NY-T405-2000脱毒大蒜种蒜(苗)病毒检测技术规程.pdf

B 1 5N丫中华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准N Y / T 4 0 5 -2 0 0 0脱毒大蒜种蒜( 苗) 病毒检测技术规程R u l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s - f r e e s e e d ( s e e d l i n g ) g a r l i c2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 发布2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施中华人民共和国农业部发 布N Y / T 4 0 5 -2 0 0 0前言 为了有效地实施对脱毒大蒜种蒜质量检验和管理， 规范脱毒大蒜种蒜市场， 促进大蒜脱毒技术的推广， 实现脱毒大蒜种蒜( 苗) 病毒检测的规范化、 标准化， 特制定本规程。 本规程在参照国内外大蒜病毒检测技术最新研究进展的基础上， 结合当前国内 生产实际， 力 求达到快速、 准确、 可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生分布范围 广、 危害性大的 病毒。 检测方法主 要采用双抗体夹心酶联免疫吸附 检测方法。 本规程内容包括脱毒大蒜种蒜( 苗) 检测的适用范围、 检测对象、 抽样方法、 检测方法和质量要求。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准主要起草单位: 农业部植物脱毒种苗质量监督检验测试中心( 济南) 、 山东省植物保护总站。 本标准主要起草人: 李明立、 孙作文、 杨勤民、 刘敬东、 商明清、 卢增全。中华人民共和国农业行业标准脱毒大蒜种蒜( 苗) 病毒检测技术规程N Y / T 4 0 5 -2 0 0 0R u l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s - f r e e s e e d ( s e e d l i n g ) g a r l i c1 范围 本标准规定了脱毒大蒜种蒜( 苗) 的病毒检测方法和操作规程。 本标准适用于脱毒大蒜种蒜( 苗) 的病毒检测。2 引用标准 下列标准所包含的条文， 通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时， 所示版本均为有效。所有标准都会被修订， 使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 N Y / T 4 0 1 -2 0 0 。 脱毒马铃薯种薯( 苗) 病毒检测技术规程3 定义 本标准采用下列定义。3 . 1 脱毒苗 应用茎尖组织培养技术获得的再生试管苗， 经检测确认不带洋葱黄矮病毒( O Y D V ) 、 大蒜普通潜隐病毒( G C L V ) ， 才确认是脱毒苗。3 . 2 脱毒种蒜 从繁殖脱毒苗开始， 经逐代繁殖 增加种蒜数量的种蒜生产体系生产出来的。 分原原种、 原种、 生产用种三个级别。3 . 2 . 1 原原种p r e - e l i t e 用脱毒苗在防虫网室、 温室条件下生产出的符合质量标准的种蒜。3 . 2 . 2 原种e l i t e 用原原种作种蒜， 在良好隔离条件下生产出的符合质量标准的种蒜。3 . 2 . 3 生产用种 c e r t i f i e d s e e d 用原种作种蒜， 在隔离条件下生产出的符合质量标准的种蒜。3 . 3 病毒病株允许率 脱毒种蒜繁殖田中 病毒病株的允许比 率。4 检测对象 洋葱黄矮病毒( O n i o n y e l l o w d w a r f v i r u s , O Y D V ) ; 大蒜普通潜隐病毒( G a r l i c c o m m o n l a t e n t v i r u s , G C L V ) ,抽样组培苗抽样 脱毒核心材料: 每株必须检测。5引51中华人民共和国农业部2 0 0 0 一 0 9 一 2 2批准2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施 ;N Y / T 4 0 5 -2 0 0 05 . 1 . 2 扩繁苗: 随机抽取 1 %-2 %的扩繁苗检测。5 . 2 田间抽样5 . 2 . 1 原原种和原种抽样: 大蒜生长前、 中、 后期， 在目 测全田的基础上， 采用五点取样法， 抽样数量为 一 一、0 . 1 h m ， 以 下2 0 0 株; 。1 1 -1 h m 5 o 0 株; 超出1 h m 面积， 划出另一检验区， 按本规程规定面积取样。每株取叶片 1 一5g ， 低温保湿存放待检。5 . 2 . 2 生产用种抽样: 抽鳌前一周， 在 目测全田的基础上， 采用随机取样法， 0 . 1 h m， 以下检验 2 点， 每点 1 0 0 株; 0 . 1 1 - 1 h m， 检验 5 点， 每点1 0 0株; 1 . 1 -5 h m 检验 1 0 点， 每点 1 0 0 株; 超出5 h m 面积， 划出另一检验区， 按本规程规定的面积取样。取样方法及样品保存同5 . 2 . 1 ,5 . 3 商品种蒜抽样 没有经过田间检验的商品种蒜必须进行鳞茎检验。5 . 3 . 1 根据种蒜不同存放方式， 采用分层设点或随机取样的方法， 抽样数量见表 1 , 表 1 种蒜抽样数量标准表种蒜总量， k g抽样百分率， %抽样最低数量, k g( 1 0 0 0 06 - 1 01 0 0 1 0 0 0 03 - 5注:不足抽样最低数量的全部作为混合样品。5 . 3 . 2 将第一次抽取的样品混合后进行二次抽样， 随机抽取 1 0 %的混合样品检测。6 检测方法双抗体夹心酶联免疫吸附检测法( D A S - E