尿蛋白定量检查,三、尿液葡萄糖检查,正常人尿内含糖量极少，0.565.0 mmol/24h，定性试验阴性。,糖尿(glucosuria, GLU),血糖8.88mmol/L，肾糖阈值，或近端肾小管重吸收功能障碍时尿糖，定性试验阳性的尿液.,(1)试带法,【原理】 葡萄糖+H2O 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸内酯+H2O2 H2O2+色素原 过氧化物酶 有色物质+ H2O,（glucose oxidase-peroxidase method）,【评价】,特异性强,灵敏度高(1.672.78mmol/L 弱阳性),简便快速,自动分析.,1.测定方法与评价,(一) 尿糖定性检查,(1)干化学试带法,【干扰因素】,葡萄糖氧化酶试带法,1.测定方法与评价,(一) 尿糖定性检查,(2)班氏法(Benedict法),【原理】 Cu2+-Cu+ 兰色 黄色至砖红色.,【评价】,缺乏特异性,灵敏度低(8.33mmol/L弱阳性),-CHO,OH,1.测定方法与评价,班氏试剂1ml,煮沸不变色+尿2滴煮沸1-2min 冷却后观察.,(一) 尿糖定性检查,(2)班氏法(Benedict法),【干扰因素】,1.测定方法与评价,(一) 尿糖定性检查,(3)薄层层析法(thin-layer chromatography, TLC),【评价】,鉴别、确证尿糖种类的特异、灵敏的方法；操作烦琐，很少应用。,(一) 尿糖定性检查,1.测定方法与评价,【原理】,吸附剂作固定相；有机溶剂作流动相；两相间作相对移动。 各组分流动相固定相反复吸附-解析-亲和作用展开分离。,比移值（Rf）=斑点距离/溶剂距离,假阳性多,(1)检验前：,(2)检测中：,容器清洁，不含氧化性物质；一次性尿杯. 消除VitC干扰：尿液煮沸几分钟.,(3)检测后：,报告审核,结果不符查找原因; 与临床沟通.,2.质量控制,(一) 尿糖定性检查,室内质控. 试带法注意反应时间和温度;阴凉干燥,保质期. 班式法遵守操作规程,注意判读时间.,定性：阴性,3.参考值,(1)检验前质量控制,(2)试带法：,试带避光干燥保存； VitC,高SG尿,酮尿,左旋多巴假阴性; 尿液污染过氧化物或次氯酸盐假阳性.,(3)班氏法：,VitC,青/链霉素,头孢菌素水杨酸盐,氨苄西林假阳性； 大量铵盐，预先加碱煮沸去氨后再检验； PRO0.5g/L,加热乙酸法去蛋白取滤液检验; 大量尿酸盐绿色浑浊灰蓝色;,2.质量控制,(一) 尿糖定性检查,【测定方法】,葡萄糖氧化酶法,己糖激酶法,(二) 尿糖定量检查,【评价】,测血糖方法。药物和尿液中的自然物质对己糖激酶法几乎无干扰；对葡萄糖氧化酶法有不同程度的干扰。,2.参考值：,0.565.0 mmol/L,1.测定方法与评价,非葡萄糖尿,葡萄糖尿,血糖增高性糖尿,血糖正常性糖尿-肾性,糖尿病-代谢性 内分泌性糖尿 饮食性糖尿 应激性糖尿 饥饿-糖耐量糖尿,糖尿,乳糖尿：,半乳糖尿,果糖尿,肝功障碍,哺乳期, (三)临床意义,暂时性,(胰岛素分泌不足),饥饿-糖耐量糖尿：见于晚期食道肿瘤、低营养状态和妊娠剧吐者 做糖耐量试验。,表5-10 内分泌性糖尿常见原因及检查结果,表5-11 血糖正常性糖尿常见原因及检查结果,后天获得性肾性糖尿：慢性肾盂肾炎、药物中毒、肾病综合症,血糖的来源与去路,单糖,转化,四、 尿液酮体定性检查,-羟丁酸78% 乙酰乙酸20% 丙酮2%,脑,心脏,肌肉,1.酮体(ketone bodies,KET),尿酮体定性为阳性，即ketonuria.,正常血浆含量 24mg/L,正常24h尿含量:乙酰乙酸25mg, -羟丁酸9mg, 丙酮3mg,(2)乙酰乙酸测定法(Gerhardt法), 2.检测原理,四、尿液酮体定性检查,(1)亚硝基铁氰化钠法,乙酰乙酸+氯化高铁乙酰乙酸铁 (赭/酒红色),表5-12 基于亚硝基铁氰化钠的尿酮体检测方法,3.方法学评价,四、尿液酮体定性检查,片剂法 本法对乙酰乙酸的灵敏度50100mg/L，丙酮为200250mg/L,Rothera法 本法对乙酰乙酸的灵敏度1050mg/L，丙酮为100250mg/L,Gerhardt法 本法对乙酰乙酸的灵敏度250700mg/L,表5-13 尿酮体不同检测方法灵敏度比较,3.方法学评价,【灵敏度】,四、尿液酮体定性检查,【干扰因素】,3.方法学评价,四、尿液酮体定性检查,(1)检测前：标本新鲜,及时检测；密闭冷藏/冷冻,(2)检测中：阴阳对照； 加入少量冰乙酸防止肌酐、肌酸 过多引起的假阳性 试带阴凉干燥，保质期。,4.质量保证,四、尿液酮体定性检查,(3)检测后：注意方法灵敏度. 不同病程的酮体成分的影响.,(1)早期诊断：糖尿病酮症酸中毒昏迷,四、尿液酮体定性检查, 5.临床意义,酮体阳性见于:,鉴别:低血糖、心脑血管病酸中毒、高血糖渗 透性糖尿病昏迷酮体不增高. 糖尿病酮症者肾功能严重障碍而肾阈值 尿酮体-消失.,糖尿病酮症酸中毒缓解时,-羟丁酸乙酰乙酸,分析结果时必须密切结合临床.,(2)治疗监测: 糖尿病酮症酸中毒早期主要为-羟丁 酸; 测定血-羟丁酸有利于早期诊断., 5.临床意义,酮体阳性见于:,四、尿液酮体定性检查, 5.临床意义,酮体阳性见于:,四、尿液酮体定性检查, 5.临床意义,酮体阳性见于:,(5)药物影响：降糖药抑制细胞呼吸作用,(3)非糖尿病性酮症：感染、严重呕吐 腹泻、长期饥饿、禁食、子痫,(4)中毒:氯仿、乙醚、磷中毒,五、尿液胆红素(BIL)定性检查,1.胆红素代谢,(2) 氧化法,(1)试带法（重氮法）,胆红素+二氯苯胺重氮盐-紫红色偶氮化合物,强酸,2.检测原理 ,五、尿液胆红素定性检查,Harrison法,Smith碘环法,胆红素+碘胆绿素(绿色)（接触面）,(1)试带法：简单，分析仪，定性筛检 2,4-二氯苯胺试带灵敏度5-10mg/L 二氯重氮氟化硼酸盐试带灵敏度2-5mg/L,3.方法学评价,五、尿液胆红素定性检查,【干扰因素】,Harrison法:烦琐,灵敏度高(0.9umol/L)/0.5mg/L,3.方法学评价,五、尿液胆红素定性检查,(2) 氧化法:,Smith碘环法:简便,灵敏度低(17.1umol/L)，少用,【干扰因素】,(1)检测前：标本新鲜,棕色瓶避光保存.,(2)检测中： 试带避光干燥；规范，高低质控，定检。 Harrison法:加入FeCl3后未见足够的钡盐沉淀, 可加适量硫酸铵。,五、尿液胆红素定性检查,4.质量控制 ,5.参考值,(3)检测后：试带法定性，可疑用Harrison法验证,阴性,(1)肝细胞性黄疸,(2)梗阻性黄疸,hepatocellular jaundice,obstruct jaundice,(3)溶血性黄疸,hemolytic jaundice,(+),(+),(-),五、尿液胆红素定性检查,6.临床意义,黄疸的诊断与鉴别诊断,六、尿胆原和尿胆素定性检查,(1)改良Ehrlich法(湿化学法),(2)干化学试带法,尿胆原+对二甲氨基苯甲醛樱红色化合物,Ehrlich醛反应 尿胆原+重氮化合物红色化合物,1.尿胆原(URO)测定方法,H+,Urobilinogen, URO/UBG, 立即呈深红色 放置10min呈樱红色 放置10min呈微红色 放置10分钟后不显色,2.尿胆素(urobilin)测定方法,无胆红素尿液+碘液,尿胆原,尿胆素,Zn2+ +,复合物 (绿色荧光),六、尿胆原和尿胆素定性检查, Schleisinger法:,氧化,(1)试带法： 改良Ehrlich法：简单快速，分析仪，定性或定量； 不同试带灵敏度不同（1-4mg/L）。 偶氮反应试带不受胆红素影响，对尿胆原特异。,(2)尿胆素最低检出量为0.05mg/L。,3.方法学评价,六、尿胆原和尿胆素定性检查,【干扰因素】 Ehrlich醛反应,偶氮法：尿甲醛2g/L,亚硝酸盐0.05g/L灵敏度,(1)检测前：标本新鲜,避光保存； 口服NaHCO3碱化尿液,午餐后2-4h尿标本。,(2)检测中:口服NaHCO3碱化尿液,先用乙酸调节 为弱酸性. 试带法:规范,高低室内质控,定检. 阴凉干燥,密闭避光,有效期., 4.质量控制,六、尿胆原和尿胆素定性检查,(3)检测后：正确评价尿三胆; 尿胆原阴性可疑尿胆素定性验证.,尿胆原：阴性或弱阳性； 1:20稀释阴性. 尿胆素：阴性,(1)鉴别黄疸种类.,(2)反映肝细胞损伤敏感指标.,(3)长期便秘易使尿胆原阳性程度增加.,六、尿胆原和尿胆素定性检查,5.参考值,6.临床意义,表5-15 不同类型黄疸的鉴别诊断,尿液中Hb来源： 血管内溶血 尿路出血,七、尿血红蛋白定性检查,正常人血浆中游离Hb微量(50mg/L),与结合珠蛋白形成Hb-Hp复合物，在单核-巨噬细胞系统代谢，故尿中Hb极微。定性：阴性,验证尿液潜在出血的试验: 隐血试验(occult blood test),1.概述,(1)试带法,(2)湿化学法,(3)免疫法：单克隆抗体法,利用胶体金标记的抗人Hb单克隆抗体检测。,2.测定方法,原理相同,七、尿血红蛋白定性检查,胶体金单克隆抗体法:,(1)试带法：,(2)湿化学法：,(3)免疫法：,试剂稳定性差,特异性较低,假阳性多.0.3-0.6mg/L,简便快速,灵敏度高(0.15-0.3mg/L),影响多,筛检.,简便,灵敏度高(0.2mg/L),特异性强，验证,3.方法学评价,七、尿血红蛋白定性检查,3.方法学评价,七、尿血红蛋白定性检查,【干扰因素】,阴性,(1)检测前：标本新鲜,煮沸2分破坏WBC过氧化物酶 和其他对热不稳定酶.,(2)检测中：高低室内质控，阳性对照；3%H2O2或试 带验证所用试剂的有效期和可靠性。,4.质量控制,5.参考值,七、尿血红蛋白定性检查,(3)检测后：审核，沟通，验证。,(2)辅助诊断泌尿系统疾病.,(1)辅助诊断肾前性溶血性疾病.,各种血管内溶血性疾病:PNH, 血型不合输血, AIHA,行军性Hb尿;各种病毒感染、疟疾;大面积烧伤、体外循环、术后所致的RBC大量破坏.,隐匿性肾炎尿中少量RBC破坏隐血试验();镜检时RBC少.,6.临床意义,七、尿血红蛋白定性检查,八、亚硝酸盐(NIT),硝酸盐,亚硝酸盐,(nitrate),(nitrite),对氨基苯磺(砷)酸,重氮盐,a-萘胺,偶氮化合物 (红色),1.检测原理：亚硝酸盐还原法,(1)亚硝酸盐检出率的3个影响因素： 尿中G-杆菌要有硝酸盐还原酶; 尿潴留时间4h; 尿中有硝酸盐.,八、亚硝酸盐(NIT),2.方法学评价,(2)灵敏度：0.3-0.6mg/L,(3)干扰因素,表5-16 亚硝酸盐检测的干扰因素及评价,(1)检测前：晨尿，尽快检测。,八、亚硝酸盐(NIT),3.质量控制,(2)检测中：高低室内质控,定时阳性标本验证; 试带干燥避光，有效期。,(3)检测后：审核,结合LEU、镜检分析。,阴性,4.参考值,快速筛检尿路感染,NIT阳性:泌尿系统有细菌感染.(排除假阳性) NIT阴性:不能排除泌尿系统有细菌感染.,八、亚硝酸盐(NIT),5.临床意义,NIT试带LEU镜检准确诊断.,确证试验：尿细菌培养阳性,九、白细胞(WBC,LEU)(leukocyte),1.检测原理：酯酶(esterase)法,吲哚酚酯 吲哚酚+有机酸,粒细胞酯酶,+ 重氮盐 重氮色素 （紫红色缩合物）,九、白细胞(WBC,LEU),2.方法学评价,(1)灵敏度1025个/ul或515个/HPF.,特异性强：中性粒细胞.,(2)【干扰因素】,九、白细胞(WBC,LEU),3.质量控制,(1)检测前：标本新鲜,久置后WBC破坏试带法 与镜检结果差异过大。,(2)检测中：规范操作和质控。,(3)检测后：审核,结合NIT、LEU、镜检分析， 提高尿路感染诊断的可靠性。,阴性,4.参考值,LEU阳性:泌尿系统感染.(排除假阳性),5.临床意义,LEU阳性镜检阴性？,九、白细胞(WBC,LEU),诊断泌尿系统感染。,LUE阴性:镜检为淋巴细胞或单核细胞。 见于肾移植排斥反应、泌尿系结核。,中性粒细胞溶解，见于肾脏病人。,十、维生素C(VitC或ASG),1.反应原理：,甲基绿磷钼酸噻嗪化合物, VitC,钼蓝 (蓝色紫色),检测VitC用于提示尿液OB、BIL、GLU、NIT及LEU检测结果是否准确，防止出现假阴性结果。,(1)还原法,(2)吲哚酚法,2.方法学评价,(1)灵敏度：50-100mg/L.,特异性：只检测还原性抗坏血酸.,(2)【干扰因素】,3.质量控制,(1)检测前：随机尿。,(2)检测中：规范操作和试带质控。,(3)检测后：审核,分析对OB/Hb、BIL、GLU、 NIT、LEU是否产生影响。,阴性,4.参考值,5.临床意义,判断试带法