血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达.ppt_第1页
血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达.ppt_第2页
血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达.ppt_第3页
血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达.ppt_第4页
血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达.ppt_第5页
已阅读5页,还剩19页未读 继续免费阅读

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

,血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达,郑志伟 劳海燕 余细勇 林秋雄 朱杰宁 王玲 孙硕 陈纪言 钟诗龙 广东省人民医院医学研究中心,广东省心血管病研究所,讲述目录,简述血浆循环miRNA提取检测的方法,采用前述建立的方法,在25例冠心病患者和30例健康对照中检测miRNA的表达情况。,在细胞实验进一步探讨miRNA的作用机制,研究背景,MicroRNA是生物体内长度约为2023个核苷酸的非编码小RNA,通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行调控。 最近研究发现血液循环中也存在miRNA,有希望作为疾病无创诊断或者疾病预后的生物标志物。,Solexa Whole Genome Sequencing,miRNAs (21-23nt) were most abundant sequences in serum RNAs,Chen et al. 2008 Cell Res.,血浆循环miRNA的表达 预测?生物标记物?,我们的设想,我们的研究工作,研究血浆中存在的循环miRNA,建立其提取检测的方法,并且检测血浆miRNA在冠心病人中的表达情况,寻找疾病发生发展或者影响预后的生物标记物。,血浆miRNA提取检测基本流程,血浆循环miRNA提取方法,血浆miRNA 的提取,第四步,晾干,加无RNAase水进行溶解,检测浓度,保存,第一步,ProteinK 消化,Trizol LS和氯仿对血浆进行提取,第三步,离心,取得RNA沉淀,70%乙醇洗涤,第二步,异丙醇和核酸共沉淀剂对前述水相进行沉淀,血浆循环miRNA的检测原理,二、miRNA提取方法学的考察(一),1、采用外源合成的cel-miRNA-39检验提取方法的提取效率:,2、has-miR-16的累加实验 采用加入外源合成的has-miR-16 mimics,比较提取方法的有效性。,二、miRNA提取方法学的考察(二),三、检测miRNA在两组人群中的表达差异,Coronary artery heart disease (CHD) 25例,Healthy contron 30例,3.1、研究的一般资料年龄,3.2、研究的一般资料性别,3.3、血浆循环has-miR-126的表达量,3.4、血浆循环has-miR-16的表达量,四、进一步的机制探讨,1、培养人心肌细胞AC16,进行miR-126 inhibitor 的转染,Q-PCR检测miR-126和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。 2、Tunel 检测心肌细胞凋 亡情况。,四、Q-PCR检测VEGF的表达结果,VEGF有促进血管生成的作用,在冠心病患者中miR-126的表达下降,可能跟VEGF调节血管生成有关,其具体的机制还有待进一步的研究。,三、TUNEL凋亡结果分析(一),图 1 AC16 细胞-正常 A:细胞形态;B:Tunel;C:DAPI 染色(核定位); D:B 和 C 的重叠图,三、TUNEL凋亡结果分析(二),图 3 AC16 细胞转染 mir-126 inhibitor A:细胞形态; B:Tunel; C:DAPI 染色(核定位); D:B 和 C 的重叠图,四、本文结论:,结论:采用Trizol LS提取血浆总RNA的方法可行,miRNA检测方法的特异性和灵敏性较好,血浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发展过程中发挥调节作用,其作用机制可能与影响血管生成和心肌保护作用有关,具体

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论