亚硝酸盐氮对凡纳滨对虾毒性和抗病相关因子影响.pdf

第 3 0卷 第 4期 2 0 0 6 年 7月 水生生物学报 AC TA HYDROBI OL OGI CA SI NI CA Vo 1 30No 4 J u l y， 2 0 0 6 亚硝酸盐氮对凡纳滨对 虾毒性和抗病相关因子影响 黄翔鹄 李长玲 郑 莲 刘楚吾 周 洁 ( 广东海洋大学水产学 院 ， 广东湛江5 2 4 0 2 5 ) 摘要 ： 用 常规生 物毒性实验方 法， 在不同盐度下进行亚硝酸盐氮对凡纳滨对虾 的急性毒性实 验 ； 并 加亚硝 酸盐氮于 凡纳滨对虾 的养殖环境中 ， 检测 与抗病力相 关因子的变化 。研究亚硝酸盐氮对凡纳滨 对虾的毒性 和抗病力 相关因 子 的影响 。结果表明 ： 盐度对 亚硝 酸盐氮 的毒性有较 大影 响。盐度为 3 l 时 ， 2 4 h L C 4 8 h L C 7 2 h L C 5 0 和 9 6 h L C 5 0 分别 为 3 1 4 9 m g L 、 1 7 5 3 m g L 、 1 0 0 2 m g L和 8 9 0 m g L ； 盐 度 为 1 7时 ， 分 别为 1 3 2 3 m g L 、 6 5 6 m g L 、 5 1 3 m g L和3 9 5 m g L 。 盐度 3 l 实验组 的亚硝 酸盐氮半致死浓度均显著 ( P0 0 5 ) 高于盐度 l 7实验 组。在低盐度 条件下亚硝 酸盐氮的毒 性较 强。亚硝酸盐氮对凡纳滨对虾抗病力相关因子有显著 的影响。亚硝 酸盐氮浓度 为 4 0 m g L和 8 0 m g L时 ， 其 血细胞数 、 超 氧化物歧化酶 ( S O D ) 活 力 、 酚 氧化酶 ( P O ) 活 力 、 抗 菌活 力( u 。 ) 、 溶 菌活力 ( u I) 和血 清蛋 白含 量均 显著 ( P 0 0 5 ) 低于对照组 ； 不吸污组抗病力相关 因子活性均 显著( P 0 0 5 ) 低于吸污组。低浓度 的亚 硝酸盐氮可降低 凡纳滨对虾抗病能力 ， 亚硝 酸盐氮浓度越高 ， 其抗病能力越弱 。 关键词 ： 亚 硝酸盐氮 ； 凡纳滨对虾 ； 抗病力 ； 急性毒性实验 中图分类号 ： $ 9 6 6 1 2 文献标识码 ： A 文章编 号 ： 1 0 0 0 3 2 o 7 ( 2 0 0 6 ) o 4 o 4 6 6 0 6 对虾 在有 机 胁迫 环 境 中 ， 虾 体 内与 抗 病 有 关 的 酶活力明显下降 ， 对病原体的易感性提高u ； 孙舰军 报道 了氨氮可降低 中国对虾与抗 病力相关酶 的活 力_ 2 ； 即使在较低浓度 的条件下亚硝酸盐氮对对虾 氧消耗 、 氨排 泄及 渗透压等生理功 能有显著影响。 对虾长期处 于高浓度 的亚硝酸盐 氮 的水体 中会发 病。吴维宇等认为 ， 亚硝酸盐氮和氨氮是集约化对 虾养殖环境中重要的污染成份_ 3 J 。吴中华等进行了 中国对虾 慢性 亚硝 酸盐 氮 和氨 中毒 的组 织病 理学研 究 _ 4 J 。 目前亚 硝酸 盐氮 已成 为对虾 养殖 系统 中主要 的胁迫 因子之 一 。关于 养殖 环境生 物种类 和饲料 组 成对凡纳滨对虾 ( L i t o p e n a e u s v a n n a m e i ) 抗病力研 究 已有 相关 报 道 _ 5 6 J ， 但 亚 硝 酸盐 氮 对 凡 纳 滨 对 虾 抗 病力影响未见有报道 。本文研究亚硝酸盐氮对凡纳 滨对虾抗病力相关 因子的影 响， 以期为对虾疾病的 生态防治提供理论依据。 1 材 料与 方法 1 1 实 验 对 虾 凡 纳滨 对虾 L v a n n a m e i ( 下 称 对 虾 ) 取 自湛 江 中联 养 殖有 限公 司 养 殖 场 ， 选 择健 康 、 活力好的对虾作为实验用虾。 1 2 海水、 饵料和药品海水取 自湛江 中联养殖有 限公司养殖场 ， 经沉淀过滤处理 。培养对虾所用饲 料为湛江粤海饲料有 限公 司生产的对虾配合饲料 。 实 验用 药品 为分 析纯 亚硝酸 纳 。 1 3 急性毒性实验方法 分别在盐度为 3 1和 1 7 条件下进行。根据预备 实验结果 ， 亚硝酸盐氮以等 对 数 间 距 J 设 5个 浓 度 组 ， 分 别 为 3 3 2 、 5 9 0 、 1 0 5 0 、 1 8 6 7和 3 3 2 0 m g L 。每组设 2个平 行组 。实 验 水体 0 1 m 3 ， 每组 放 入平 均 体 长 1 0 e ra对 虾 2 0尾 ， 每 隔 2 4 h换 水一 次 ， 换 水 量 为 1 0 0 ， 然 后 加入 亚 硝 酸 钠 至 相 应 的 浓度 ， 及 时 剔 除 死 亡 个体 ， 记 录 2 4 h 、 4 8 h 、 2 7 h和 9 6 h 对 虾 的成活尾 数。实验过 程 中水温为 2 9 - 1- 1 ， p H为 7 9 。 1 4半致死浓度计算 将实验结果按直线内插法 求 出亚硝 酸 盐 氮 ( N 0 2 N) 对 对 虾 的 2 4 h 、 4 8 h 、 7 2 h和 9 6 h的半致 死 浓度 ( L C s 0 ) J ， 并按 下式 求 出其 安全 浓 度 C s ： C s=0 19 6 h L C 5 0 L 。 1 5 抗病 力试验 条件 实 验水 体 为 0 5 m 3 ， 分别 在 换 水 和 不换 水 条 件下 进 行 。换 水 条件 下 ， 设 置 1 个 收稿 日期 ： 2 0 0 5 0 4 0 6 ； 修订 日期 ： 2 0 0 6 0 3 2 7 基金项目： 广东 省科技攻关项 目， ( 项 目编号 ： C 2 0 8 2 3 ) 资助 作者介绍： 黄翔鹄 ( 1 9 6 2 一 ) ， 男 ， 副教授 ， 从事水生生态学研究； T e l ： 0 7 5 9 2 3 6 2 1 6 6 ， E - ma i l ： y b e l t o m c o 1l 维普资讯 4期 黄翔鹄等 ： 亚硝酸盐氮对凡纳滨对虾毒性和抗病相关 因子影 响 4 6 7 对照组和 2个实验组 ， 每组设置 2个平行组 。根据 毒性实验结果 ， 在其安全浓度范围内， 实验组 1 保持 亚硝 酸盐 氮 浓 度 为 4 0 m g L左 右 ， 实 验组 2保 持 亚 硝 酸盐氮 浓度 为 8 0 m g L左 右 。实验 过程 中每 天下 午换水 ， 换 水 量 1 0 0 ， 换 水 后 实 验 组 加 入 亚 硝 酸 钠 。不换 水 条件下 ， 设 置 2个实 验组 ， 每组 设 置 2个 平 行组 ， 不 同 的是 实验 组 1 每 3 d吸污 1 次 ， 实验 组 2 在试验 过程 中不 吸 污 。每 组 放 入 平 均体 长 1 0 e m对 虾 2 0尾。实验盐 度为 3 1 ， p H为 7 9 ， 水温为 2 9 1 ， 溶氧 平 均 为 6 5 m g L ， 日投 饵 3次 。实 验 进 行 到第 1 8天时 ， 抽 取 对 虾 的血 清 ， 测 定 对 虾 与 抗 病 力 有关的一些因子。每天定时测定实验过程中亚硝酸 盐 氮 浓 度 变 化 。亚 硝 酸盐 氮 测 定 用 重 氮 一偶 氮 比 色 法【 。 1 6 血 细胞计 数 根 据 参 考 文 献 1 0 ， 略 有 改进 。 用卡介苗注射器 ， 采用 7号针头 ， 从对虾心脏取血 ， 用 1 0 福尔马林 固定( 固定液 ： 血液 =1：1 ) ， 装入 E p p e n d o ff离 心管混 匀 ， 在 光镜 下进 行血 细胞计 数 。 1 7与 抗 病 力相 关 酶 活 力 的测 定 从对 虾 心 脏 取 出 的血 ， 置 于 E p p e n d o ff管 中 ， 在 4 静 置 数 小 时 ， 取 出蓝色血清在 一2 0 保存 备用_ 】 。 。 。对 虾血清蛋 白 含量测定 按照 C o m a s s i c 亮 蓝 法u ， 按 该 方 法规 定 的 条件 ， 蛋 白质含量 ( m g m L )=( 测定 管 O D 标 准管 O D ) 标准血清浓度。超 氧化物歧化酶( S O D) 活力 按改 良 的 连 苯 三 酚 自氧 化 法 测 定 _ 】 。酚 氧 化 酶 ( P O ) 活力 参 照 A s h i d a _ 】 J 以 L d o p a为底 物 比 色 的方 法测定。溶菌酶活力的测定 ， 将经 2次活化的溶壁 微球菌接种于牛 肉膏 蛋 白胨 固体培养基培养 4 8 h ， 取 出后 离 心 ， 收 集 菌 体 ； 再 用 0 1 m o l L的磷 酸钾 盐 缓 冲液 ( p H=6 4 ) 稀 释 至 A 5 7 o = 0 3 ， 配 成反 应底物 的悬液 ， 供 测试用 ； 按 该方 法 规 定 条 件 ， 溶 菌 酶 活力 ( U I ) =( A 0 一A) A 0 。抗 菌 活 力 的 测 定 是 以 大肠 杆菌 为底物 _ 】 ， 用 0 1 m o l L的磷酸钾 盐缓冲液 ( p H= 6 4 ) 稀释至 A 5 7 0 =0 3 ， 在该方法规定条件下 ， 抗菌 活力( U ) = ( A o A ) A o 。 2结果 2 1 亚硝酸 盐氮 对对 虾 的急性 毒性 随亚硝 酸盐氮浓度 升高 ， 对对虾 的毒性越 强 。在 不 同盐 度 的对虾养 殖环境 中 ， 亚硝 酸盐 氮对对 虾 的毒 性存 在差异 。当亚硝 酸盐氮浓 度为 5 9 0 m s L ， 盐度 为 3 1 时 ， 亚硝 酸盐 氮 在 2 4 h和 4 8 h对对 虾 基本 无 毒性 ； 但 在盐度 为 1 7时 ， 在 2 4 h和 4 8 h对 虾死 亡 率 分 别 为 2 5 0 和 4 5 0 ， 已有 较强 毒性 。盐 度 为 3 1 时 ， 亚 硝 酸盐 氮在 2 4 h 、 4 8 h 、 7 2 h和 9 6 h的半 致死浓度 均大 于盐 度在 1 7条 件 下 ， 单 因 子 方 差 分 析 ， F分 别 为 4 5 0 0 、 2 0 1 l 、 3 4 9 5和 3 0 0 1 ， P 0 0 5 ， 差 异不 显著 ； 实验 进 行到 6 、 1 0 、 1 3 、 1 6和 1 8 d时 ， F分 别 为 6 1 8 6 、 3 0 1 6 、 5 5 9 8 、 3 3 1 0和 表 4 不换水 实验条件下实验过程中亚硝酸盐氮浓度的变化 T a b 4 V a r i a t i o n o f N 0 2 一 N c o n c e n tr a t i o n d u r i n g t h e e x p e r i m e n t u n d e r t h e e x p e r i me n t c o n d i ti o n w i t h o u t r e n e w i n g wa t e r 2 9 5 7 ， P 0 0 5 ， 差异显 著 。 2 3对 虾与抗 病 力相关 因子 测定 换水条件下 ， 实验组 1 、 2血细胞数和与抗病有 关 酶 活力 相 对 于 对 照 组 有 明显 的下 降 。 血 细 胞 数 分别 降低 了 6 6 3 和 6 8 3 ， 血 清 蛋 白 含 量 分 别 降低 了 6 5 和 1 1 6 ， 溶 菌 活 力 分 别 降 低 了 4 8 9 和 5 6 9 ， 抗 菌 活 力 分 别 降 低 了 2 4 8 和 5 9 6 ， 酚 氧化 酶 分 别 降 低 了 2 1 9 和 4 3 9 ， 超 氧化 物 歧 化 酶分 别 降低 了 1 8 9 和 2 3 9 ( 表 5 ) ， 单 因子 方差 分 析 ， F分 析 为 1 1 0 7 、 1 0 1 6 、 1 0 6 3 、 1 2 4 8 、 2 3 9 5和 2 O 2 3 ， P0 0 5 ， 差 异 显 著 。不 换 水条件下 ， 实验组 2血细胞数 和与抗病有关酶活力 相对 于 实 验组 1有 明显 的 下 降 。血 细 胞 数 降 低 了 6 2 2 ， 血 清 蛋 白含 量 降低 了 1 1 7 ， 溶 菌 活 力 降 低 了 4 8 9 ， 抗菌活力降低 了 6 2 1 ， 酚氧化酶降 低 了 1 2 3 ， 超 氧 化物 歧化 酶 降低 了 1 5 9 ( 表 6 ) ， 单 因子 方 差 分 析 ， F分 别 为 2 1 0 3 、 2 5 7 1 、 2 7 9 2 、 2 5 6 0 、 1 9 5 3和 2 8 6 5， P0 0 5 ， 差 异显 著 。 对虾 养殖 环 境 中 的亚 硝 酸 盐 氮 能 降低 对 虾 与 抗 病 力相关因子 的指标 。亚 硝酸盐 氮 浓度越 高 ， 对虾 抗 病 能 力越 弱 。 表 5 换水实验条件下凡 纳滨对 虾抗病力相关 因子的测定结果 T ab 5 An a l y z i n g r e s u l t s o n f a c t o r s r e l a t i n g t o a n t i d i s e a s e ab i l i t y o f L v a n n a me i u n d e r w a t e r - ren e w e x pe ri me n t a l c o n d i t i o n 维普资讯 4期 黄翔鹄等 ： 亚硝酸盐氮对凡纳滨对虾毒性 和抗病相 关因子影响4 6 9 3讨 论 3 1盐度与 亚硝酸 盐 氮毒性 亚 硝 酸盐 氮 对 虾体 的影 响不 是 恒 定 的 ， 而是 受 许 多 因子 的制 约 ， 如 溶解 氧 、 盐度 和硬 度 、 对 虾 个 体 的大小和生理状态。实验表明 ， 亚硝酸盐氮的毒性 与养 殖环境 中盐 度有密 切关 系 ， 盐 度 为 1 7的养殖 环 境 中亚硝酸盐氮 的安全浓度为 4 O m g L ， 盐度为 3 1 的养 殖环 境 中亚 硝 酸盐 氮 的 安 全 浓 度 为 8 9 m g L ， 高出约 2倍。在实验条件下， 高盐度 的养殖环境 中 亚 硝酸盐 氮毒 性较 低 ， 在低盐 度 的环境 中养殖对 虾 ， 亚硝 酸盐 氮 对 对 虾 的毒 性增 强 ( 表 1 ， 2 ) 。 因此 ， 增 加盐 度能 降低养 殖环境 中亚硝酸 盐氮 的毒 性 。 3 2 亚硝酸 盐氮 的毒 性机理 甲壳 类动 物 血 液 中 的血 蓝蛋 白 ， 其 辅 基是 含 铜 的化合 物 ， 水 体 中 的亚 硝 酸盐 氮 进 入 虾 类 的血 淋 巴 后 ， 促使氧合血蓝蛋 白转化为脱氧血蓝蛋白， 导致血 淋巴对氧的亲和性降低 ， 从 而降低 了机体的输氧能 力 ， 因此会 对 机 体 产 生 毒 害 作 用 1 5 J 。 有研 究 表 明 ， 水体 中亚 硝 酸 盐 氮 浓 度 过 高 会 导 致 中 国 对 虾 ( P e ， l n e c h i n e s i s ) 血 清 中 P O、 S O D 和 溶 菌 酶 活 力 下 降 ； 亚硝 酸盐 氮 可 降 低 日本 对虾 ( P e n a e u s j a p o n i c ) 和罗氏沼虾( Ma c r o b r a c h i u m r o s e n b e r g i i ) 的抗病力 水 平 、 血 细 胞 吞 噬 活 力 以 及 对 细 菌 的 清 除 效 率 。在本实验结束时， 换水条件下 ， 实验组与 抗病 有关 酶活 力 相对 于 对 照 组显 著 下 降 ， 溶 菌 活 力 降低 了 4 8 9 一5 6 9 ， 抗 菌 活 力 降 低 了 2 4 8 一 5 9 6 ， 酚 氧化 酶降 低 了 2 1 9 一4 3 9 ， 超 氧化 物 歧化酶降低 了 1 8 9 一2 3 9 ； 血清蛋 白含量降低 了 6 4 5 一1 1 6 ；血 细 胞 数 减 少 了 6 6 3 一 6 8 3 。这些变化与 亚硝酸盐 氮含量有 密切关 系 ( 表 3 ， 4 ) 。 3 3对 虾的疾 病发 生与 抗病 力 对虾 疾病 发 生 取决 于 虾体 抗 病 力 及环 境 因素 ， 其 中环境 因素起 着 重要 作 用 ， 它 不 仅 影 响虾 体 抗 病 能力 ， 也影 响 病原 体 数 量 。机体 本 身 抗 病 力下 降 的同时 ， 对病 原 体 的 易感 染 性 大 大增 加 。罗 氏 沼虾 对细菌 0 c 0 c c g a r v i e a e的易感 性 提 高 ， 感 染过 程 中累计 死 亡 率 与 亚 硝 酸盐 氮 浓度 正 相 关 。亚 硝 酸 盐氮 浓度 越 高 ， 斑 节 对 虾 ( P e n a e u s m o n o d o m) 体 内 M B V感 染度 越 高 。 。 。 对虾 血 细 胞 在 防御 中起 着 重 要 作用 ， 如 透 明细 胞 具 有 吞 噬 作 用 ， 半 颗 粒 细 胞 与识别 异物 能力有 关 ， 颗粒细 胞 内含有 酚氧化 酶 原 ， 这 种酶原 在 异物 的初 始 识 别 中起 关 键 作 用 ， 血 细 胞 数量下降势必降低防御能力 。因此 ， 养殖水域 中的 亚 硝 酸盐氮 是诱 发对 虾暴 发性 疾病 的重要 环境 因 素 之 一 。 3 4 对 虾 养殖环 境 中的亚 硝酸 盐氮 亚硝酸盐 氮是三态氮 中不稳定 的中间形式 ， 溶 氧 充足 时 ， 在 硝化 细 菌 的 作 用下 可 转 化 为无 毒 的硝 酸 盐氮 ， 而 在 溶 氧 不 充 足 时 ， 在 反 硝 化 细 菌 的作 用 下 ， 硝 酸盐氮 被 还原 为亚 硝 酸 盐 氮 。养 殖 水体 中亚 硝酸盐 氮 的含量 还 与 氨 的 硝化 作 用 有关 ， 氨 在亚 硝 化细菌 的作 用下 形 成 的 亚硝 酸 盐 氮 ， 继 而 在 硝化 细 菌 作用 下被 氧化 成 硝酸 盐氮 ， 而 对 这 两 种 细菌 具 有 不 同影 响 的 各 种 因素 都 可 能 导 致 亚 硝 酸 盐 氮 的积 累。 当 p H值 升 高 可导 致 亚 硝酸 盐 氮 的 大 量 积 累 。 亚 硝酸 盐氮 在水 体 中是 不稳 定 的 ， 但 集 约 化 对虾 养 殖 池 中亚硝 酸盐 氮 的 含量 仍 然 很 高 ， 从 养 殖初 期 到 中后期 ， 一些 虾池 中 的亚 硝 酸盐 氮 含 量 均 随 时 间 的 推 移 而呈上 升趋 势 。亚硝 酸盐 氮含量 过 高情况 主要 在 一些 池底 老化 、 淤泥 中含 有大 量 的有机 物 、 放 养密 度 过高 、 投饵 量过 多 和 养 殖 池排 污 不 彻 底 的池 塘 发 生。作者认为， 只要保持对虾养殖环境 中有合理 的 生物群落 ， 充足 的溶解氧和合适 的 p H， 就能使 养殖 环境中亚硝酸盐氮量下降。 参考 文献 ： 1 D i n g M L， L i n L ， L i G Y，e t a 1 E ff e c t s o f o r g a n i c p o l l u t i o n o n P e r to e t t$c h i n e s u b o d y S i n t r a e n v i r o n m e n t a n d e x t e ma l e n v i r o n m e n t J 0 c 删 S i n，1 9 9 7 ， 2 8( 1 ) ： 7 一 l 2 丁美丽 ， 林林 李光 维普资讯 4 7 0 水 生 生 物 学 报 3 0卷 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 友 ， 等有 机污染对 中国对虾体 内外环境 影响的研 究 海洋 与湖沼， 1 9 9 7， 2 8( 1 ) ： 7 一 l 2 S u n J J ，D i n gM L E f f ect o f a r mn o n i a - N o n a n t i - d i s e a s e a b i l i t y o fP e - ， m c h i n e s i s J O c e a n o l e t L i r r m o l S i n ，1 9 9 9 ， 3 0( 3 ) ： 2 6 7 2 7 2 孙 舰军 ， 丁美丽 氨氮 对中国对虾抗 病力 的影响 海洋与 湖沼 ， 1 9 9 9 ， 3 0( 3 ) ： 2 6 7 2 7 2 J WuW N，G u o L J ，L i nH S，e t a T h e a n a l y s i s o f s h r i mpm a r i c u h u r a l w a te r b y f a c t o r a n a l y s i s m e t h o d - 【 J J E n v i r o n M o n it o r i n g i n C h i n a ， 1 9 9 8 ， 1 4( 2 ) ： 4 3 4 4 吴维宁 ， 郭履骥 ， 林惠山， 等 应用 因子分析 法分析对虾养殖水质 中国环境监测， 1 9 9 8 ， 1 4( 2 ) ： 4 3 4 4 W u Z H，L i u C B，L i u C Re t o 2Hi s t o p a t h o lo g i c al r e s e a r c h o n c h r o n i c p o i s o n i n g o f P e n a e u s c hin e n s s b y n i t r i t e a n d a m m o n i a 【 J J _ ， C e n t r a l C h i na N o r m a l U n i v e r s ( N a t S c i ) ，1 9 9 9 ， 3 3( 1 ) ： 1 l 9 1 2 1 吴 中华 ， 刘昌彬 ， 刘存仁 ， 等 中国对 虾慢性 亚硝酸 盐和 氨中毒 的组织病理学研究 华 中师范大学学 报， 1 9 9 9 ， 3 3( 1 ) ： 1 l 9 1 2 1 Hu a n g X HL i C L，L i u C W e t S t u d y o n Oo c y s y i s b o r g e i an d Nh l o r is o c u l a t a i mp r o v i n g e n v i r o n me n t o f s h r i mp p 0 n d an d s t r e n g t h e n i n g ant i d i s e a s e abil i ty o f P e n a e u s v a n nam e i J J A c t a - d r o b io S i n ，2 0 0 2 ， 2 6( 4 ) ： 3 4 2 3 4 7 黄 翔鹄 ， 李 长玲 ， 刘楚 吾 ， 等 两种微藻改善虾池 环境增 强凡纳滨对 虾抗病 力的研 究 水生生物学报 ， 2 0 0 2， 2 6( 4 ) ： 3 4 2 3 4 7 Z h o u Q c，D i n g Y， Z h e n g S X，e t a E ff ect o f d i e ta r y v i t a m i n C s u p p l e me n t a t i o n o n g r o w t h an d an t i - d i s e a s e ab i l i t y o f s h r i mp， Pe n a e u s v a n n a m e i J A c t a H y d r o b i o S i n ，2 0 0 4 ， 2 8( 6 ) ： 5 2 9 5 9 8 周 歧 存 ， 丁炳 ， 郑石 轩， 等 维 生素 c对凡纳滨对 虾生长及抗病 力 的影响 水生生物学报 ， 2 0 0 4 ， 2 5( 6 ) ： 5 2 9 5 9 8 Z h o u Y X，Z h an g Z S Me t h o d s o f t o x i c i t y t e s t t o a q u a t i c o r g a n i s m s M B e i j i n g ：A g r i c u l t u r e P r e s s ，1 9 8 9 ， 1 l 一2 7 周永欣 ， 章宗涉 水生生物毒性实验方法北京 ： 农业出版社 ， 1 9 8 9 ， 1 l 一2 7 Z a n g W LT o x i c e ff e c t s o f Cn 2 、 Cu “ 、 C d an d NH 3 o n C h i n e s e p r a w n 【 J C h i n J O c e a n o 1 L i m o l ，1 9 9 3 ， 1 1( 3 ) ： 9 5 9 8 C h e n J R G u i d e b o o k o f h y d r o c h e m i s t r y M B e i j i n g ：C h i n a A g r i - c u lt u r e S c i e n c e and T e c h n o l o g y P r e s s ， 2 0 0 0 ， 5 陈佳荣 水化学 实 验指导书 北京 ： 中国农业 出版社 ， 2 0 0 0， 5 G u an S H I m mu n i t y ，c e l l c u lt u r e an d d i s e a s e r e sea r c h e s o n s e a w a t e r a q u i c u h u r e ani m a l s M J i n a n ：S h a n d o n g S c i e n c e and T e c h n o l o g y P r e ss1 9 9 9 ， l 一3 l 管 华诗 海 水养殖 动物 的免 疫 、 细 胞培 养 和病害研究 济南 ： 山东科学技术 出版社 1 9 9 9 ， l 一3 1 C h e n Q The e x p e ri m e n t a l m e t h o d o f a n t i - a g e i n g s t u d y M B e i j i n g ： The Sci e n t i fi c and T e c h n o l o c al P u b l i s h i n g C o m p a n y o f C h i na M e d i c i n e ，1 9 9 6 ， 6 0 6 m6 0 7 陈勤 抗 衰老研究实验 方法 北京 ： 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 中国医药科技 出版社 。 1 9 9 6 6 0 6 m6 0 7 D e n g B Y，Y u an Q s ， L i W J The i m p r o v e d p y o r g all o l a u t o x id a t io n m e t h ods o n d e t e r m i n i n g S u p e ro x i d e D i s m u t a s e A c t i v i t y J P r o g B io c h e mB i o P h y s ，1 9 9 1 ， l 8( 2 ) ： 1 6 3 邓碧玉 ， 袁勤生 ， 李文杰 改良的连苯三酚 自氧化测定超氧化物歧化酶活性 的方法 生 物化学与生物物理进 展， 1 9 9 1 ， l 8( 2 ) ： 1 6 3 As h i d a M P u r i fi c a t i o n an d c h a r a c t e ri z a t io n o f p ro- p h e n o l o x i d a s e f r o m h e m o l y m p h o f t h e s i l k w o r m B o m b y x m u d J A r c h B io c h e m B i o p h y1 9 71 1 4 4 ： 7 4 9 7 6 2 Wan g L，L i G Y， Ma o Y XS tu d i e s o n t h e a c t iv it i e s an d c h a r a c t e r is - t ie s o f t h e an t ib a e t e r i a ， b a c t e rio l y s i s an d p h e n o l o x i d a s e i n t h e h a e mo l y m p h o f P e n a e u s c h i n e s i s 【 J O c e a n o l e t L i m n o l S i n，1 9 9 5 ， 2 6( 2 ) ： l 7 9 1 8 5 王 雷， 李光 友， 毛远 兴 中国对虾 血淋 巴 中 的抗菌 、 溶菌 活力与 酚氧化酶 活力的测定 及其特性 研究 海 洋与湖沼， 1 9 9 5 ， 2 6( 2 ) ： l 7 9 一l 8 5 C h e n g S Y，C h e n J CHa e mo c y an i n o x y g e n a ff i n i ty an dthef r a c t i o n - a t i o n o f o x y h e mo c y a n i n an d d e o x y h e mo c y a n i n f o r P e n a e u s mo na d o m e x p o t o e l e v a t ed n i t ri t e J j A q u a t T o x i c o l ，1 9 9 9 4 5： 3 5 4 6 C h e n J C，L e e YE ff e c t s o f n i t rit e e x p o s u r e o n a c i d b a s e b a l an c e r e s p i r a t o r y p rot e i n，an d i o n c o n c e n t r a t i o n s o f g i an t f res h wa t e r p r a w n Ma c r o b r a c h i u m ro s e n b e r g i i a t l o w p H J A r c h E n v i r o n C o n t a in T o x i - c o 1 1 9 9 7 3 3： 2 9 0 一2 9 7 C h e n g S Y，Ch e n J CTh e t i me - c o u r s e c h a n g e s o f n i t r o g e n o u s e x c ro- t i o n i nthe k u r u m a s h r i m p P e n a e u s j o un c u s fo l l o w i n g n i t ri t e e x pos u r e 【 J A q u a t T o x ie o l ， 2 0 0 1 ， 5 1： 443 -4 5 4 C h e n g S Y，Ch e n J CE ff ec t s o f n i t r i t e e x p o s u r e o nthe h a e mo ly mp h e l ect r o l y t e r e s p i r a t o r y p rot e i n an d f r e e a mi n o aci d l e v e l s an d wa t e r c o n t e n t o f P e n a e u s j a p o n i c u s J A q u a t T o x ie o l ， 1 9 9 8 44 ： l 2 9 一l 3 9 C h e n gW ，L i u C HC h e n J CE ff e c t s o f n i t ri t e o ni n t e r a c t i o n b c t e e n the g ia n t f r e s h w a te r p r a w n Ma c rob r a c h i u m ros e n b e r g i i an d i t s p a tho g e n L a c t o c o c c u s l J J D i s A q u a t O r g， 2 0 0 2 5 0： l 8 9 1 9 7 L i G S ， He J G，L i G F e t o 2Re l a t i o n s h i p s B e t we e n P e n a e u s m o n o d o n Ba c u l o v i r u s I n f e c t i o n an d P h y s i c a l an d C h e mi c al E l e me n ts o f P r a wn- F a r m i n g P o n d Wa t e r J S u p p l e m e n t t o t h e J o u r n a l o f S u n Y a t s e n U n i v e r s ( S u p p 1 ) ， 1 9 9 6 ， 2 6 3 0 李桂生 ， 何建国 ， 李桂峰 ， 等斑节对虾杆状病毒感 染与水体理化因子 中山大 学学报 论丛 ( 增刊 ) ， 1 9 9 6 ， 2 6 3 0 C h e n P，Hu an gH，Ch i X C，e t o 2Th e c o mp o s i t i o nan d u h r a s t r u c - ta r e o f h a e m o c y t e s i n fo u r s pec i e s o f pen a e i d s h r i mp s J A c t a d rob i o S i n ，1 9 9 8 ， 2 2( 2 ) ： l 5 8 1 6 3 陈平， 黄槐 ， 池 信才 ， 等 四 种对虾血细胞组成及超微结构 水生生物学 报， 1 9 9 8 22 ( 2 ) ： l 5 8 一 l 6 3 维普资讯 4期 黄翔鹄等 ： 亚硝酸盐氮对凡纳滨对虾毒性和抗病相关 因子影 响 4 7 1 THE TOXI CI TY OF NO2 - N oN L I T OPENAEUS V ANNAM EI AND EFFECTS OF NO2 - N ON FACTORS RELATI NG TO THE ANTI - DI S EAS E ABI LI TY HUANG Xi a ng- Hu，L I C h a n g - 【 j n g ，ZHEN G I A a n，L I U Ch u - Wu a n d Z HOU J i e ( F is h e r i e s C o l le g e ，G u a n g d o n g O c e a n U n i v e r s i t y ，Z h a a g 5 2 4 0 2 5 ) Ab s t r a c t ：NO2 N i s o n e o f t h e ma i n c o n t a mi n a t i o n s a n d a g r e a t s t r e s s f a c t o r i n t h e i n t e n s i v e p r a wn c u l t u r e s y s t e mT h e r e for e i t i s v e r y i mp o r t a n t t o s t u d y t h e t o x i c i t y o f NO 2 N o n L i t o p e n a e u s v a n n a m e i a n d e ff e c t s o f NO2 - N o n f a c t o r s r e l a t i n g t o t h e a n t i d i s e a s e a b i l i t y f o r t h e h e a l t h c u l t u r e o f Lv a n n a me i Ac u t e t o x i c i t y t e s t o f NO2 - N t o Lv a n n a me i w a s d o n e b y t h e u s u a l me t h o d o f b i o l o g i c a l t o x i c i t y t e s t a t d i ff e r e n t s a l i n i t yA c c o r d i n g t o t h e res u l t o f a c u t e t o x i c i t y t e s t ，NO 2 N wa s i n t r o d u c e d i n t o t h e c u l t u r e s y s t e m o f Lv a n n a m e i a t t o w l e v e l s ( 4 m g L， 8 m g L ) T h o s e w i t h o u t i n t rod u c i n g N0 2 - N w e r e u s e d a s c o n t rol s The w a t e r i n t h e c u l t u r e s y s t e m w a s c h a n g e d wit h p ropo rt i o n o f 1 0 0 e v e ry d a yNa N02 wa s i n t rod u c e d i n t o t h e s a me s y s t e m wit h t h e s a me c o n c e n t rat i o n o f N O2 - N Wi t h o u t re n e wi n g wa t e r ， t wo e x p e rime n t g r o u p w e r e s e t Th e fi l t h o f g ro u p 1 wa s c l e a r e d o n c e e v e ry 4 d a y s ，w h i l e g r o u p 2 wa s n o t Th e b l o o d s e r u m o f p r a w n wa s d rawn o u t o n d a y 1 8 a n d t h e c h a n g e s o f t h e h e mo c y t e n u mb e r ，t h e c o n t e n t o f b l o o d s e rum p rot e i n a n d t h e a c t i v i t y o f p h e n o l o x i d a s e，s u p e rox i d e d i s mu t a s e ，a n t i b a c t e ri al e n z y me ，l y s o z y me o f L v a n n a me i w e re t e s t e dTh e r e s u l t s h o ws t h a t t h e s ali n i t y h a d rema r k a b l e e ff e c t o n t h e t o x i c i t y o f NO 2 - NWh e n t h e s ali n i t y wa s 31 i n t h e c u l t u r e s y s t e m，t h e 2 4h L C 5 0 ， 4 8 h L C 5 0 ， 7 2 h L C 5 0 ， 9 6 h L C 5 0 wa s 31 4 9mg L， 1 7 5 3 mg L， 1 0 0 2mg L a n d 8 9 O mg L，r e s p e e t i v e l y ；wh e n t h e s a l i n i t y w a s 1 7，t h e c o r r e s po n d i n g c o n c e n t rat i o n w a s