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DNA倍体定量分析 在宫颈癌早期诊断中的应用,XXXXX:10055632355 XXXX:XXXXX.COM,子宫颈癌 是妇科最常见的恶性肿瘤之一,全球范围内，每年约有20多万妇女死于子宫颈癌，是仅次于乳腺癌位居第二的恶性肿瘤。而在发展中国家，子宫颈癌占恶性肿瘤发病率的第一位。,我国目前约有宫颈癌患者40万人，每年新发现病例为13.51万，农村多于城市，约有8万人死于宫颈癌。,宫颈癌是由人类乳头瘤病毒（ human papilloma virus ，HPV）特别是高危型病毒引起，其发展是一个缓慢的过程，一般要通过宫颈癌前疾病到原位癌（0期），发展到浸润癌（-期）。 从宫颈癌前疾病发展到浸润癌一般需要5-10年的时间，期间宫颈细微变化都可以通过细胞学方法检测出来。,宫颈癌是怎么发生的？,宫颈癌是感染疾病，可预防的的疾病，也是世界目前唯一可以早期发现并治愈的癌症！防治的关键在于早期筛查。,脱落细胞学 （exfoliative cytology）,1928年希腊医生 Papanicolaou GN首次发表了用阴道抺片诊断宫颈癌的文章。 1943年希腊医生 Papanicolaou GN 提出巴氏五分级分类法。,“三阶梯”检查,宫颈细胞学,阴道镜检查,病理组织检查,复层鳞状上皮（stratified epithelium） 内底层细胞 圆形或卵圆形，1216mm。核居中，染色质细而均匀， 胞质为深蓝色，核浆比约 1：0.51 外底层细胞 圆形或椭圆形， 1525mm。核圆形，居中位，染色质疏 松细颗粒状。胞质较内底层淡染呈浅蓝色。核浆比约 1：2 中层细胞 菱形或舟状， 3060mm。核居中， 58mm 。染色质 疏松，胞质明如婵翼样，浅蓝色或绿色。核浆比约 1：58 角化前表层细胞 多边形或多角形， 4060mm。核 58mm，核染 质较疏松，胞质蓝色或淡红色。 角化表层细胞 多边形或多角形， 4060mm。核固缩，有时甚至消 失，胞质红色或橘红色。,宫颈脱落细胞形态学,良性反应性细胞改变,炎性反应性细胞：上皮胞核增大为正常中层鳞状上皮的1 2.5倍，柱状 上皮胞核增大1 4倍。核轻度深染，核染色质细颗粒 状均匀分布，胞质丰富，可见空泡和核周晕 萎缩反应性细胞： 核增大而不深染，裸核，核碎裂常见。可见大量外底 层细胞，炎性渗出物，嗜蓝颗粒状背景，但无癌细胞 或变性的癌细胞。细胞排列较规则 宫内节育器的反应性细胞：柱状上皮细胞呈小团，核质比增高。胞质量不 等，呈印式样外观，核染色质粗 其他各种类型感染：滴虫，霉菌，单纯疱疹，衣原体以及放疗等,级：未见异常细胞 级：发现异常细胞，但均为良性 级：发现可疑恶性细胞 性质不明细胞 细胞形态明显异常，难于肯定其良、恶性，需要近期复查核实 未分化或退化的可疑恶性细胞与恶性裸核 级：发现待证实的癌细胞（高度可疑的恶性细胞），具有恶性特征但 不够典型;或更典型但数目太少，需要复核，例如高度可疑的未分 化或退化癌细胞，或少数低分化癌细胞 级：发现癌细胞，其恶性特征明显或数目较多，可作互相比较以确定为 恶性者，例如高分化的鳞癌或腺癌细胞;成群未分化或低分化癌细胞,巴氏结果判断,正常细胞学涂片 良性细胞学改变：包括各类微生物感染、炎症、宫内节育器及放疗后的 反应性和修复性改变 上皮细胞异常,TBS结果判断,ASCUS ：不能明确诊断的非典型鳞状上皮细胞 ASC-US（不能明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞） ASC-H （非典型鳞状上皮细胞，不除外高级别鳞状上皮内病变） LSIL （低度鳞状上皮内病变）：包括HPV感染的细胞改变或轻度不典 型增生/CIN HSIL （高级别鳞状上皮内病变） ：包括中、重度不典型增生及原位癌 /CIN、 鳞癌（SCC）：包括非角化型鳞状细胞癌，角化型鳞状细胞癌，小细胞 型鳞状细胞癌,上皮细胞异常,宫颈癌及癌前病变的组织结构示意图, 无临床症状 肿瘤早期检测技术可诊断 治疗费用少，可痊愈！,宫颈细胞病理学分 类和宫颈上皮变化,宫颈癌发病原因,行为危险因素 生物学因素 遗传易感性,How induces HPV cervical dysplasia and cancer?,Normally, only parabasal cells proliferate,Dysplastic cells move up and reach surface After ?2-4 weeks,Jan Baak et al.,早期诊断的有利条件,宫颈有利的解剖学基础,条件 一,条件二,前驱病变阶段长，约10年,易暴露、易观察,易触诊,无创性取材,宫颈癌普查细胞学技术,DNA倍体定量分析原理,DNA倍体定量分析原理,癌细胞癌变过程DNA含量改变在前，形态改变在后,宫颈癌染色体的改变,正常细胞核内有23对染色体，又称为DNA二倍体（2c细胞）。有固定数量不变的DNA含量（7.6pg），其DNA指数为1。 DNA定量细胞学常用c（content）作为单位来衡量 DNA 含量。正常G0、G1细胞DNA含量的一半为1个c 。,正常细胞(即DNA二倍体细胞，2C细胞)及肿瘤细胞在生长增 殖时,细胞核内DNA结构及含量都会发生变化。正常细胞增 殖周期DNA指数的改变在1-2之间。而肿瘤细胞常2.5。 通过对细胞核内DNA含量的测定及特征的分析能了解正常 细胞周期变化及发现恶性增殖的肿瘤细胞。,正常细胞核内均有23对染色体， DNA指数（DI）为1,癌变细胞核内染色体数量发生异常改变DNA指数（DI）多大于2.5,常规细胞学诊断方法与细胞DNA定量分析方法敏感性和特异性的比较,孙小蓉 ，李玉兰 ，车东媛等，J Diag Pathol , 2005 (12):12-6,细胞学筛查制片技术诊断敏感性比较,巴氏染色,显微镜,TBS细胞学诊断,DNA染色,全自动细胞图象分析仪,定量细胞学诊断,特有的宫颈普查诊断程序,不同DNA指数（DI）在宫颈癌普查中的临床意义,综合诊断意见及临床建议,DNA图像分析仪与流式细胞仪的比较,DNA定量技术在宫颈癌普查中的优势,细胞DNA定量分析方法用于,表面刮取标本涂片：例如阴道、宫颈、口腔、肛管、鼻咽部、眼结膜、体表病灶溃面等处。 分泌物或排泄物涂片：例如痰液、尿液、前列腺液、肛肠脓血排泄物、肿瘤之漏管分泌物、乳头溢液等。 体表、体部和体腔内和液体或肿瘤实体的针吸穿刺检查：例如胸腔、腹腔、四肢、躯干、肺、肝脾、肾等器官。 光纤内窥镜直视下的刷片和组织印片：例如食管、胃、支气管、泌尿道、结肠、直肠等。,宫颈刷取材注意事项,取材前阴道、宫颈不得使用任何润滑剂 妊娠期妇女不宜使用宫颈刷 如发现可疑宫颈癌的临床体征,应迅速活检(宫颈细胞学检查与活检同步) 月经期不得使用宫颈刷 病人在受检前48小时,不得作阴道冲洗及任何阴道治疗 病人在受检前48小时,不得使用避孕剂 急性宫颈炎及各种阴道炎的急性感染期,经治疗后再作宫颈细 胞学检查 取材后若发生活动性渗血，应压迫止血 人流后月经未来潮前，不做检查,注意：患者刮片前要禁用阴道外用及激素类药物，以防细胞形态的改变，给诊断带来困难,宫颈标本的收集管理,标本管请放置于阴凉处保存,并注明识别标志(姓名,编号等) 当室温超过30摄氏度或因故不能及时送检时,请放入冰箱内(4)保 存,一般不超过10天 请将标本管与申请单放在一起一并交往指定地点 取报告时间及方式与有关专业人员联系,取材后的标本保存条件,存放时间：十天内 存放温度：或室温（） 存放方式：标本管直立,临床常见的几个问题,标本不合格,细胞数量不够需重复取材 出现DNA异倍体细胞时，活检后病理未发现异常,39,为什么细