课件：靶向肝纤维化.ppt

发病机制,促肝纤维化形成细胞因子有： 转化生长因子1 (T GF-1) 结缔组织生长因子(CTGF) 血小板源性生长因子(PDGF) 肿瘤坏死因子(TNF-) 白细胞介素1(IL-1)等; 抑制肝纤维化形成的细胞因子有： 干扰素(IFN) 肝细胞生长因子(HGF) 白细胞介素10(IL-10)等 。,（1）许多体外和体内模型机制的确认和抗纤维化因子试验方面的限制。 （2）缺乏量化肝纤维化程度和肝纤维化的动态进展以及患者肝纤维化逆转的敏感方法。,理论应用到临床实践上受到了阻碍：,本文主要讨论当前在抗肝纤维化药物的研制方面的问题和易犯的错误，以及克服临床验证障碍的策略。,HSC的活化和增殖 上游引起HSC激活的细胞的激活 致纤维化生长因子，细胞因子和其他调节因子 在HSC细胞内致纤维化途径和上游细胞的激活 刺激纤维降解过程逆转当前的纤维化,Promising Targets for Antifibrotic Therapies 有前景的靶向抗肝纤维化治疗,抗纤维化治疗的靶点有细胞，信号转导通路和在肝纤维化形成或逆转过程中的关键性分子。 例如：,In Vitro Models (体外模型) Animal Models (动物模型) Antifibrotic Drug Development (抗纤维化药物开发) Serum Fibrosis Markers (血清纤维化标志物) Imaging of Liver Fibrosis (肝纤维化的影像学检查),Preclinical Models to Test Potential Antifibrotics 检测潜在抗肝纤维化的临床前模型,In Vitro Models (体外模型),培养激活的肝星状细胞和肝星状细胞系 肝纤维化过程中涉及的其他类型细胞的培养 组织精细切片培养 人工器官组织培养工程,优点：低成本、高重复性 缺点：不能反映体内控制纤维形成或纤维溶解的复杂的相互作用,培养激活的肝星状细胞和肝星状细胞系,肝星状细胞的多种起源,典型肝星状细胞系： CCL4诱导的肝纤维化分离出的小鼠自发永久性HSC的克隆 SV40病毒T抗原诱导的人HSC系LX-1和LX-2永久细胞 端粒酶逆转录酶基因的逆转录酶病毒载体转染生成的TWNT,其他类型细胞的培养: 活化胆管上皮细胞系、肝细胞、库普弗细胞、各种淋巴细胞亚群,离体新鲜精细肝切片能维持肝细胞至少24小时的代谢功能,与传统细胞培养相比优势： 切片可以直接从包含自然发生激活的肝星状细胞的纤维化肝脏制备 相当于三维重建的真实纤维化的肝细胞（实质细胞和间质细胞）微环境 从少数动物制备的切片中可以有效地筛选多种药物 可以同时对药物的肝毒性进行测试,组织精细切片培养,毒理学研究,人工器官组织培养工程,通过生物工程方法在精确控制的环境中，以恢复正常或病理肝脏结构为目标的微型和纳米技术已经取得了很快的发展。,2D,3 D,3D:更加生理，具有重建体外多细胞性肝环境的潜力。,Animal Models (动物模型),动物模型实验结果的解释 胆汁性肝纤维化的动物模型 肝毒素诱导的肝纤维化动物模型 非酒精性脂肪性肝炎的动物模型 转基因和基因敲除在体模型,小鼠模型优点： 有经济效益 需要更少的数量（可能是药物开发早期阶段的一个限制因素） 允许使用基因改造（转基因或基因敲除）的动物彻底验证目标,需要特别注意小鼠的遗传背景，这会影响它们发生肝纤维变性的敏感度。 结果解释的主要内容： 肝纤维化研究敏感品系的选择 遗传背景的纯洁性 使用野生型同窝的对照,肝毒素诱导的肝纤维化动物模型,四氯化碳（CCl4）诱导的反复肝细胞死亡所致肝纤维化 可以对急性肝损伤、肝纤维化进展和纤维化逆转的研究 缺点：严重的肝细胞坏死、对大量氧化应激的依赖 肝毒素硫代乙酰胺(TAA)的长期注射,非酒精性脂肪性肝炎的动物模型,最有效的模型利用代谢综合征患者的遗传易感性与高脂饮食相结合。 当添加蛋氨酸胆碱缺乏饮食时，自发代谢综合征及2型糖尿病动物模型(OLETF大鼠)在8周内发生肝硬化。,Antifibrotic Drug Development (抗纤维化药物开发),靶向途径 替代和补充药物 药物重新定位 靶向药物输送到纤维化的肝细胞,靶向途径,替代和补充药物,靶向药物输送到纤维化的肝细胞,增加局部药物浓度 减少副作用,Noninvasive Means to Assess Liver Fibrosis and Fibrogenesis (评估肝纤维化及纤维形成的无创性方法),血清纤维化标志物 用蛋白质组学和转录组学方法寻找更好的血清标志物的尝试 肝纤维化的影像学检查 超声弹性成像（FibroScan） 肝纤维化和纤维形成的分子成像,纤维化标志物组合：更好地反映结缔组织的动态改变 Fibro Test :2-巨球蛋白、载脂蛋白、肝珠蛋白、总胆红素、 -谷氨酰胺转肽酶） ELF评分 :年龄、HA、血清前胶原肽（PNP）、TIMP-1 ELF评分研究显示：82%88%患者可避免肝活组织检查。,血清标志物,蛋白质组学,转录组就是转录后的所有mRNA的总称。与基因组不同的是，转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下，其基因表达情况是不完全相同的。 通常，同一种组织表达几乎相同的一套基因以区别于其他组织。 转录组谱可以提供什么条件下什么基因表达的信息，并据此推断相应未知基因的功能，揭示特定调节基因的作用机制。通过这种基于基因表达谱的分子标签，不仅可以辨别细胞的表型归属，还可以用于疾病的诊断。,转录组学,转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。研究转录组的一个重要方法就是利用DNA芯片技术检测有机体基因组中