艾滋病及HIV的检测培训.ppt

艾滋病及HIV的检测,(北京市疾病预防控制中心) 田桂英,一、HIV的基本生物学特性,属于逆转录病毒科慢病毒属。 HIV在病毒分类中的定位是慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组 HIV分为HIV-1和HIV-2二个型别。 HIV-1共有M组（主要亚型组）、O亚型组和N亚型组。 M组又分为A、B、C、D、F1、F2、G、H、J、K共11个非重组亚型，另外近年来发现多个流行重组型（circulating recombinant form,CRFs），包括CRF01- CRF14。,HIV 的 分 群和亚型,A （ A1 A 2） B C D F1 F2 G H J K CRF,CRF01-AE CRF02-AG CRF03-AB CRF04-CPX CRF05-DF CRF06-CPX CRF07-BC CRF08-BC CRF09-CPX CRF10-CD CRF11-CPX CRF12-BF CRF13-CPX CRF14-BG,A B C D E F G,HIV-1,M组,N组,O组（O1-O3）,HIV-2,HIV病毒体呈球形，直径约100120nm。 电镜下成熟的HIV-1呈现一致密的圆柱状核心和一个病毒包膜。 病毒核心由病毒RNA、核心结构蛋白和病毒复制所必须的酶类组成。 HIV的RNA为两条相同拷贝（完全同源）的正股RNA链。,HIV对环境中物理因素和化学因素抵抗力均较弱，比HBV的抵抗力低得多。 对HBV有效的消毒和灭活方法均适用于HIV。 HIV对热很敏感，对低温耐受性强于高温。因此，可以用高温灭活病毒，在低温条件下保存病毒。 在室温（2227）液体环境下HIV可存活15天以上；经56处理30min可使HIV在体外对人的T淋巴细胞失去感染性，但不能完全灭活血清中的HIV；经过60 3小时或80 30min作用后不能检出感染性病毒。,HIV耐碱不耐酸 HIV对化学因素很敏感 室温中0.5%次氯酸钠或75%酒精只需1min即不能检出RT酶活性； 0.2%次氯酸钠、0.1%家用漂白粉、0.1%戊二醛等5min即可灭活HIV； 30%酒精溶液5min、20%酒精溶液10min可灭活HIV。 对紫外线不敏感，离开人体可存活数小时至数天。,二、艾滋病的传播途径,艾滋病毒存在于艾滋病感染者和艾滋病人的血液、精液、阴道宫颈分泌物、乳汁、唾液、泪液、尿液、脑脊液、汗液、粪便、耳分泌液、支气管分泌液等人体的分泌液中，其中以血液、精液、阴道宫颈分泌液艾滋病毒的含量最高，筑成了艾滋病传染性很强的物质基础。 艾滋病流行至今二十多年的科学研究证明，艾滋病在人群中的传播只有三条路：性途径、血液途径和母婴传播。,母亲是怎样将艾滋病病毒传给自己的孩子的？,母婴传播一般指感染艾滋病毒的母亲传给其胎儿或婴儿的传播方式。这种传播可能发生在怀孕、分娩和哺乳期。 研究报告指出，HIV感染母亲所产的新生儿有1160可能发生感染。 母婴传播有以下几个阶段： （1）宫内感染：是胎儿生前在母亲子宫中通过损伤胎盘进入胎儿体内，母亲的胎盘、羊水中存在大量的艾滋病病毒，可直接从胎儿娇嫩的、未发育完全的皮肤中进入胎儿体内。,（2）生产过程中感染 生产过程中由于胎儿通过产道受到反复撞击和挤压，血液和羊水等分泌物可被胎儿吸入体内，也可通过皮肤损伤进入体内。研究发现，可在刚出生胎儿胃引流物中查出艾滋病病毒。 所有这些发现表明，母婴传播可能有高达50的新生儿在出生时通过与母亲生殖器官分泌液或血液接触而发生感染。 （3）哺乳期感染： 科学家研究了100多例非洲感染HIV的哺乳女性，发现有58的乳汁样品中可检测HIV，有时乳汁中感染性病毒数量很高，乳汁中病毒可通过婴儿免疫不健全或损伤的口腔粘膜、消化道进入体内。 母婴传播中有30是在哺乳期感染的。 对感染HIV怀孕母亲用抗艾滋病毒预防服药治疗能降低母婴传播的感染率已得到肯定。,三、HIV感染在体内的动态分期,病毒进入体内在2天内到达局部淋巴结，5天内进入血液循环。其结果是导致全身性播散，到达脑部和淋巴组织。 从暴露于HIV到出现症状的时间一般是2-4周在急性感染的数天内，出现高水平的病毒复制，血浆中可检出107 /ml个病毒RNA分子。CD8+细胞数上升，伴有短暂的CD4+细胞计数下降。 HIV抗体出现后，病毒血症减轻，血浆中HIV RNA 的滴度下降，急性HIV感染的症状消失.,1、原发HIV感染期,通常4-12周发生HIV抗体阳转。从HIV感染到产生抗体（或血请抗体阳转）称为“窗口期”，95%的HIV感染都发生在感染后的 5.8 个月内，故一般认为窗口期为3个月；高度怀疑者可追踪至6个月。 “ HIV感染早期”定义：血清抗体阳转和HIV感染6个月之间的阶段。6个月时病毒载量达到一个“固定值”，早期抗病毒治疗可降至很低，如果不进行抗病毒治疗，几年内不会有很大变化。此固定值和预后有很大关系。 早期治疗的目标之一是重新设定固定值，使固定值保持较低水平。,病人无临床症状，体检时无异常，少数可查到“持续性全身性淋巴腺病”（PGL），肿大的淋巴结至少发生在两处,且不是腹股沟淋巴结。 细胞内的病毒大部分处于潜伏状态，所以淋巴结中病毒浓度很高。 淋巴组织是病毒的主要藏身处，外周血中的病毒载量相对不高。,2、无症状感染期(潜伏期),3、艾滋病前期（“ARC”或“B期”） 艾滋病前期症状包括被HIV感染后更常见更严重的症状（包括鹅口疮、口腔毛状黏膜白斑病、发热、体重减轻等），但还不是艾滋病的典型症状。 4、艾滋病期 当患者出现典型症状时，CD4+细胞计数通常降至200/ul以下，血和淋巴结中的HIV又上升到相当高的水平，同时抗病毒CD8+细胞反应减弱。在艾滋病期病人血液中的HIV群体又一次变得相当均一，通常是细胞融合（S1）表型为主，与T细胞嗜性有关。,四、HIV感染的三种临床结局和长期存活 的相关因素： 1.典型进展者 在感染早期，其免疫功能未受损害，但在810年内免疫控制能力逐渐下降，最后发展成艾滋病。 2.快速进展者 病程快速进展，CD4+细胞计数在2-5年内迅速下降,抗HIV的抗体水平很低，而且该抗体中和HIV的能力也较差。 快速进展者最显著的特征：HIV感染后一直维持较高的病毒载量，而且分离的HIV有均一性。,3.长期存活者（又称长期不进展者） 这些感染者能维持健康状态12年以上，并且CD4+细胞计数维持正常。 长期存活者在感染者中的比例一般在810%，目前最长已达20多年。,3、尿液HIV抗体检测,标本：除血液外还可用唾液检测HIV（Orasure，如Salivacard），尿液检测HIV 。1996年美国FDA首次批准HIV-1尿检EIA试剂，我国也正在研制。 主要适用于静脉注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面积流行病学调查。 阳性标本仍需采血做确认试验才能确定HIV抗体阳性。 另外还有家庭用HIV检测（Home Access System）。,样品,筛查检测,选用筛查试剂,阳性反应,阴性反应,复 测,阴性报告,原有试剂+另一种筛查试剂,一阴一阳,均阴性反应,均阳性反应,送确认,阴性报告,4、HIV抗体筛查的流程图,1、免疫印迹式验（WB）： WB是将HIV病毒蛋白用SDS-PAGE电泳，把分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条装，每一条硝酸纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。 待检血清样品1：100稀释，加到放置硝酸纤维膜的槽内，恒温震荡，充分接触反应。血清中抗-HIV抗体，与膜条上的抗原带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，即可使抗原-抗体结合带呈现紫褐色。根据出现条带情况判定结果。,（二）HIV抗体确认试验,表3 不同国际组织HIV抗体免疫印迹（WB）试验阳性结果判断标准,我国判定标准： （1）HIV-1抗体阳性（+） 有下列任何一项者，即可确认： 至少有二条env带（gp41和gp160或gp120）出现，gp41和gp160，或gp41和gp120，或gp41和gp160/gp120。 至少有一条env带和p24带同时出现。 （2）HIV-2抗体血清学阳性反应（+） 符合WHO标准（有二条env带，有或无gag带），符合试剂盒标准，方可判为血清学阳性反应。 （3）HIV抗体阴性（-） 无HIV抗体特异带出现，或仅有p17。 （4）HIV抗体不确定（）：出现HIV特异性抗体带，但带型不足以确认阳性者。,2、免疫荧光试验（IFA） 将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上，经固定后即为试验用抗原片。待检血清中的抗-HIV抗体与抗原结合后再与荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合，在荧光显微镜下可见到含草绿色荧光的细胞和多核巨细胞（胞浆荧光）。目前国内尚无商品化产品，仅在少数有条件的实验室使用。,（一）孕期 孕期产前检查：应在知情同意的情况下常规做HIV抗体筛查试验。最好选择ELISA方法（无条件地区可用快速检测）筛查。,二、HIV检测方法的选择,图3 孕产期保健服务流程（适用于有充分的时间进行复测和确认试验者）,对产前检查的孕妇进行预防艾滋病母婴传播咨询，获得知情同意，采集样本,HIV抗体筛查试验,第1种筛查试剂（高敏感性）,阳性 阴性,第2种筛查试剂（高特异性）,阳性 阴性,第3种筛查试剂（高特异性）,不确定 阳性 阴性,提供疑似阳性咨询，建议做确认试验,确认试验,提供咨询随访，建议3个月后再次做确认试验,出具“HIV抗体阳性”报告 提供咨询、指导、随访,出具“HIV抗体阴性”报告 提供咨询、指导、常规孕期保健,（二）产时 孕期未接受HIV抗体检测的产妇： 首先应进行咨询，取得知情同意以后，可同时用两种不同的快速检测试剂进行HIV抗体筛查试验。 根据检测结果给予不同的咨询和干预。若产妇已临产，且只能用一种快速检测试剂检测，结果阳性，即视为HIV抗体阳性处理。,图4 产时保健服务流程（适用于没有充分的时间进行复测和确认试验者）,对产前未接受HIV抗体检测的即将/或临产产妇进行预防艾滋病母婴传播咨询，获得知情同意，采集样本,同时用两种不同的快速检测试剂进行HIV抗体筛查试验,若产妇已临产，且只能用一种快速试剂检测，结果阳性，即视为HIV抗体阳性处理,检测后咨询，解释结果,检测后咨询，知情同意选择干预措施,正常分娩,正常分娩,产后进行HIV确认试验,产后暂时无法进行确认试验时,（三）产后 筛查试验阳性的产妇在产后要进行HIV确认试验。根据检测结果再进行咨询和干预。 （四）婴儿检测 婴儿应于12个月进行HIV抗体检测，结果阴性则排除感染，纳入正常儿童保健；阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗体检测，结果阴性排除感染，纳入正常儿童保健；阳性婴儿转入当地艾滋病综合防治系统。 为配合治疗，婴儿HIV感染的早期诊断也可以采用核酸检测。目前以2次核酸检测结果作为诊断的依据，2次不同时间的样本核酸检测均为阴性诊断未感染，2次不同时间的样本核酸检测均为阳性诊断为HIV感染。至18个月仍要进行HIV抗体检测加以确认。,图5 婴儿检测和随访服务流程如下：,对艾滋病病毒感染的产妇进行预防艾滋病母婴传播咨询，指导喂养，常规儿童保健,婴儿12个月进行HIV抗体筛查*试验,阴性 阳性,用另一种筛查*试剂再次检测,阴性 阳性,排除儿童感染 常规儿童保健,18个月时再进行HIV抗体筛查*试验,用另一种筛查*试剂再次检测,确认试验,阴性,阴性,阴性,阴性,阳性,从事快速HIV检测单位必须遵守,有关部门批准 购买有效的试剂 从事检测人员经过培训，有上岗证 按规定对象检测 严格按厂家说明书操作 满足质量保证要求 做好检测前后咨询,（一）实验室 1.艾滋病检测工作必须在经批准的艾滋病实验室内进行。未设置艾滋病实验室的机构或单位及未经备案或批准的艾滋病实验室不得开展相关的艾滋病检测工作。 2.必须立即开展或已经开展艾滋病检测工作而又暂时不具备艾滋病筛查实验室设置条件的单位，作为一种过渡，可以暂时设立“艾滋病检测点”。“艾滋病检测点”也必须达到安全防护的基本要求，并经省卫生行政部门批准和备案。,三、HIV检测实验室及管理要求,（三）仪器设备 艾滋病实验室的仪器设备应能满足安全防护要求。使用国家规定需要强检的仪器设备，必须由同级计量认证部门定期检定，非国家强检的仪器设备应定期维护和校准。 （四）检测试剂 艾滋病检测工作中所使用的检测试剂，必须使用