LY-T1283-1998木材防腐剂对腐朽菌毒性实验室试验方法.pdf

L Y / r 1 2 8 3 -1 9 9 8前言 本标准参考了美国木材防腐者协会标准“ 实验室土壤一 木块培养测定木材防腐剂的标准方法”( A m e r i c a n Wo o d P r e s e r v e r s A s s o c i a t i o n S t a n d a r d E 1 0 - 9 1 S t a n d a r d m e t h o d o f t e s t i n g w o o d p r e s e t -v a t i v e s b y l a b o r a t o r y s o i l - b l o c k c u lt u r e s ) ， 采用了该标准中的试菌、 培养和试验时间、 重量损失的 计算、 试验结果的评价等。本标准的主要特点是可操作性强、 准确、 快速、 简便易行。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准由中国木材标准化技术委员会归口。 本标准起草单位: 南京林业大学化工学院。 本标准起草人: 金重为、 赵桂华、 何文龙。免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载中华 人 民 共 和 国林 业行 业 标 准木材防腐剂对腐朽菌毒性实验室 试 验 方 法L Y / T 1 2 8 3 -1 9 9 8Me t h o d o f l a b o r a t o r y t e s t f o r t o x i c i t y o f w o o d p r e s e r v a t i v e s t o d e c a y f u n g i1 范围 本标准规定了在最适宜的实验室条件下， 通过测定经防腐剂处理的木材受腐朽菌侵染后造成木材重量损失. 确定该防腐剂毒效的试验方法。 本标准适用于测定木材防腐剂对腐朽菌毒性极限。2 定义 本标准采用下列定义。2 . 1木材重量损失 百分率 w e i g h t l o s s p e r c e n t a g e o f w o o d 在室内毒性试验中， 经防腐剂处理的木材受腐朽菌侵染后的重量损失百分率。2 . 2 木材中防腐剂的保持量 p r e s e r v a t i v e r e t e n t i o n i n w o o d 每立方米处理木材所吸收的防腐剂干盐( 水溶性防腐剂) 或有效成分( 水不溶防腐剂) 的千克数。2 . 3 木材防腐剂毒性极限 t o x i c l i m i t o f w o o d p r e s e r v a t i v e s 木材防腐剂有效抑制腐朽菌腐朽木材的最低保持量。3 试验设备3 . 1 培菌室或电 热恒温培养箱: 温度3 0 士2 C， 相对湿度7 5 a a -8 5 a/ o o3 . 2 鼓风干燥烘箱: 温度1 0 5 士2 C o3 . 3 蒸汽灭菌器: 压力。 . 2 5 MP a 4A度1 3 8 0C ,3 . 4 无菌接种室或超净工作台。3 . 5 分析天平: 感量。 . 0 1 g .3 . 6 真空泵: 真空度。 . 1 MP a ,3 . 7 培养皿: 玻璃， 直径9 c m,3 . 8 波美计: 波美度1 . 0 0 1 . 1 0 ,3 . 9 培养瓶: 5 0 0 mL广口玻璃锥形瓶。3 . 1 0 防腐剂浸注试样装置， 见图1 ,国家林业局1 9 9 8 一 0 9 一 2 2 批准1 9 9 8 一 1 2 一 0 1 实施免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载L Y / r 1 2 8 3 一 1 9 9 8I 一 聚乙 烯管沼 一 锥形瓶闷一防腐剂溶液过 一旋塞, 5 一橡皮塞; s -真空接管; 7 一真空干操器; 8 一玻璃烧杯; 9 一压试样玻璃重物; 1 。 一试样 图 1 真空浸注装置4 试样与饲木4 门 试材: 供试验用树种， 针叶材选用马尾松( P i n u s m a s s o n i a n a L a m b . ) ， 阔叶材选用毛白杨( P o p u l u st o m e n t o s a C a r r . ) 或拟赤杨 A l n i p h y l l u m f o r t u n e i ( H e m s h . ) P e r k ) 。 每种树各2 - 3 株， 胸径2 0 0 m m 一3 0 0 m m， 每株在胸高部位向上截取长l m的试材一段。4 . 2 试样: 试样均等取自2 -3 株试材段横截面边材均匀分布处。 各面均应平整， 不允许有可见的缺陷，未经任何化学药剂处理。尺寸为 2 0 m m X 2 0 m m X 1 0 m m 顺纹方向) ， 逐一称重， 并将重量相近的相同树种的试样分在同一组， 编号， 备用。针叶材试样用于褐腐菌试验， 阔叶材试样用于白腐菌试验。4 . 3 饲木: 饲木应与试样取自同一树种的边材， 尺寸为2 2 m mX 2 2 m mX3 m m( 顺纹方向) 。5 试菌5 . 1 褐腐菌5 . 1 . 1 密粘褶菌 G l o e o p h y l l u m t r a b e u m ( P e t s . e x F r . ) M u r r . 。5 . 1 . 2 绵腐卧孔菌C P o s t i a p l a c e n t a ( F r i e s ) M. L a r s e n e t L o m b a r d ) o5 . 2 白腐菌5 . 2 . 1 彩绒革盖菌 T r a m e t e : 二 。 r s i c o l o r ( L . e x F r . ) P i l a t ) ,5 . 2 . 2 乳白 耙菌U r p e z l a c t e u s ) ,5 . 3 除以上标准试菌外， 增加对试验防腐剂有抗药性和处理木材使用场合特别普遍的菌种是可取的。例如用煤杂酚油处理铁道枕木时， 应增加试菌洁丽香菇 N e o l e n t i n u s l e p i d e u s ( F r . ; F r . ) 。 在测定含铜的木材防 腐剂的抗腐力时， 应增加试菌粉抱革菌 C o n i o p h o r a p u t e a n a ( F r . ) K a r s t ) ,6 试验步骤6 . 1 培养基制备6 - 1 . 1 麦芽糖琼脂培养基的配制: 在5 0 0 m L 细口 锥形瓶内加入麦芽糖液( 波美度1 . 0 3 ) 1 0 0 m L 、 琼脂1 . 5 写-2 线( 重量) ， 在水浴锅中加热， 使琼脂溶化。 在培养基中加0 . 0 0 5 %( 重量) 的酵母浸提物， 加速许多腐朽菌的生长。瓶口 塞棉塞并包防水纸， 置于蒸汽灭菌器中， 在压力。 . 1 M P a , 温度1 2 1 灭菌3 0 m i n 5 7 4免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载L Y / T 1 2 8 3 一 1 9 9 8后， 在无菌接种室或超净工作台上冷至不烫手时， 把培养基分别倒入 5 个已灭菌( 压力。 . 1 MP a , 温度1 2 1 C ) 的培养皿( 直径9 c m ) 中， 等冷却凝固后备用。6 . 1 . 2 如选用马铃薯、 葡萄糖培养基时， 取去皮洗净马铃薯2 0 g ， 切成小块， 加水1 0 0 m L , 煮沸3 0 m i n ,滤去马铃薯块， 将滤液用水补足到1 0 0 m L ， 倒人5 0 0 m L 细口 锥形瓶中， 加葡萄糖2 g , 琼脂1 . 5 g ， 加热溶化， 瓶口 塞棉塞并包防水纸， 以下操作步骤同6 . 1 . 1 ,6 . 1 . 3 河砂锯屑培养基的配制: 将红塘、 玉米粉、 马尾松边材锯屑( 0 . 4 - 0 . 7 5 m m) 、 洗净干河砂( 0 . 4 -0 . 7 5 m m ) 按1 = 8 . 5 : 1 5 : 1 5 0 ( 重量) 的比 例拌匀， 倒入5 0 0 m L广口 锥形瓶中， 每瓶为1 6 0 g 该种混合物， 待表面平整后， 在其表面放入 2 片饲木( 互相分开) ， 向瓶内徐徐加人 9 0 m L麦芽糖液( 波美度1 . 0 3 ) , 塞棉塞并包防水纸， 在燕汽灭菌器中( 条件同6 . 1 . 1 ) 灭菌1 h 后， 取出， 置于无菌接种室或超净工作台上冷却后备用。6 . 2 试菌的接种与培养6 . 2 . 1 麦芽糖( 或马铃薯、 葡萄糖) 琼脂培养基的接种和培养: 在无菌条件下， 将按 6 . 1 . 1 配制好的培养基接种试菌， 然后置于培菌室或培养箱中， 在温度2 8 士2 *C ， 空气相对湿度7 5 %-8 5 %的条件下培养7 - 1 0 d ， 备用。6 . 2 . 2 河砂锯屑培养基的接种和培养: 在无菌接种室或超净工作台上， 在按6 . 2 . 1 制得的菌丝前缘部分割取直径5 m m的菌丝块( 带有琼脂培养基) 放在与饲木相接的河砂锯屑培养基( 6 . 1 . 3 ) 上( 每一片饲木接一块菌丝块) ， 塞棉塞并包防水纸， 放在培养室或培养箱中， 在与6 . 2 . 1 相同条件下培养， 直到饲木表面完全被菌丝筱盖( 约2 周) ， 此时即可放人经防腐剂处理过的试样。6 . 3 试样准备及用防腐剂浸注6 . 3 . 1 试样数量: 测定一种试验防腐剂对每一种试菌的抗腐力需4 2 块试样。 其中防腐剂需配制5 个梯度浓度， 每一 个浓 度至 少需6 块 试样; 6 块试样只 用 溶剂或含。 % 有 效成分的 配方处理， 以确 定溶剂或配方中的非有效成分对试菌的抗腐力; 6 块试样未经任何处理以确定所用试菌的活性。6 . 3 . 2 防腐剂处理溶液的配制: 将防腐剂配成5 个梯度浓度， 使得处理后的试样中防腐剂保持量有2组低到足以使试菌能腐朽试样造成明显的重量损失。 水溶性防腐剂用燕馏水配制. 油类或有机溶剂防腐剂用甲苯或其他溶剂溶解和稀释。 在测定新防腐剂的抗腐力时， 还应包括3 组经防腐剂处理的已 知抗腐力的试样。6 . 3 . 3 试样的防腐剂浸注( 见图1 ) : 在行浸注前， 先将每一块试样放在4 0 的鼓风干燥箱中烘至恒重，称重， 准确到。 . 0 1 g ， 该重量( T , ) 为试样处理前重量。 将用同一浓度防腐剂处理的试样， 在真空干燥器中真空( 0 . 0 1 M P a ) 浸注处理3 0 m i n ， 等试样饱和下沉后， 取出， 用灭菌吸水纸吸去每块试样表面的浮液， 立即称重， 准确到。 . 0 1 g ， 得浸注后的试样重量( T ) ,6 . 3 . 4 试样中防腐剂保持量( R ) 的计算按式( 1 ) 进行:R 二D f。 cX 1 0” 。 . “. ” 。 “ “ 。 “ .。 (1)M =T , 一T , . . .。 ” 。 . “ . . ” (2): R 试样中防腐剂的保持量, k g / m M 试样吸收防 腐剂溶液重量， 9 ; V 试样体积, C M , C -防腐剂溶液浓度， %( 重量) 。防腐剂的耐久性试验， 水溶性防腐剂的流失试验: 经防腐剂处理后的试样， 经充分气千后， 将同一组保持量的试样放在中4车式6.6.6 0 0 m L烧杯中的不锈钢或塑料网架上， 用玻璃压块压住， 按每块试样加5 0 m L燕馏水的比例加入蒸馏水。 将烧杯放在真空干燥器中， 抽真空至真空度 9 0 k P a 以下， 保持 3 0 m i n ， 或直到没有气泡逸出液面为止。 消除真空， 在大气压下保持2 4 h ， 移去烧杯中的水， 用等量的新鲜蒸馏水取代。 以后， 每隔2 4 h 重复免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载L Y / T 1 2 8 3 一 1 9 9 8上述操作， 总共1 4 d 。 将每次取代水和洗涤烧杯壁的洗涤水加在一起， 如有需要， 可用于分析水溶防腐剂中各种成分的流失量。6 . 4 . 2 油类或有机溶剂防腐剂的耐久性试验: 试样用油类或有机溶剂防腐剂处理后三天， 开始耐久性试验， 耐久性试验是先流失， 后挥发。6 . 4 . 2 . 1 流失试验: 将同一组保持量的试样， 放在6 0 0 m L烧杯内的不锈钢或塑料网架上， 用玻璃重物压住， 加蒸馏水充满烧杯， 在室温条件下保持2 h ， 倾去水， 取出压块， 继续进行挥发试验。6 . 4 - 2 . 2 挥发试验: 将装有试样的烧杯放入鼓风烘箱中， 在5 0 士2 下挥发1 7 h ,6 . 4 . 3 耐久性试验后试样的恒重: 在耐久性试验后， 将试样放到鼓风烘箱中， 在4 0 下干燥至恒重。 称重( 每块试样准确至0 . 0 1 g ) , 得试样在腐朽前的重量( T 3 ) e6 . 5 试样的灭菌及接种 将同一组保持量的试样放到盛有用5 m L蒸馏水浸泡的滤纸的密闭容器内， 或用多层纱布包好， 放在蒸汽灭菌器中， 在1 0 0 士2 下汽蒸3 0 m i n 。待冷却后， 在无菌的条件下， 将试样以宽面与培养瓶中被菌丝覆盖的饲木相接触， 放在饲木( 6 . 2 . 2 ) 上。每片饲木上放一块试样， 每一培养瓶中放2 块试样( 见图 2 ) e 1 一防水纸; 2 -棉花塞; 3 -5 0 0 m L广口 锥形瓶摊 一试样沥 一饲木; 6 一培养基 图 2 培养瓶6 . 6 试样的腐朽试验 将盛有试样的培养瓶放置于培养室或培养箱中， 保持温度2 8 士2 C， 相对湿度7 5 % 8 5 %, 腐朽1 2 周。除检查时必须开灯外， 其余时间不要开灯。6 . 7 试验终了时试样的称重 经1 2 周腐朽后， 将试样从培养瓶中取出， 仔细地刮除试样表面的菌丝和杂质。 将试样放到鼓风烘箱中， 在4 0 下干燥至恒重， 逐个称重， 准确至。0 1 g 。腐朽后试样恒重重量为T7 结果计算计算每块试样腐朽后的重量损失百分率( L ) ， 见式( 3 ) ; T，一 TI - = 一一 下 拼 r ， 一 x 1 0 0 1 ， . ”。 . . (3)式中: L 试样重量损失率， %; T 3 试样腐朽前恒重重量， 9 ， T d 试样腐朽后恒重重量， g ,免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载L Y / T 1 2 8 3 一1 9 9 88 防腐剂弃性极限的评定8 . 1 防腐剂毒性极限值是按本标准规定的试验方法所测定的能抑制试菌腐朽的最低保持量。 试样失重率3 % 可忽略不计， 即腐朽后失重率3 ?/ o 的防腐剂保持量为防 腐剂对该试菌的毒性极限值. 防腐剂对一种试菌的毒性极限值愈小， 则说明 该种防腐剂对这种试菌的抗腐力愈大。 反之， 若防腐剂对一种试菌的毒性极限值愈大， 那么该种防腐剂对这种试菌的扰腐力愈小。82 应该将溶剂( 或用。 0 0 有效成分的配方) 处理试样的失重率和未处理对照试样的失重率相比较以确定溶剂( 或配方中非有效成分) 对腐朽的影响。 未处理的对照试样在腐朽后的失重率低于4 5 %的任何试验都是无效的。9 毒性极限位的贡断测定 如果由于所选择的保持量间的间距太大而不能准确地确定毒性极限值，