医学博士开题报告输尿管部分梗阻的动物模型的制作.ppt

,xx大学第一临床学院 xxxx级外科学(泌尿)研究生开题报告,欢迎莅临指导！,输尿管部分梗阻是一种常见的临床现象，可由多种因素引起，梗阻如不能及时解除，将导致肾积水，肾积水使肾盂内压力逐渐升高，压迫肾小管，肾小球及其附近的血管，造成肾组织缺血缺氧，肾实质逐渐萎缩变薄，肾容积增大，最后全肾成为一个无功能的巨大水囊。 临床上由输尿管梗阻引起的肾积水较常见，输尿管完全梗阻与不全梗阻引起肾的病理生理学变化有很大的不同1,2，输尿管梗阻大多数是部分梗阻。,立题依据,目前对于与梗阻性肾积水发生发展过程有关的分子改变事件进行了许多的研究,结果表明梗阻性肾病发生发展过程存在着复杂的分子调控机制，但在肾积水病理演变过程中,也涉及了一系列梗阻后肾形态学如肾血管方面的变化，梗阻前后肾血管形态上有着怎样的变化？以及梗阻解除后随着积水程度的减轻，肾血管形态是否相应的恢复，如何解释这些现象？形态学与分子机制之间有着怎样的联系？,研究现状,输尿管部分梗阻的动物模型的制作 早在世纪中期就有学者进行研究，迄今为止已有多种输尿管部分梗阻模型报道，但各具优缺点，都有其相应的适用范围3-10： 输尿管套管法 输尿管腰大肌隧道包埋法 输尿管不全结扎法 银夹半环夹法 输尿管内支架置入法,血管铸型填充剂 随着化工业的快速发展，不断出现新的铸型材料，血管铸型的方法也在不断的改进，常用的填充材料：, X 线填充剂,明胶氧化铅： 20 世纪30 年代, 法国解剖学家Salmon 曾通过整尸灌注氧化铅进行血管造影, 系统地研究了全身皮肤、肌肉的血管分布状况21,22。 1986 年, Taylor 对其灌注液的配方进行了改进, 自此, 明胶- 氧化铅灌注技术成了皮瓣血管解剖学研究的重要手段23。 唐茂林, 楼新法等进一步改良, 不仅造影效果比以前大有提高, 而且氧化铅的用量大幅度减少24,25。并首次引入数字化图像处理技术对全身动脉进行了3D 可视化研究及皮动脉的定位定量研究26, 27,氧化铅( lead oxide, LO)颗粒小、水溶性、分散性好,一直被认为是较好的X 线填充剂。但其目前所用载体成分明胶是动物胶原蛋白, 分子量大, 交链呈三维网状, 氧化铅在其内的分布不是很均匀。在三维重建图像中, 易出现血管造影空泡、毛刺等。,羧甲基纤维素/氧化铅水凝胶 (hydrogel of carboxymethylcellulose with lead oxide, HCMCL)：,羧甲基纤维素( carboxymethylcellulose, CMC) 具有优异的分散性, 在工业和医药化工行业中广泛应用28,29。周小兵以CMC作为氧化铅(lead oxide , LO) 的载体,配制成CMC-LO 造影填充剂，从均匀性和CT 值角度系统地研究分析了LO/CMC 最佳比例以及水凝胶物的体积变形特点和稳定性。在获取最佳配比的基础上, 选用SD 大鼠进行全身血管灌注试验, 经CT 扫描、三维重建所得图像清晰, 取得了满意的效果。,目前国内外对于正常人、动物肾动脉及分支、肾小球的形态分布14,15,30,31作了研究，对于动物模型肾动脉及分支、肾小球的研究报道少见，尤其是肾积水模型方面尚未见报道，肾血管三维重建的研究亦未见报道。 梗阻性肾病的特征性病理学变化主要表现为肾小管萎缩和间质纤维化, 而肾小管上皮细胞凋亡是肾小管萎缩和肾实质丧失的重要原因32,33。 在肾积水的过程中，肾动脉及其分支、毛细血管内皮细胞是否有凋亡？凋亡的程度如何？凋亡与血管形态的改变有着怎样的关联？血管形态的改变在肾积水的病理演变过程中起着怎样的作用？未见相关报道。,因此，基于上述研究现状，得出研究题目： 输尿管部分梗阻血管重塑的形态学改变及机制,研究目的,1. 输尿管部分梗阻动物模型梗阻前、后、以及解除梗阻后的肾血管形态变化规律； 2. 对输尿管部分梗阻动物模型的血管灌注技术进行探索，以实现模型三维可视化； 3. 输尿管部分梗阻动物模型血管形态变化与肾血管内皮细胞凋亡的关系，为临床肾积水的防治提供理论依据。,研究方法、可行性分析,铸型： 肾小球铸型：肾动脉插管，采用聚甲基丙烯酸填充剂灌注； 肾盂肾盏铸型：输尿管插管，采用过氯乙烯和自凝牙托材料的混合填充剂 灌注； 肾集合管铸型：输尿管插管，采用过氯乙烯填充剂灌注 扫描电镜：分别对梗阻前后肾小球和集合系统进行观察，比较。 三维重建：首先采用羧甲基纤维素/氧化铅水凝胶经肾动脉插管灌注，使用螺旋CT扫描，利用Mimics软件重建。 凋亡检测：石蜡切片采用TUNEL法原位检测血管内皮细胞凋亡，免疫组化检测Bcl-2 、bax 。,研究方法,可行性分析,输尿管部分梗阻模型已制备 本实验采用输尿管部分梗阻模型，输尿管部分梗阻模型报道的方法很多，各有优缺点，选择何种模型呢？通过预实验对输尿管套管法和输尿管不全结扎法两种造模方法的对比，发现输尿管套管法由于套管的刺激作用，粘连较重，解除梗阻较困难，输尿管不全结扎法对输尿管周围组织粘连轻，梗阻易解除，解除梗阻后尿流通畅； （图2）,实验所需的药品试剂、仪器设备已具备： 药品试剂（图3）压力灌注器 （图4）,技术路线的设计合理可行；,在铸型技术上拟请一名经验丰富的技术员指导灌注； （图1）,人员组成齐备,日本大耳白兔100只,梗阻观察组（O）48只,正常对照组 （N）12只,建模,O1组,O4组,O8组,扫描电镜,统计分析,技 术 路 线 图,肾盂、肾盏、 肾血管铸型,大体标本解剖,肾动脉分支、分段、 血供及管径测量,大体标本观测,假手术组（SO）4只,O2组,三维重建,血管形态,梗阻解除组36只,2周,4周,1周,肾小球形态观察,凋亡,TUNEL法 Bcl-2 、bax Hoechst,创新和特色,1.采用铸型技术对输尿管部分梗阻动物模型肾血管，肾盂肾盏、肾集合管进行灌注，对今后此类动物模型的铸型制作提供参考； 2.采用铸型技术对输尿管部分梗阻的肾血管形态变化进行探讨，直接观测肾血管的变化过程，从形态学方面解释肾积水后肾功能损害的机制； 3.使用数字人虚拟技术对输尿管部分梗阻的肾血管进行三维重建；为数字化虚拟泌尿道血管及模拟临床手术入路方式提供有益的经验。,实验进展安排,2009.5-2009.6 完成肾血管、肾盂肾盏、集合管铸型及X线填充剂的配置，探索最佳的灌注浓度，进行小样本的预实验； 2009.6-2009.12 完成梗阻前后及梗阻解除组肾血管铸型、肾盂肾盏、集合管铸型，CT扫描，凋亡实验指标的检测； 2010.1-2010.5 完成实验资料的收集、分析、整理，撰写和发表科研论文；,项目,支出依据,金额（万元）,实验动物（兔）,0.8,动物饲养,0.9,灌注用药品试剂,0.1,扫描电镜,0.4,TUNEL、 Bcl-2 bax检测,0.5,消耗品及玻璃器材,0.1,学术交流、复印、论文发表,0.4,科研业务费,实验材料费,仪器设备费,合计,3.2,经费预算,参考文献,1 Murphy GP,Scott WW.The renal hemodynamic response to acute and chronic ureteral occlusionsJ.Urol,1966;95(5):636-657. 2 Moody TE,Vaughn ED Jr,Gillenwater JY.Comparsion of the renal hemodynamic response to unilateral and bilateral occlusionJ.Invest Urol,1977;14(6):455-459. 3 cheng EY,Maizels M,Chou P,et al.Response of the newborn ureteropelvic junction complex to induced and later reversed partial ureteral obstruction in the rabbit modelJ.Urol,1993;150(2pt2):782-789 4 Bartrum RJ Jr,smith EH,DOrsi CJ,et al.The ultrasonic determination of renal transplant volumeJ. 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