需氧革兰阳性杆菌.ppt

需氧革兰阳性杆菌,芽胞杆菌属Bacillus 李斯特菌属Listeria 丹毒斯菌属Erysipelothrix 加德纳菌属Gardnerella,需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种 与医学有关5个种 炭疽芽胞杆菌（B.anthracis） 蜡样芽胞杆菌（B.cereus） 蕈状芽胞杆菌（B.mycoides） 巨大芽胞杆菌（B.megaterium） 苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）,临床意义,引起人、蓄共患的急性传染病，包括皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽、败血性炭疽，烈性传染病, 死亡率极 致病因子： 荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散 炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子 病后可获得持久免疫力,炭疽芽胞杆菌,炭疽芽胞杆菌,革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、无鞭毛、可有毒株有荚膜，芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央，多在有氧条件下形成，2530，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖,普琼平板：灰色、粗糙型菌落；卷发状边缘（低倍镜下） BAP：不溶血 NaHCO3 BAP： 有毒株产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点) 无毒株粗糙型菌落,培养特性,肉汤培养基：絮状沉淀 明胶371824h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。,生化反应,葡萄糖+ 、麦芽糖+ 、蔗糖+、 卵磷脂酶弱+、触酶+ 硝酸盐还原试验+、VP、吲哚、硫化氢、柠檬酸盐、尿素 明胶液化 胨化牛乳：在牛乳中生长24天后牛乳凝固并缓慢胨化,抗原,菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性不高，病兽脏器皮毛加热后仍可与相应抗体反应，称Ascoli热沉淀反应 荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关 芽胞抗原： 炭疽毒素Anthrax toxin： 由保护性抗原、致死因子、水肿因子形成。,抵抗力,耐热、耐干燥 对氧化剂敏感 对青霉素、磺胺类抗生素敏感,微生物学检查,标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死蓄。 标本的处理：液体标本取沉渣分离培养；固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直接分离培养,痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物,2%兔血清肉汤快速增菌374h,荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验,直接涂片,荚膜染色 G染色,初步报告,0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖,涂片G染色、荚膜染色,初步报告,快速检验程序,核酸检测,Ascoli试验,皮毛、腐败脏器等,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,皮毛、腐败脏器等,血液,以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理,肉汤增菌培养,BAP或戊烷脒平板,2%兔血清肉汤48h,G染色镜检,菌落特征,动力观察,串珠试验,确定报告,荚膜肿胀试验,分离培养检验程序,法定报告传染病，发现疑是病例应于24小时内上报CDC,戊烷脒多粘菌素琼脂,基础培养基 25g/L戊烷脒: 杀灭利什曼原虫等寄生虫 3000IU/L多粘菌素 2%脱纤维羊血,检验方法,涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、有明显荚膜和芽胞初步报告 荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验 核酸检测：核酸杂交 分离培养：BAP或戊烷脒多粘菌素B等选择性培养基。 2%兔血清肉汤增菌分离培养,菌落特征 形态染色 生化试验:表131 串珠试验: 接种于含青霉素(0.050.5U/ml)的肉汤中，37 6h，大而均匀成串的圆球状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关，类炭疽无此现象,鉴定试验,接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板， 3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,青霉素抑制试验,串珠形成区,噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，10%CO2、37、2448h，有毒株形成荚膜黏液型菌落，无毒株不形成荚膜粗糙型菌落 毒素动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种 植物凝集素试验：荧光或酶标记PHA与菌体多糖反应 Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断,其它实验,临床意义,食物中毒：含菌量达105/g以上，夏、秋季多见，中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意 呕吐型耐热肠毒素 腹泻型不耐热肠毒素 全眼球炎（外伤后） 心内膜炎、败血症和脑膜炎,蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus,蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus,形态：革兰阳性大杆菌、两端钝圆、有芽胞、周鞭毛、无荚膜 培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温度3035，营养要求不高。 普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡样光泽 BAP 有溶血 卵黄平板生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应,生化反应,葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等 卵磷脂酶+ 、VP 胨化牛乳、液化明胶， 多次传代后生化特性常可改变,微生物学检查,呕吐物、残留食物等,活菌计数,接种 BM BAP 卵黄琼脂平板,371824h,直接涂片染色镜检,动物试验,生化反应,血清凝集,报告结果,结果解释,因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。 从食物中分离出菌数105CFU/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险 从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,三、枯草芽胞杆菌,生物学性状形态染色,革兰阳性大杆菌、两端钝圆 有芽胞、无荚膜、有鞭毛,培养特性,BM：灰白色、不透明、干燥、锯齿状粗糙大菌落 BAP：溶血大菌落,生化反应,触酶+ 葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖 串珠试验 卵磷脂酶,炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别,鉴别项目 炭疽芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌 蜡样及其他芽胞杆菌 形态 菌体两端平截、长链 两端钝园、短链 两端钝园、短链 荚膜 多肽荚膜 动力 + + 菌落 卷发状，有毒株为M型 锯齿状、R型 蜡样或R型 肉汤生长 絮状沉淀、上层清 形成菌膜 均匀混浊有菌膜 卵磷脂酶 + + 溶血反应 不溶或微溶血 溶血 溶血 Ascolis试验 + 串珠试验 + 青霉素抑制试验 + 植物凝集素试验 + 荚膜肿胀试验 + 荧光抗体染色 动物毒力试验 + 蜡样芽胞杆菌的肠毒素可致小鼠等动物发病致死，但不产生荚膜，其他需氧芽胞杆菌（） 噬菌体裂解试验 + ,李斯特菌属,产单核细胞李斯特菌 红斑丹毒丝菌,一、产单核细胞李斯特菌 生物学性状,革兰阳性短小杆菌成双排列 有鞭毛（1820有动力；37动力缓慢），无芽胞，无荚膜 4可生长 BAP：灰白色菌落，有狭窄的溶血环 半固体培养基：倒伞形生长,生化反应,发酵多种糖类 硝酸盐还原试验 甲基红+ VP试验+,抵抗力,耐碱不耐酸 对热敏感 对多种抗生素敏感（首选氨苄青霉素） 对磺胺、杆菌肽、多粘菌素耐药,临床意义,主要引起脑膜炎、败血症 传播途径：粪口途径，胎盘和产道 致病因子：溶血素和菌体表面成分,微生物检查,标本,涂片革兰染色镜检,荧光抗体染色,动力检查 （25，37）,血液,肉汤增菌,脑脊液沉淀物,咽喉拭子、组织、粪便冷增菌,接种羊血琼脂平板,生化反应,血清学试验,动物试验,二、红斑丹毒丝菌,革兰阳性杆菌，无芽胞，无鞭毛，无荚膜 厌氧或微需氧 BAP：形成两种菌落光滑型小菌落和粗造型大菌落。 发酵葡萄糖及乳糖、液化明胶、产生硫化氢 主要引起家畜感染及人类丹毒,加德纳菌属,阴道加特纳菌,生物学性状,多形性，单个或成双排列，染色不定（视菌龄和菌种而定：临床株G+，保存株 G），无芽胞、无荚膜、无鞭毛 兼性厌氧，营养要求高，BAP：可有溶血 葡萄糖、麦芽糖、蔗糖 氧化酶、触酶 对青霉素类敏感、对磺胺类耐药,临床意义,与非特异性阴道炎（BV）有关 BV是阴道内乳酸杆菌被另一组厌氧菌为主的细菌取代，同时伴有阴道分泌物性质改变的一组综合征。 主要病因为阴道内乳酸杆菌大量减少，伴有阴道加特纳菌、类杆菌、消化球菌及支原体大量增殖。,微生物学检