微生物学听课笔记考试大纲

微生物学常见名词及考试问题总结O原核微生物：指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作核区的裸露DNA的原始单细胞生物，包括真细菌和古生菌两大类。O真核微生物：凡是细胞核具有核膜,能进行有丝分裂,细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等细胞器的微小生物,都称为真核微生物.O原生质体：指在人工条件下用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制细胞壁的合成后，所留下的仅由细胞膜裹着的圆球状渗透敏感细胞，一般由G+菌形成。O原生质球：指细胞壁未被全部去掉的细菌细胞，它呈圆球状，可以人为地通过溶菌酶或青霉素处理革兰氏阴性细菌而获得。O连续培养：又名开放式培养，是相对分批培养或密闭培养而言。是指在开放系统中通过控制培养基流速，让微生物克服生长后期而能在某特定的培养环环境中继续保持旺盛生长状态的培养方法，包括恒浊培养和恒化培养。.O化学诱变：能使突变率提高到自发突变率以上的化学、物理和生物因子称为诱变剂，而利用化学物质做为诱变剂的诱变方法称为化学诱变。O培养基：是指人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养物。O无义突变：由于某个碱基的改变使代表某种氨基酸的密码子突变为终止密码子，从而使肽链合成提前终止的突变。O同义突变：编码同一氨基酸的密码子的核苷酸改变但不改变编码的氨基酸，即不改变基因产物的突变。O错义突变：是编码某种氨基酸的密码子经碱基替换以后,变成编码另一种氨基酸的密码子,从而使多肽链的氨基酸种类和序列发生改变。O移码突变：在基因编码区，由于核苷酸的插入或缺失导致三联体密码子阅读方式的改变，从而导致该基因的相应编码序列发生改变。1. 影响微生物生长的食品内在因素及外在因素pH、含水量、氧化还原电位、营养成分、抗微生物成分、生物结构&贮藏的温度、环境的相对湿度、环境中的气体及其浓度、其他微生物及其活性2. 表面培养法有何特点，试举二例。特点：1操作简便，设备简单，常用于实验室小规模培养2用于大规模生产潜力小3不便于对体系进行检测控制4不易于保持系统内环境条件的均一。例子：1酱油生产：将霉菌培养后加入麸皮等物质培养制得；2面包生产：将面粉与水、酵母菌混合成面团，在30度左右发酵，酵母菌利用淀粉酶分解淀粉生成麦芽糖、葡聚糖、果糖和蔗糖，产生二氧化碳、醇、醛和一些有机酸等产物。3. 微生物细胞包埋法有何特点，举一例特点：1固定化细胞稳定性强，操作条件温和，对外界环境缓冲作用大，易于再生，产物分离提取容易，较好地保存了细胞内多酶系统的活力2氧气、营养物质、产物的扩散受限制，用于好氧微生物的研究有一定的局限性3菌体在凝胶表面的生长及菌体的渗漏都影响固定化细胞的实用4通常用于包埋的原材料价格高5有些原材料对活细胞有毒。例子：丙烯酰胺凝胶包埋大肠杆菌A所需设备: 1材料大肠杆菌（高天冬氨酸酶活，增殖至100g湿菌体）2药品（1）丙烯酰胺溶液 丙烯酰胺75g;去离子水240ml;甲叉双丙烯酰胺4g，溶解后4存放。（2）25%-二甲氨基丙氰溶液（3）1% 过硫酸酸钾溶液（4）30水浴，无菌生理盐水；冰水浴3仪器:手术刀。B实验原理: 将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中，使酶固定化的方法称为包埋法。本实验以聚丙烯酰胺凝胶为载体，固定大肠杆菌。C实验步骤: 1取100g湿菌体悬浮于200ml生理盐水中，将此悬液冷至8。2将丙烯酰胺溶液温至8。3将200ml菌悬液于240ml丙烯酰胺溶液在8下混合。4加入10ml25%-二甲氨基丙氰溶液和50ml1%过硫酸酸钾，混匀。5移至2025环境中。6当聚合反应开始、混合液温度升至30时，立即移至冰水浴中并维持1520min。7.将胶切成3-4mm3大小的方块，备用。4. 叙述紫外线诱变育种的操作过程以紫色色杆菌为出发菌株进行紫外线诱变育种过程如下：1.菌种转接：于斜面培养24h的菌株（挑取一环）于装有5ml牛肉膏蛋白胨培养液无菌离心管中(两个平行)（摇匀）于32度培养1618h（进入对数期）2.菌液的制备：菌液离心（3500r/min，15min）（弃上清液）用生理盐水洗涤（5ml）重新形成菌悬液2支菌悬液混合250ml的无菌三角瓶（含玻璃珠）（充分振荡使细胞打散）若菌种过密，则稀释再振荡（记下稀释倍数）3.紫外照射：预热紫外灯30min加菌液取2套加有磁力搅拌棒的无菌培养皿，于培养皿盖底部注明照射时间分别加入菌液3ml照射（培养皿放于磁力搅拌器上）打开使菌液搅拌先照射1min，再打开皿盖计时达照射时间后立即盖上皿盖关紫外灯。4.稀释菌液：制肉膏蛋白胨平板6个，注明照射时间及菌液稀释浓度稀释：将照射1min，2min的菌液分别稀释10倍涂布菌液：分别吸取不同照射时间的原菌液和101菌液于0.1ml相应琼脂平板上均匀涂开。5.培养：将所有培养皿用黑纸包扎32度培养过夜第二天取出计算紫色、白色菌落数（白色为突变株）6.稀释：对照菌液（未照射）稀释至106和105由106和105各取0.1ml涂布于肉膏蛋白胨平板32度倒置培养过夜第二天取出计算紫色、白色菌落数。7.计算：自发突变率=对照中的白色菌落/对照中的总菌落数*100%，照射后的总诱变率=每ml白色菌数/每ml总菌数*100%，诱发突变=总诱变率-自发突变率，致死率=（对照中的活菌数-照射后的活菌数）/对照中的活菌数.5. 原生质体技术的优点有哪些？叙述原生质体融合的步骤优点：除了细胞壁的障碍原生质体融合后，二亲株的基因组之间有机会发生多次交换（选择多种性状菌株）融合重组频率特别高融合技术可与其他育种方法相结合。工业微生物具备哪些特点？菌株为“纯培养”菌株具有稳定的遗传性菌株生长迅速产目的产物时间短尽可能自我保护产物单一，已于分离。6. 我国微生物研究现状，怎样提高？我国的微生物研究已拓展到农业、制药、环境保护等多个领域。创建了一批微生物学的研究机构，微生物学专业。目前，我国的抗生素的总产量居世界首位，酶法生产Vc技术居世界先进水平。总体来说，我国的微生物研究水平除了个别领域或研究课题达到国际先进水平，为国外同行承认外，绝大多数哦与国外先进水平相比，差距相当大。突破现状的途径：在以应用性研究为主的条件下，加强基础理论的研究增加创新性研究，减少跟踪性研究开拓新产品对流行病的机理研究需加强。7. 易产生蛋白酶的枯草芽孢杆菌进行化学诱变例子：用硫酸二乙酯（DES）对枯草芽孢杆菌进行诱变效应 枯草芽孢杆菌1.398培养基：肉膏蛋白胨培养基液：30ml250ml三角瓶中固：50ml分装于10支试管中 酪蛋白琼脂培养基（产蛋白酶溶解酪蛋白产生透明圈）试剂：诱变剂（DES，DES不稳定易分解不可灭菌），25%Na2S2O3,pH=7.0磷酸缓冲液，9ml无菌水。步骤：1.菌种活化：与培养基一起保存于冰箱中的菌种进行移种，接种至斜面，37培养24h。2.对数期培养液的制备：取一环菌接于装有30ml的肉膏蛋白胨液体培养基三角瓶（平行2次）30下振荡培养16h。3.制平板：将已融化的肉膏蛋白胨培养基冷却至50后倒9个平板。4.菌悬液的制备：取上述对数期的细菌培养液10ml（移液后）离心（3000r/min）菌体沉淀菌体沉淀中加入10ml磷酸缓冲液洗涤5.DES处理：分别吸取4ml菌悬液于2个三角瓶加入16ml 0.1M pH=7.0磷酸缓冲液所得菌悬液108个/ml菌数加1% DES 0.2ml分别振荡处理30min和60min。6.终止反应：处理30、60min的悬液