杂环类药物分析.ppt

【基本要求】,1、掌握异烟肼、硫酸奎宁、氢溴酸东莨宕碱、盐酸环丙沙星、盐酸氯丙嗪、异丙嗪、地西泮、氯氮卓的鉴别试验和主要含量测定方法 2、熟悉用薄层色谱法检查异烟肼中游离肼、氯丙嗪、地西泮中有关物质的检查 3、熟悉异丙嗪片剂、注射剂的紫外分光光度法 4、了解本类药物化学结构、化学性质与分析方法的关系 5、了解本类药物的比色测定法,返 回,第一节 吡啶类药物,一、典型药物的结构与主要化学性质 （一）典型药物的结构,吡啶（pyridine）,异烟肼（isoniazid）,尼可刹米（nikethamide）,硝苯地平（nifedipine),（二）主要化学性质 1. 弱碱性 吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的pKb 值为8.8（水中）。尼可刹米除了吡啶环 上氮外，位上被酰氨基取代。酰氨基化 学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具 有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。,2还原性 异烟肼的吡啶环位上被具有还原性 酰肼取代，可被氧化剂氧化，可与含羰基的化合 物发生缩合反应。 3吡啶环的特性 异烟肼和尼可刹米的吡啶环 、位未取代，而或位被羧基衍生物所 取代；硝苯地平的吡啶环、位被甲酸甲酯 所取代，其吡啶环可发生开环反应。,二、鉴别试验,（一）吡啶环的开环反应 本反应适用于吡啶环的、位无取代基的异 烟肼和尼可刹米。,1.戊烯二醛反应（kning 反应）,尼可刹米 + 溴化氰,H2O,戊烯二醛衍生物,苯胺,黄色,芳伯胺溴化氰戊烯二醛戊烯二醛衍生物,芳伯胺,吡啶环,Ch.P只用于尼可刹米的鉴别,（黄色黄棕色）,2二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）,吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯,紫红色,无水条件,采用本法鉴别异烟肼、尼可刹米时，需适当处理， 即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。 如异烟肼鉴别：,异烟肼可不经处理发生如下反应：,异烟肼 + 2，4-二硝基氯苯,乙醇,OH-,紫红色,（二）酰肼基团的反应,1还原反应,异烟肼+AgNO3,异烟酸铵,+,N2,+,Ag,银镜,异烟肼+亚硒酸,硒,（红色）,2缩合反应 异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的熔点，可 用以鉴别。ChP和BP均采用本法鉴别.,黄色结晶 mp为228231,Ar-NH2 活性-CH2-,+1，2-萘醌-4-磺酸,OH-,红色,（三） 形成沉淀的反应 具有吡啶环的结构，可与重金属盐类及苦味酸等试剂形 成沉淀。 如,尼可刹米+CuSO4+硫氰酸铵,草绿色,尼可刹米 异烟肼,+ HgCl2,白色,（四）分解产物的反应,使湿润的红色石蕊试纸变蓝,尼可刹米 异烟肼,+,无水Na2CO3 Ca(OH)2,吡啶臭,尼可刹米+NaOH,二乙胺,（五） 紫外吸收光谱特征 本类药物的分子结构中均含有芳杂环，在紫外光区有特征 吸收，其最大、最小吸收波长及百分吸收系数可供鉴别。本 类药物的紫外特征吸收鉴别方法见下表。,本类药物的紫外特征吸收鉴别方法 药 物 溶 剂 max（nm） min（nm） E1cm1% 异烟肼 HCl（0.01mol/L） 265 约420 水 266 234 378 尼可刹米 HCl（0.01mol/L） 263 285 NaOH（0.1mol/L） 255 840 260 860 硝苯地平 无水乙醇 333 140,（一）异烟肼中游离肼的检查 1. TLC法 Ch.P中异烟肼及其注射,采用TLC法中杂质对照法。 对照品：硫酸肼0.20mg/ml（相当于游离肼50g） 薄层板：硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备） 展开剂：异丙醇-丙酮（3 ：2） 显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液 检测结果：供试品主斑点前方，不得显黄色斑点,三、有关物质检查,BP的检查方法： 供试品溶液制备: 取异烟肼1.0g，加丙酮-水(1:1)制成10ml. 对照溶液制备: 取硫酸肼50mg，加水50ml使溶解后，加丙酮稀 释至100ml；量取10ml，加供试品溶液0.2ml， 加丙酮-水(1:1)稀释至100ml。 薄层板：硅胶GF254薄层板 展开剂：醋酸乙酯-丙酮甲醇水(50:20:20:10) 显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液,检测结果： 于254nm紫外光下检测，供试品中的杂质斑点强度应 小于对照溶液中异烟肼色谱斑点；再喷以对-二甲氨基苯 甲醛溶液，并在日光下检视，对照溶液中硫酸肼斑点的 强度大于供试液中的杂质斑点。,2比浊法 JP（14）采用样品中加水杨醛的乙醇溶液观察混浊 的方法来控制游离肼的限量。 此法专属性差，因异烟肼(慢)和硫酸肼均生成腙而 析出沉淀。,3. 差示分光光度法,肼 异烟肼,+ 对-二甲氨基苯甲醛,黄色缩合物对-二甲氨基苯甲醛连氮 (max = 456nm 有最大吸收),形成的缩合产物对-二甲氨基苄叉 (于max =456nm波长处无吸收),可在456nm波长处测定并计算二者的差示吸收度A456，同时以 对照品比较法计算游离肼含量。,具体测定法： 对照品溶液：硫酸肼CR1g/ml 5 ml + 丙酮 max=456nm 测A1 + 对-二甲氨基苯甲醛 (A456A2A1)AR 5 ml max=456nm 测A2 供试品溶液：异烟肼C2mg/ml 游离肼 CX=As/ARCR 1份+ 丙酮 max=456nm 测A1 + 对-二甲氨基苯甲醛 (A456A2A1) As 2份 max=456nm 测A2,(二) 尼可刹米中有关杂质检查 因有关杂质的化学结构不明，故Ch.P和BP均采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。 方法：供试品甲醇溶解成40 mg/ml的溶液，再精密吸取适量用甲醇稀释至0.4 mg/ml和0.04 mg/ml的溶液作为对照液。取供试品和对照品液点样分析，显色后置紫外灯下观察。供试品如果显杂质斑点，与对照液2比较不得更深，如有一个杂质斑点超过2的主斑点，应不深于对照液1。,(三) 硝苯地平中有关物质检查 硝苯地平遇光分子内部发生光化学歧化作用，降解为4-（2-硝 基苯基）-2, 6-二甲基吡啶-3, 5-二羧酸二甲酯（A）和4-（2-亚 硝基苯基）-2, 6-二甲基吡啶-3, 5-二羧酸二甲酯（B）。其化学 结构如下:,具体方法 1、供试液和的制备 2、有关杂质对照品液和的制备(0.2 mg/ml) 3、色谱条件与灵敏度调节 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：甲醇-水（3 ：2）；检测波长：235nm。 取对照品溶液20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使 杂质A和B组分色谱峰的峰高为满量程的20%；杂质A和B组分之间， 杂质B与硝苯地平之间的分离度均符合规定。,1 mg/ml,0.2 mg/ml,4. 有关物质检测 取供试液和对照液各20l，分别进样记录色谱图至主成分 峰保留时间的2倍。供试液如出现与对照液中杂质A和B相对应 的峰，其峰面积不得大于对照液中杂质A和B的峰面积；如出现除 杂质A和B以外的其他杂质峰，其峰面积不得大于对照液中硝苯地 平的峰面积；各杂质总量不得大于0.5%。供试液中小于对照液 中硝苯地平峰面积的10%以下的杂质峰忽略不计。,返 回,一、基本结构与化学性质 （一）典型药物的结构 硫酸奎宁 硫酸奎尼丁 （quinine sulfate） (quinidine sulfate),第二节 喹啉类药物,盐酸环丙沙星 (ciprofloxacin hydrochloride),（二）主要化学性质 1. 碱性 喹啉环上的氮原子具有碱性，与强酸形成稳定的盐。 环丙沙星与盐酸成盐，奎宁和奎尼丁可与二元酸成盐，结 构中喹核碱含脂环氮，碱性强，可与硫酸成盐；而喹啉环系 芳环氮，碱性较弱，不与硫酸成盐。奎宁pKb1为5.07，pKb2 为9.7，饱和溶液的pH值为8.8。奎尼丁pKb1为5.4，pKb2为10。,2. 旋光性 硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为-237o至-244o； 硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为+275o至+290o；而盐酸环 丙沙星无旋光性。 3. 荧光特性 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显蓝 色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。,（一）绿奎宁反应（Thalleioquin） 绿奎宁反应是奎宁和奎尼丁的特殊鉴别反应。其反应如下： Ch.P收载方法,二、鉴别试验,绿/翠绿色产物,二醌亚胺盐,（二）光谱特征 1. UV Ch.P采用本法鉴别盐酸环丙沙星，其盐酸溶液(8g/ml)在277和315nm处有最大吸收。 2. 荧光光谱特征 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀H2SO4中均显 蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。 3. IR Ch.P中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方 法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。,（三）无机酸盐 利用硫酸奎宁和硫酸奎尼丁显硫酸盐的反应；盐酸环丙 沙星显氯化物的反应，可用无机盐的鉴别方法进行鉴别。,（一）硫酸奎宁中特殊杂质检查 1. 酸度 主要控制药物中酸性杂质。用pH计测定,pH为5.76.6。 2. 氯仿-乙醇中不溶物 主要控制药物中不溶性杂质或无机盐类. 检查方法：取本品2.0g，加三氯甲烷-无水乙醇（2:1)混合溶液15 ml，在50加热10 min，用称定重量的垂熔坩埚过滤，滤渣用混合溶液洗涤5次，每次10 min，在105干燥至恒重，要求遗留的残渣2.0 mg。,三、特殊杂质检查,3. 其他金鸡纳碱主要控制硫酸奎宁中其他生物碱 TLC法：因没有合适的对照品，因此采用薄层色谱中的主成分自身对照法进行检查。 HPLC法（BP）：供试品溶液的制备、对照溶液a、b、c、d和内标溶液（硫脲）的制备,色谱条件：ODS、乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相、流速1.5 ml/min、检测波长：250和316 nm 色谱系统适用性实验： 测定法：二氢奎尼丁15、保留时间小于奎尼丁的有关物质5，其他物质总和2.5。,色谱峰峰面积归一化法,（二）氧氟沙星中特殊杂质的检查 1、溶液的澄清度与颜色 主要控制本品中不溶性物质和有色杂质。 澄清度检查：与2号浊度标准液比浊、黄色或黄绿色4号标准比色液比色。 颜色检查：10 mg/ml的碱溶液，在450nm处的A0.25. 3. 有关物质 主要控制本品中可能引入结构不清的有关杂质， Ch.P和BP均采用HPLC法中归一化法进行检查，其检查方法如下：,色谱条件与系统适用性试验： 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱 流动相：醋酸铵高氯酸混合溶液-乙腈(85:15)用磷酸调节pH值2.2. 检测器：UV检测波长为294 nm；按氧氟沙星峰计算n5000; 氧氟沙星峰与相邻杂质峰的分离度R1.5. 测定方法：取本品适量，加0.1 mol/l的盐酸制成每1ml中含2.4g的对照溶液；配制1mg/ml的溶液，置于紫外灯下照射4h；各取溶液10l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的2025%，记录时间应为主成分峰保留时间的2.5倍。按面积归一化法计算，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2，杂质总量不得大于主峰面积的2.5倍。,返 回,一、基本结构与化学性质 （一）典型药物的结构 硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱 （atropine sulfate） ( copolamine hydrobromide）,第三节 托烷类药物,（二）主要化学性质 1。水解性 本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。 以阿托品为例，水解生成莨菪醇()和莨菪 酸()。,2. 碱性 阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有 叔胺氮原子,具有较强的碱性,易与酸成盐。如 阿托品的pKb1为4.35。,3. 旋光性 氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子，呈左旋体，比旋度为-24至-27，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。,（一）托烷生物碱一般鉴别试验,二、鉴别试验,生物碱,水解,莨菪酸,发烟硝酸,三硝基衍生物,KOH（C2H5OH）,固体KOH,有色的醌型产物,Vitaili反应,（二）氧化反应 本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重 铬酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味。其反应式为：,(三)沉淀反应 本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。 如：阿托品+氯化汞醇试液 黄色沉淀 东莨菪碱+氯化汞醇试液 白色沉淀,（四）硫酸盐与溴化物反应,1. 酸度 东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。 氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱形成的盐，通过其5%水溶 液的pH值为4.05.5，来控制本品中的酸性杂质。 2. 其他生物碱,三、氢溴酸东莨菪中特殊杂质检查,本品水溶液+氨试液,不混浊,合格,混浊,存在其他生物碱,+KOH试液,混浊（东莨菪碱）,Ch.P：本品两份，一份加氨试液、一份加KOH试液，应产生瞬间消失的白色浑浊。 BP：TLC法检查配制20mg/ml、0.2mg/ml、0.1 mg/ml的供试品溶液和对照溶液a和b，点样后碘化铋钾显色。 要求：供试品溶液中除主斑点外的杂质斑点与对照液a的主斑点比均不得更深，比对照液b主斑点颜色更深的杂质斑点不得多余1个。,3. 易氧化物 主要是检查本品在生产中可能引入的阿扑阿托品及及其它含有双键的有机物质，可使KMnO4溶液褪色。,返 回,Ch.P：高锰酸钾的颜色消失 BP：控制在254 nm处的百分吸收系数，E3.6（0.5）,第四节 吩噻嗪类药物,一、基本结构与化学性质 （一）结构特点与典型药物,苯并噻嗪 硫氮杂蒽,奋乃静,癸氟奋乃静,盐酸氟奋乃静,盐酸三氟拉嗪,（二）主要化学性质 1.紫外和红外吸收光谱特征 硫氮杂蒽母核为共轭三环系统 三个最大吸收峰别在：205 nm、254 nm、300 nm 由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。 硫氮杂蒽母核的硫为二价，易氧化为砜和亚砜，其紫外吸 收光谱有明显不同，它们具有四个峰值。 另外，取代基R和R的不同，则可产生不同的红外光谱,2.易氧化呈色 二价硫易氧化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、 三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同 的颜色。 3.与金属离子络合呈色 本类药物中未被氧化的硫，可与钯离 子形成配位化合物，其氧化产物则无此反应。此性质可用于 鉴别和含量测定，并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。,（一）紫外特征吸收和红外吸收光谱 本类药物可用UV和IR鉴别，Ch.P中UV鉴别实例如下： 药物名称 溶 剂 浓度（g/ml） max（nm） A E1%1cm 盐酸氯丙嗪 盐酸（9 1000） 5 254 0.46 915 306 盐酸异丙嗪 盐酸（0.01mol/L） 6 249 883937 奋乃静 无水乙醇 7 258 0.65 癸氟奋乃静 乙醇 10 260 盐酸氟奋乃静 盐酸（9 1000） 10 255 553593 盐酸三氟拉嗪 盐酸（1 20） 10 256 630 盐酸硫利达嗪 乙醇 8 264与315 ,二、鉴别试验,（二）显色反应 1. 与氧化剂的显色反应 药物名称 硫 酸 硝 酸 过氧化氢 盐酸氯丙嗪 显红色, 渐变淡黄色 盐酸异丙嗪 显樱桃红色,放置 生成红色沉淀,加热即溶解, 后颜色渐变深 溶液由红色转变为橙黄色 奋乃静 显深红色;放置后 红色渐褪去 盐酸氟奋乃静 显淡红色, 温热 后变成红褐色 盐酸三氟拉嗪 生成微带红色的白色沉淀; 放 置后, 红色变深, 加热后变黄色 盐酸硫利达嗪 显蓝色 ,2. 与钯离子络合显色反应 利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络 合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。,(一)盐酸异丙嗪中特殊杂质检查 主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,-三甲基-10H-吩噻嗪- 10-乙胺异构体和结构不清的分解产物 。因此采用TLC法中的 高低浓度对比法控制上述这些杂质的限量。 (二)盐酸硫利达嗪中有关物质检查 本品遇光不稳定，在生产和贮藏过程中易引入有关物质，因 其结构不清，因此也采用TLC法中的高低浓度对比法控制杂 质的限量。,三、特殊杂质检查,返 回,第五节 苯并二氮杂卓类药物,一、结构特征与典型药物,地西泮,苯环与含氮七元杂环,阿普唑仑,奥沙西泮,氯氮卓,主要化学性质,1、碱性 母核结构上的氮原子，显示弱碱性，并在不同的pH溶液中，可以形成不同的离子化状态，包括质子化分子、中性分子和去质子化分子，从而影响其紫外吸收。 2、水解性 在强酸性溶液中可以发生水解成二苯甲酮衍生物,(一) 化学鉴别试验 1，沉淀反应 氯氮卓 橙红色沉淀 阿普唑仑 盐酸氟西泮 KBiI4 也生成橙红色沉淀 氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深， 因此可以相互区别。,二、鉴别试验,阿普唑仑 + 硅钨酸 白色沉淀，药典中也用于鉴别。,2.水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：,3. 硫酸-荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，显 不同颜色的荧光。例如：,地西泮 黄绿色 黄色 氯氮卓 黄色 紫色 艾司唑仑 + H2SO4 亮绿色 + 稀硫酸 天蓝色 硝西泮 淡蓝色 蓝绿色 奥沙西泮 淡黄绿色,4.分解产物的反应 本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。Ch.P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。 5. 氯化铜焰色反应 分子结构中含有氯元素的药物，在铜网上燃烧 发出CuCl2绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。,（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱 药物名称 溶 剂 浓度（g/ml） max（nm） A 地西泮 0.5%硫酸甲醇溶液 5 242 约0.51 282 约0.23 366 氯氮卓 盐酸溶液(91000) 7 245,308 阿普唑仑 盐酸溶液(91000) 12 264 盐酸氟西泮 硫酸甲醇(136) 10 2392,2842 比值1.952.50 3622 氯硝西泮 0.5%硫酸甲醇溶液 10 2392,3072 奥沙西泮 乙醇 10 229, 3152(较弱) 红外吸收光谱:已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西 泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。,（三）TLC法 1.常用的五种苯并二氮杂卓类药物的TLC法 按常规法点样10l于硅胶G薄层板上，以苯-丙酮（3 ： 2）为展开剂,饱和15min，用上行法展开15cm，挥发溶剂， 用稀硫酸喷雾，于105干燥30min，置紫外灯下检视荧光 斑点。,BP:氯硝西泮氯氮卓TLC法 USP:地西泮盐酸氟西泮TLC法；氯氮卓HPLC法 Ch.P:地西泮注射液HPLC法,2.酸水解产物的TLC法 利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的二苯甲酮衍生 物进行鉴别。由于不同的苯并二氮杂卓类药物水解后可能会 获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的专属性较差。,（一）有关物质检查中间体、副产物、分解产物 Ch.P 收载的八种本类药物，除氯氮卓外，其余 均作此项检查。其检查方法除了三唑仑采用GC法外， 其余均用TLC法进行检查。USP(24)和BP(2000)中对氯 氮卓都规定了此项检查，而且均用TLC法进行检查。,三、特殊杂质检查,1.地西泮中有关物质的检查 地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化学结构不清的有关物质，可采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。 2.氯氮卓中有关物质的检查 USP(24)用TLC法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得过0.01%；中间体7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮-4-氧化物含量不得过0.1%。,3.氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法 色谱条件：色谱柱为150mm4.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱； 流动相为甲醇-水（50:50),流速1.0 ml/min，检测波 长：254 nm。 检测结果：间硝西泮的tR为3.1 min、氯氮卓的tR为3.6 min，有关物质A的保留时间约为氯氮卓0.7，有关物质B约为2.3，有关物质C约为3.9。 溶液的配制：供试品液0.2 mg/ml、对照液(a)1g/ml、硝西泮a (b)5g/ml,(2-氨基-5-氯苯基）苯甲酮对照液（c)0.4g/ml,要求：1、记录的色谱时间为主峰保留时间的6倍 2、有关物质A和B的峰面积不得大于对照液a主峰面积的0.2 3、有关物质C的峰面积不得大于对照液c主峰面积的0.2 4、其他杂质峰的峰面积年均不得大于对照液a主峰面积的0.5倍 5、各杂质峰的面积和不得大于对照液a峰面积的2.5倍,(二) 降解产物的检查 地西泮注射液列入此项检查，因本品在贮藏过程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等杂质。采用HPLC法进行检查。,返 回,第六节 含量测定,一、非水溶液滴定法 主要用于测定有机碱及其盐，也可以测定有机弱酸 1、酸性溶剂：有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强相对碱度 2、碱性溶剂：有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强相对酸度 3、两性溶剂：具有酸、碱性能，如methanol 4、惰性溶剂：没有酸、碱性的溶剂，丙酮、氯仿,一、非水溶液滴定法 (一) 基本原理,当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。,BH+A-,+,HClO4,BH+ClO4,+,HA,游离碱类盐,被置换出的弱酸,因此，要根据不同情况采用相应测定条件。,(二) 一般方法,供试品,+,冰醋酸,10ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml,结 果,高氯酸滴定液滴定,以空白试验校正,(三) 问题讨论 1.适用范围 主要用于pKb8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使pKb为813的弱碱性药物采用本法滴定。 一般来说： pKb为810时，宜选冰醋酸作为溶剂； pKb为1012时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液； pKb12时，应用醋酐作为溶剂。 另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。,2.酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减： 高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸 消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2 量不足终点不明显，结果偏低。 2BHX + Hg(Ac)2 2BHAc + HgX2,过量(13倍)不影响测定结果,3.滴定剂的稳定性 非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有 挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。 若滴定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致，温差未超过10 时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正： 4.终点指示方法 常用电位法和指示剂法。Ch.P收载的本类药 物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。 另外，橙黄、萘酚苯甲醇、喹哪啶红、孔雀绿,(四) 应用实例 1.游离弱碱性药物测定 异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结 构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于 这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终 点的方法也不尽相同。 药物名称 取样量(g) 溶 剂 指示剂 终点颜色 尼可刹米 0.15 冰醋酸10ml 结晶紫 蓝绿色 地西泮 0.2 冰醋酸、酸酐10ml 结晶紫 绿色 氯氮卓 0.3 冰醋酸10ml 结晶紫 蓝色,2.氢卤酸盐类药物测定 当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强， 对测定有干扰，必须先加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难 以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然 后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下： 药物名称 取样量(g) 溶 剂 加入醋酸汞试液(ml) 指示剂 终点颜色 盐酸氯丙嗪 0.2 醋酐10ml 5 橙黄 玫瑰红色 盐酸异丙嗪 0.3 冰醋酸10ml 4 结晶紫 蓝色 盐酸氟奋乃静 0.3 冰醋酸20ml 5 结晶紫 蓝绿色 盐酸环丙沙星 0.2 冰醋酸25ml 5 橙黄 粉红色 氢溴酸东莨菪碱 0.3 冰醋酸20ml 5 结晶紫 纯蓝色 盐酸硫利达嗪 0.3 丙酮100ml 5 电位滴定法,3.硫酸盐类药物测定 硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生 成SO42-，但在非水介质中，只显示一元酸解离为HSO4-， 即只供给一个H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只 能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴 定。,（1）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的 一元碱药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以 简写为(BH+)2SO42 -，用高氯酸直接滴定时的反 应式为：,(BH+)2SO42-+HClO4(BH+)ClO4-+(BH+)HSO4-,可根据1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的 关系计算其含量。,（2）硫酸奎宁测定：奎宁为二元碱，其中喹核碱的碱性较强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，1mol的硫酸奎宁消耗3mol的高氯酸。其反应式如下： (C20H24N2 H+)2SO4 + 3HClO4 (C20H24N2 2H+)2ClO4- + (C20H24N2 2H+)HSO4-ClO4- Ch.P和USP(24)都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。,(3) 硫酸奎宁片的测定： 硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高 氯酸标准溶液直接滴定。此时1摩尔的硫酸奎宁可消耗4摩尔 的高氯酸，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不 同。,4.硝酸盐的测定 硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。 但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无 法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般 不用指示剂法而用电位法指示终点。,5.磷酸盐与有机酸盐 磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不 影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接 滴定。,（一）硝苯地平的测定 基本原理 硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示： 终点时:微过量的Ce4+将指示剂中的Fe2+氧化成Fe3+，使 橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终 点的到达。,二、铈量法,（二）吩噻嗪类药物的测定,药物,Ce(SO4), -e,红色,Ce(SO4), -2e,红色消退,自身指示终点或电位法、永停法指示终点,溴酸钾法异烟肼类药物的含测定,利用在酸性溶液中，异烟肼具有较强的还原性，可以与溴酸钾发生化学反应，用甲基橙指示剂，粉红色消失为终点，反应的mol比为3：2,(一）酸性染料比色法 1.基本原理,三、比色法,是利用碱性药物在一定的pH条件下与某些酸性染料结合显色，进而用分光光度法测定药物含量的方法,2. 影响因素 (1) 水相最佳pH值的选择：本法中水相的pH应使有机碱性药 物均成阳离子(BH+)，而酸性染料应电离足够的阴离子(In -),阴阳 离子才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的染料 完全保留在水相中，才能保证定量的测定。 (2) 酸性染料及其浓度：常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲 基橙、溴甲酚绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即 可。增加染料浓度可提高灵敏度，如果太高，则容易乳化,根据有机药物和酸性染料的pK值及两相中的分配系数来确定,(3) 有机溶剂的选择 有机碱药物应对离子对提取率高，不与 水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶 剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。 (4)水分的影响：严防水分混入有机溶剂中，水相中过量有色 酸性染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影 响比色测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混 入的水分。,3. 应用示例 Ch.P中硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪 碱片和氢溴酸山莨菪碱片等，采用本法测 定含量测定。 紫外吸收弱、标示量低,1、配制对照品溶液氢溴酸东莨菪碱 2、供试品溶液样品研细称细粉溶解过滤 3、测定精密取对照品和样品加入分液漏斗，加入氯仿和溴甲酚绿，振摇后分层，分取氯仿层进行UV法，在420 nm处测定,（一）直接分光光度法 供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。 1.奥沙西泮原料的测定 在229nm，采用标准对照法测定。 2.盐酸异丙嗪片的测定 在249nm，采用E1cm1%910测定。 3.盐酸异丙嗪注射液的测定 测定波长的选择：注射液处方加VC作抗氧剂，可还原异丙嗪红 色氧化产物，从而防止异丙嗪氧化变色。VC在盐酸异丙嗪最大 吸收波长249nm处有吸收，干扰注测定。因此选用299nm波长测 定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生素C在此波长处则不产生干 扰,但E1cm1%108。,四、紫外分光光度法,(二)萃取后分光光度法,盐酸氯丙嗪注射液,盐酸氯丙嗪,氨水碱化,氯丙嗪,乙醚提取,乙醚层,盐酸提取,盐酸氯丙嗪,max2541nm处测定A， E1cm1%915,（三）萃取-双波长分光光度法 本法是USP（24）收载的方法，用于盐酸氯丙嗪注射液的 含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。 测定原理 利用氯丙嗪的最max为254nm，其氧化物在此波长也有吸收，同时在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波长无吸收。因此，可由两波长处测得A计算氯丙嗪含量。,（四）二阶导数分光光度法 盐酸氯丙嗪注射液 抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定。因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰266nm谷254nm距离，标准曲线法定量 其测定方法如下：,1.光谱绘制 测绘条件： 波长范围为200nm320nm；狭缝为12nm；纸速为120mm/min。 2.线性关系 精取盐酸氯丙嗪对照液(50g/ml)制得标准系列，以 HCI(0.1mol/L)为空白，按光谱绘制项下分别测定。用尺量取不 同浓度系列溶液光谱266nm-谷254nm距离（DL），并以峰谷距离为纵 坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 3.供试品测定 精密量取盐酸氯丙嗪注射液2.0ml，按光谱绘制项 下的方法，测得二阶导数光谱，量取光谱峰-谷(266nm254nm) 距离，从标准曲线上求出浓度，计算百分含量。,五、气相色谱法,* 对热稳定可气化的有机碱，先碱化得游离碱后测定 （一）硫酸阿托品片的含量测定 USP(24)采用的方法。以后马托品作为内标, 采用标准对照 法。 测定方法 (1)内标溶液的制备： (2)供试品溶液与对照品溶液的制备： (3)色谱系统：色谱柱为1.8m2mm的玻璃柱；担体为与碳酸 钠混合于900熔融后，经酸和碱处理的硅烷化藻土；固定 相为3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧烷）；载气 为氮气，流速为25ml/min；检测器为氢火焰离子化检测器。,(4)系统适用性试验：取对照品溶液1l，进样6次，所得的对 照品和内标峰面积之比的RSD不大于2.0%；对照品峰和内标峰的 分辨率Rs4.0；拖尾因子T2.0。 T(拖尾因子)=W0.05h/2d1，d1为峰顶点至峰前沿之间的距离,(5)测定方法：取供试液和对照液各进样1l，记录各峰面积，用下式计算所取片粉中硫酸阿托品(C17H23NO3)2H2SO4H2O的重(mg),（二）人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力学研究,血浆样品处理：血浆加入内标加入乙醚：环已烷（1：2）NaOH 窝旋提取离心分取有机相吹干丙酮溶解GC分析 GC-ECD测定：DB-1（250.320.5），氮气为载气，分流比50：1，气化室温度：250，检测器温度：300，程序升温：,色谱系统适用性：硝苯地平tR=9.4 min，n39000,内标tR=12 min，n30000，内源性物质不干扰测定（专属性），LOD=0.5 ng/ml，线性范围：1.0100 ng/ml，高、中、低的绝对回收率75,(一) 反相高效液相色谱法 1.地西泮注射液的反相HPLC法 地西泮注射液曾用萃取后分光光 度法测定含量，因萃取不完全，及有关物质和分解产物等对测 定有干扰，故中国药典自1995版改用HPLC法。此法操作简便， 可消除干扰。注射液中地西泮的平均回收率为99.4%，相对标 准偏差为0.8%。 (1)色谱条件与系统适用性试验：ODSC18；流动相为甲醇-水 (70:30) ；检测波长为254nm 。n1500，R1.5。 (2)内标溶液的制备：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解 并稀释至刻度，摇匀，即得。,六、高效液相色谱法,(3)测定方法：取地西泮对照品约25mg，精密称定，置25ml量 瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液与 内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。 吸取5l10l进样，记录色谱图；另取本品适量(约相当 于地西泮5mg），同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。,2.高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量 色谱条件:色谱柱为SpherisorbC18 5m 流动相为0.025mol/L 磷酸(三乙胺调pH为3.0)-乙腈(80:20)；柱温为30；检测波 长为215nm；n=5880。 线性关系：精取硫酸阿托品适量，用流动相制备成22.4、 44.8、67.2、89.6、112g/ml溶液，进样3次，每次20