CpGODN的免疫刺激作用.ppt

CpG-ODN的免疫刺激作用,陈军浩 南京大学医学院附属鼓楼医院,CPG概念,为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列，即CpG 基序。 一种免疫佐剂 作用靶点TLR9 细胞免疫，体液免疫,Th1免疫应答,慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 HBV免疫耐受，持续感染 肿瘤微小残留病的清除,CPG提高PBMC中Th1细胞,Th1占淋巴细胞百分比,CPG提高PBMC中Th1 、Tc1细胞百分率,*,*,*：与对照组比较，P0.05,CPG刺激BPMC分泌细胞因子,*,*：与对照组比较，P0.05,CPG诱导PBMC杀伤靶细胞,收集CPG活化的PBMC 细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的PBMC；靶细胞为CFSE预染的K562细胞。对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。 效：靶20：1，混合培养2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。,CPG诱导PBMC杀伤靶细胞,CFSE染色靶细胞,浓度为5mol/ L 的CFSE （2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液 取对数生长期的靶细胞浓度108/ L 细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合 37 孵育10 min。 离心洗涤两次后 悬浮细胞备用,CFSE染色靶细胞,实验结果,CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5) CPG活化PBMC 16.855.14 % 对照组 8.622.83 %,*,*：与对照组比较，P0.05,CIK细胞杀伤靶细胞,CIK细胞杀伤靶细胞,研究背景,通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的HBV，达到治疗效果。,研究背景,B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有CpG-ODN受体：TLR-9。本研究探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。,TOLL受体,TOLL受体在血细胞中的表达,活化B细胞负载核心抗原,磁珠分选B淋巴细胞 CPG活化B淋巴细胞 核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况,磁珠分选B细胞,分选前B细胞 7.89%,分选后B细胞 89.6%,活化B细胞负载抗原肽,活化B细胞负载核心抗原,荧光显微镜观察B细胞负载HBcAg18-27肽,APC与T细胞作用机制,CPG对B细胞抗原递呈相关分子的作用研究,CpG2006、2216由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰 对照组为含10%FCS的RPMI1640外周血PBMC，细胞量107/孔，37、5%CO2、48小时 实验组加入CpG2006或CpG2216，终浓度均为1umol/mL，余同上,CpG提高淋巴细胞CD69表达,*,*,*：与对照组比较，P0.05,B细胞CD80、CD86表达,对照组,加CPG-ODN组,加CPG-ODN组,CpG提高B细胞表面CD80、CD86的表达,*,*,*,*,*：与对照组比较，P0.05,B细胞MHC-、MHC-表达,对照组,加CPG-ODN组,CpG提高B细胞表面MHC-、MHC-的表达,*,*,*,*,*：与对照组比较，P0.05,活化B细胞诱导CTL,负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培养(含IL-2的RPMI1640培养液). 收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL. 实验组特异性CTL为0.500.19%，对照组为0.200.10%。,特异性CTL诱导,Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加APC）。,结论,CpG能够活化B细胞，对T细胞无明显的作用 CpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达 CPG