甘草酸脂质体的处方及制备工艺.pdf

研究原著 文章编号: 100022790 (2006) 0720655203 甘草酸脂质体的处方及制备工艺 程建峰,扈本荃,刘 梅,贺建荣,扬 胜,王弼时 (第四军医大学唐都医院药学部,陕西 西安710038) 收稿日期: 2005206203; 接受日期: 2005211215 基金项目:陕西省中医管理局2003年招标课题(0389) 作者简介:程建峰.副主任药师.Tel: ( 029) 84777164 Fax: ( 029) 84777154 Email: chengjf0689sina. com Formulation and preparation of glycyr2 rhizic acid liposome CHENG Jian2Feng,HU Ben2Quan,L IU M ei,HE Jian2Rong, YANG Sheng, WANG B i2Shi Department of Phar macy,Tangdu Hospital,Fourth Military MedicalUniversity, Xian 710038, China 【Abstract】A I M : To opti mize the prescription and preparation of encapsulated liposome.M ETHODS: The liposomes were pre2 paredbyconventionalrotary2evaporatedfilm2ultrasonication method.The prescription and preparation of liposome were opti2 mized by uniform design.Its shape and size distribution were detected under transmission electron microscope.A method to deter mine the encapsulated rate of the liposome by high perfor2 mance liquid (HPLC) was established.RESULTS: Glycyrrhizic acid liposome was regular under its microphotograph and the diameterwas 40 - 60 nm.The entrapment efficiency of the gly2 cyrrhizic acid liposome was 63. 0% - 89. 0%. CONCLUSI ON: The entrapment efficiency of glycyrrhizic acid liposome and the stability of glycyrrhizic acid liposome prepared by conventional rotary2evaporated film2ultrasonication method is good. 【Keywords】glycyrrhizic acid; liposome; uniform design; encap2 sulation 【 摘 要 】 目的:优化甘草酸脂质体的处方及制备工艺.方 法:用旋转蒸发薄膜 2 超声法制备甘草酸脂质体,用均匀设计 优选该脂质体的处方及制备工艺,采用扫描电镜观测其外观、 大小及分布,用HPLC测定其包封率,初步考察该制剂的稳定 性.结果:用旋转蒸发薄膜 2 超声法制备的甘草酸脂质体球形 圆整,大小较均匀,粒径4060 nm,包封率63. 0%89. 0%. 结论:薄膜分散法优化工艺后制备得到的脂质体包封率较高, 稳定性较好. 【 关键词 】 甘草酸;脂质体;均匀设计法;包封率 【 中图号 】R944. 1 【 文献标识码 】A 0 引言 甘草酸具有抗炎、 抗氧化、 抗过敏、 抗肿瘤、 增强 免疫功能、 诱生干扰素等作用 1 ,可明显促进肝细胞 再生 2 ,目前临床上使用的甘草酸注射液副作用 大 3 . 我们将其制备成脂质体,以促进吸收,提高疗 效,降低副作用. 1 材料和方法 1. 1 材料 旋转蒸发器(上海申顺生物科技有限公 司) ,W201恒温水浴锅(上海申顺生物科技有限公 司) , SHZ型真空干燥箱(北京科伟永鑫试验仪器设 备厂 ) , 超声波清洗器(北京医疗设备二厂)微量分析 天平(TG332A型、 上海天平仪器厂 ) , 电动沉淀器(上 海医疗仪器厂 ) , 透析卡(Slide2A2Lyzer R 10K) , JEM2 2000Ex型透射电子显微镜(日本电子 ) , 铜网、 大豆磷 脂 (PL 纯度 95% ,天津市化学试剂公司 ) , 胆固醇 (Chol分析纯,天津市登峰化学试剂厂 ) , 甘草酸(纯 度 95. 6% ,陕西慧科植物开发有限公司 ) , 氯仿 (CHCl3分析纯,西安化玻站化学厂 ) , 甘露醇(MNT 双鹤药业 ). 1. 2 方法 1. 2. 1 均匀设计法优化处方 甘草酸脂质体制备过 程中影响烧瓶壁上及小玻璃珠上的类脂质膜的均匀 性、 水合的难易程度、 脂质体的稳定性、 脂质体形态及 包封率的5种因素:胆固醇与磷脂的质量比、 甘草酸 与磷脂的质量比、 甘露醇溶液的用量、 氯仿的用量、 蒸 发温度,每个因素选6个水平,根据均匀设计法的设 计原则和使用原则,按照均匀设计表U7 (7 6 )进行试 验,得到6个制备甘草酸脂质体的处方(表1) ,按照 实验方案进行,以类脂薄膜的均匀性、 水合的难易程 表1 均匀设计试验方案 处方 号 磷脂 (mg) 胆固醇 (mg) 60 g/L 甘露醇(mL) 甘草酸 (mg) 氯仿 (mL) t( ) 11001001262135 21008018121732 3100601081534 410011016141337 5100908161933 61007014102336 556 第四军医大学学报(J FourthMilMed Univ) 2006; 27(7) http: / /journal . fmmu. edu. cn 度、 脂质体的稳定性、 脂质体的形态、 包封率高低为评 价指标综合评定得出最佳处方. 1. 2. 2 甘草酸脂质体的制备工艺 精密称取处方量 的磷脂和胆固醇于茄型烧瓶中,然后加入氯仿使其充 分溶解后再加入甘草酸,将烧瓶放在超声清洗器上超 声使药品完全溶解后,再经旋转蒸发仪旋转蒸发除去 氯仿(旋转蒸发薄膜分散法 ) , 可看见在烧瓶上形成 一层半透明的薄膜,将烧瓶放在真空干燥箱中干燥 后,加入甘露醇溶液进行水合,再水浴超声得乳白色 半透明液体,依次经过0. 8m和0. 45m微孔滤膜 过滤,分装于适合的安瓿中, 4条件下密闭避光保 存.精密量取甘草酸脂质体2. 0 mL,注入透析卡.将 透析卡浸入甘露醇液中透析3次,第1次2 h,换溶液 后再进行第2次透析,时间为2 h左右,第3次将其 保存在4 温度下透析12 h以除去游离药物,然后 从卡中取出药物, 4 下保存.取3批样品,每批样品 5个样本,采用反相高效液相色谱法测定甘草酸脂质 体的包封率.取脂质体适量,加甲醇溶液溶解、 稀释, 取稀释液20L进样.色谱条件:流动相:甲醇 磷酸 盐缓冲液(50 mmol/L) (6832) ;流速: 1 mL /min;紫 外检测波长为254 nm;进样量为20L;柱温:室温. 以测定甘草酸脂质体的包封率. 1. 2. 3 脂质体的电镜观察 将所制得的脂质体,加 水稀释到合适的浓度,取1滴于点滴反应瓷板的凹槽 内,并将喷碳铜网放于试液上(膜面向下 ) , 1 2 min 后取出铜网,用滤纸小片从铜网边缘吸干多余液体; 按上述同样方法,将该铜网放在染液滴(20 g/L磷钨 酸溶液, pH 7. 0)上约30 s,用滤纸小片从铜网边缘吸 干多余染液,干燥.在透射电镜下观察脂质体的形态 及分布并测量其粒径. 2 结果 2. 1 包封率和处方优化 通过均匀设计法优化实 验,结合类脂质膜的均匀性、 水合时间、 脂质体的稳定 性、 脂质体的形态、 包封率等确定制备甘草酸脂质体 的处方, 6为最佳处方工艺,即:磷脂100 mg,胆固醇 70 mg,甘草酸10 mg,水合介质甘露醇14 mL,氯仿23 mL,氯仿蒸发温度36.按处方6制备得到的脂质 体结合类脂质膜的均匀性好、 易水合、 脂质体稳定、 脂 质体的形态好、 包封率高(表2). 2. 2 电镜结果 在透射电镜下可观察到处方6和处 方2所制得的甘草酸脂质体的粒径均匀,在4060 nm 之间,成圆形或类圆形,整体分布比较均匀(图1). 表2 脂质体的包封率和处方优化结果(n =3) 处方 号 包封率 (% , xs) RSD (% ) 类质膜的 均匀性 水合t (min) 脂质体 稳定性 脂质体 形态 163. 031. 482. 4较均匀50较差 268. 052. 493. 7均匀10好较好 375. 671. 602. 1均匀8较差 480. 514. 115. 1不均匀50较差 583. 481. 581. 9较均匀15差 689. 022. 032. 3均匀11好好 A:处方6; B:处方2. 图1 甘草酸脂质体的超微结构 TEM100 000 3 讨论 甘草酸是水溶性极低的药物,只有氯仿对甘草酸 的溶解较完全,且形成的薄膜也比较好,所以我们采 用氯仿作有机溶媒.制备脂质体的方法很多,主要 有:薄膜分散法、 逆相蒸发法、 高压乳匀法、 乳化分散 法、 超声波分散法等.逆相蒸发法和超声波分散法适 合于包裹水溶性药物,但甘草酸的水溶性极低,所以 不宜选择.高压乳匀法、 乳化分散法等需要加热到一 定的温度,对甘草酸脂质体的稳定性有影响.旋转蒸 发薄膜分散法适合于脂溶性及水溶性低的药物且简 便易行,适合于实验室制备.载药的脂质体和游离的 药物必须分离后才能测定包封率.常用的分离方法 656 第四军医大学学报(J FourthMilMed Univ) 2006; 27(7) http: / /journal . fmmu. edu. cn 有凝胶层析法、 离心法、 透析法.而凝胶层析法操作 繁琐,高速离心时脂质体有可能凝聚而被破坏,因此 在本次实验中采用透析法. 【 参考文献 】 1柳长华.李时珍医学全书M .北京:中国中医药出版社, 1999: 418. 2 Liu J,McIntush H,Lin H. Chinese medicinal herbs for chronic hepa2 titisB:A systematic reviewJ . Liver, 2001, 21 (4) : 280 - 286. 3 徐会选.甘草酸类药物的不良反应 J .药物不良反应杂志, 2003, 5 (3) : 166 - 171. 编辑 王小仲 经验交流 文章编号: 100022790 (2006) 0720657201 老年患者右全肺切除术后骨盆转移1 例的麻醉处理 张旭东 1 ,任鹏程 1 ,张贵和 2 (第四军医大学唐都医院: 1全军骨肿瘤研究所 , 2麻醉科 ,陕西 西安710038) 收稿日期: 2006203201; 接受日期: 2006203213 作者简介:张旭东.学士,医师.Tel: (029) 84777135 Email: zxdong 126. com 【 关键词 】 肺肿瘤;骨肿瘤;全肺切除术 【 中图号 】R734. 2 【 文献标识码 】B 1 临床资料 患者男性,年龄68岁,体质量62 kg,无诱因出 现咳嗽,咯血痰,右臀部及右下肢持续性疼痛1 mo余就诊,胸 部CT及纤维支气管镜检查后诊断为“ 右肺中心型肺癌 ”,入 我院胸外科. 2005212214在气管插管,静吸复合全麻下行“ 右 全肺切除及纵隔淋巴结清除术 ”,手术顺利,术后切口愈合良 好,而右臀部及右下肢疼痛未减轻,行骨盆平片, CT检查示 “ 右侧髂骨翼骨质破坏,周围软组织肿胀 ”,全身骨静态显像 (ECT )检查示“ 右髂骨骨代谢异常 ”,结合病史,经我院骨科 会诊后诊断为“ 右髂骨肿瘤(肺癌骨转移)” 转入我院骨科. 查体:消瘦面容,神志清楚,回答切题,半主动体位.胸廓不对 称,右侧略塌陷,右侧胸廓后外方沿第5, 6肋间走向可见一 长约20 cm手术切口,愈合良好.呼吸动度右侧明显小于左 侧,叩诊过清音,呼吸音消失,左侧叩诊清音,呼吸音清,未闻 及干湿啰音.专科情况:左侧臀部略显肿胀,外上方沿髂骨翼 走向压痛明显,无反射痛.化验及辅助检查,血常规91 g/L, RBC 3. 081012/L.血气分析:轻度低氧,肺功能检查“ 中度限 制性肺通气障碍 ”.术前诊断“ 右髂骨肿瘤(肺癌骨转移)”. 2006201209在“ 气管插管,全凭静脉麻醉复合硬脊膜外腔阻 滞 ” 下行“ 右髂骨肿瘤微波灭活,病灶清除术 ”.麻醉前禁饮 食、 水8 h,麻醉前30 min肌内注射东莨菪碱0. 3 mg,安定10 mg,入室后开放静脉输入50 g/L葡萄糖盐水500 mL以补充 禁食水所带来的水分丧失,连接BP2508型多功能心电监护仪 连续监测心电图,有创桡动脉压,氧饱和度,取左侧卧位,选腰 1, 2间隙行硬脊膜外腔穿刺置管,实验量推注12 mL /L碳酸 利多卡因5 mL, 10 min后阻滞平面固定于胸8水平.然后静 脉注射咪唑安定5 mg,芬太尼150g,异丙酚100 mg ,维库溴 铵6 mg后气管内插管( I D8. 0) ,机械通气控制呼吸,潮气量6 mL /kg,呼吸频率1214次/min ,维持呼气末二氧化碳分压 (PETCO2)于3040 mmHg (1 mmHg = 0. 133 kPa) ,麻醉维 持以连续硬膜外及异丙酚加芬太尼靶控输注 1. 维持总量为 罗哌卡因3 mg/kg ,异丙酚6 mg/kg,芬太尼6g/kg,间断追 加维库溴铵(共12 mg ).术中输入乳酸钠林格液1000 mL,血 浆代用品佳乐施500 mL,红细胞悬液600 mL,血浆200 mL,维 持平均动脉压8090 mmHg,总尿量500 mL.术后充分吸痰, 待吞咽,呛咳反射恢复并睁眼后拔管,安全送返病房.持续低 流量吸氧,心电图,氧饱和度,无创血压监测.并给以2 g/L耐 乐品3 mL /h术后镇痛. 2 讨论 患者年龄大,行“ 右全肺切除及纵隔淋巴结清除术 ” 不足1 mo,肺功能检查提示“ 中度限制性肺通气障碍 ”.此次 行骨盆肿瘤手术,由于手术难度大,时间长