血管扩张DIF表皮基底膜IgGPPT幻灯片.ppt

,免疫荧光技术在某些皮肤病中 的 应 用,1,.,概 述,抗原与相应的抗体接触后，立即结合而形成不易分离的抗原抗体复合物。在结合之前，先使抗体（或抗原）与某些显色剂偶联，则形成的抗原抗体复合物由不可见成为可见，从而可以确定组织中是否存在某种抗原（或抗体），这就是免疫病理技术的基本原理。根据抗体（或抗原）标记物的不同分为免疫荧光技术和免疫酶标技术。,2,.,免疫荧光技术的发展, 1941年 由Coons首先建立了免疫荧光技术 1961年 由Kaskin首先将该技术应用到皮肤科 1963年 Burnham等报告了红斑狼疮病人表皮、 真皮间基底膜IgG、C3沉积 1964年 Beutner和Jordon利用免疫荧光技术研究天疱疮 1967年 区分出大疱性类天疱疮 70年代开始应用免疫电镜去认识大疱性皮肤病,3,.,近来，皮肤病理工作者应用免疫荧光技术对大疱性皮肤病、红斑狼疮、扁平苔癣、银屑病、皮肤血管炎等免疫病理特征进行了研究，并已广泛应用于常规病理诊断、鉴别诊断及指导治疗。,4,.,缺点： （1）标记的荧光极易褪色，不能长久保存。 （2）影响荧光强度的因素很多，而且判断阳性荧光与非特异性荧光有一定的主观性。 （3）阳性荧光细胞无法与常规石腊切片对照观察，组织学定位困难。 （4）需要较好的冰冻切片机和荧光显微镜等，因此它的应用受到一定的限制。,5,.,免疫荧光技术,（一）原理： 将荧光色素（异硫氰酸荧光素）与特异性抗体以化学的方法结合起来，即为荧光抗体，再用这种荧光抗体作为一种试剂，在特定的条件下浸染标本，与标本中相应的抗原结合。在组织中形成含有荧光标记的抗体抗原复合物，再用荧光显微镜观察标本。,6,.,（二）方法： 1、直接法（DIF）：用荧光素标记的特 异性抗体来检查未知抗原。如组织中存有相 应的抗原，便结合，形成复合物。 抗原 标记抗体 玻片 标记抗原抗体复合物,7,.,优点： （1）方法简单，需时短。 （2）特异性强。 缺点： （1）不能用已知抗原检查未知抗体。 （2）为了检查各种抗原，需要准备多种特异性荧光抗体。 （3）敏感性较差。,8,.,2、间接法（IIF）：用荧光标记的抗体来检查未知抗原或未知抗体。 抗原 抗原抗体 复合物 未标记抗体 玻片 抗原抗体复合物 标记抗体 双抗体复合物,9,.,优点： （1）既能检查未知抗原，也能检查未知抗体。 （2）用一种标记抗体，能检查多种抗体复合物。 （3）敏感性高。 缺点： （1）由于参加的因素多，受干扰的机会也多，故结果有时判断困难。 （2）方法较麻烦，时间较长。,10,.,3、补体荧光抗体法：用荧光素标记的抗补体抗体检测未知抗原或未知抗体。 抗原+抗体 +补体 复合物 抗原 抗体 补体 抗原+抗体+补体复合物 抗补体标记抗体 荧光标记补体复合物,11,.,优点： 具有间接法的一些优点。 缺点： 非特异性荧光更多。,12,.,在皮肤病中的应用,免疫荧光检查，对某些皮肤病已成为一种极重要的临床和组织学检查的补充方法，既能检查血清，又能检查活体标本。,13,.,（一）标本,1、血清标本：取血2ml，不加抗凝剂，室温下放置片刻，凝固 离心 分离出血清 冷冻保存。 2、皮肤活检标本：进行皮肤活检时，其所取标本部位的选择十分重要，直接关系到免疫病理的结果如何。,14,.,皮肤病免疫荧光,15,.,16,.,17,.,（二）皮肤病,1、红斑狼疮：在目前红斑狼疮的诊断和研究中，直接免疫荧光（DIF）已成为一种重要的手段。 （1）狼疮带试验（LBT）：用直接免疫荧光法来确定DLE皮损，SLE皮损及正常皮肤的表皮、真皮交界处免疫球蛋白和补体的沉积。一般沉积抗体是以IgM、IgG、C3为主，IgA少，呈线状或带状或颗粒状。有时真皮内血管壁上可有IgG、IgM沉积。,18,.,（2）LBT诊断价值：,LBT是诊断LE的重要检测方法，具很高的特异性，SLE皮损部位LBT阳性率为90%，未受累皮肤为54%，DLE皮损处为90%。如果LBT（+）可以确诊LE，因此能将临床上与LE相似的其他皮肤病鉴别。但是LBT（-）也不能排除LE，因LE患者的LBT不是百分之百的阳性。,19,.,LBT可用于SLE与DLE的鉴别诊断。 对无皮损的SLE，LBT有助于诊断。 LBT对SLE与其他抗核抗体阳性疾病作鉴别时，具有参考价值。 狼疮带假阳性。,20,.,狼疮带对治疗敏感，经大约6个月治疗后，LBT可转变为阴性，（血内抗体阴转可很快，但皮损内抗体消失慢），SLE病情加重LBT由阴性转为阳性。（Ig沉积在基底细胞的半桥粒、基底板内及真皮内的纤维成份中）,21,.,2、天疱疮： DIF 患者几乎百分之百均可查到表皮细胞间抗体，呈鱼网状沉积，主要为IgG，约3050%病人可有IgM、IgA。未治疗的病人伴C3。红斑型天疱疮除了在表皮出现细胞间IgG抗体外，23-80%的病人伴有基底膜抗体沉积。,22,.,IIF 查病人血清，约8090%天疱疮病人有循环的抗表皮细胞间抗体，主要是IgG。病人血清中抗细胞间抗体的滴度与病情的活动性有密切关系。抗体滴度1:201:40为低滴度，1:801:160为中等滴度，1:320以上为高滴度。应每2-3周做一次IIF，直至病情减轻，以后每36个月复查一次。,23,.,IgA天疱疮： 为表皮内嗜中性细胞增多，临床表现为角层下脓疱病样皮肤病和疱疹样天疱疮，免疫病理为表皮细胞间IgA沉积，少数病人伴IgG、C3沉积。仅为细胞间IgA沉积或主要为IgA，那么IgA天疱疮诊断成立。50%的病人有循环IgA抗体结合在表皮细胞间，但滴度低。,24,.,副肿瘤型天疱疮： 伴恶性疾病特征，常伴肿瘤为非何杰金氏淋巴瘤，慢性淋巴细胞白血病、肠腺瘤等，皮损为多形性瘙痒性丘疹、鳞屑，水疱，有时似多形红斑，组织学为表皮基底层上棘层松懈，角质形成细胞坏死，角化不良，表现为天疱疮和多形红斑的特征，DIF 细胞间IgG+，伴有或不伴有C3沉积，同时基底膜有C3或IgG沉积。IIF 有抗表皮细胞间抗体和抗基底膜抗体。,25,.,3、大疱性类天疱疮（BP） DIF 在皮损周围的皮肤基底膜有线状IgG（95%），C3（100%）沉积，阳性率为95%-100%。少数病人可有IgM沉积。（沉积在透明板和基底细胞下方） IIF 约7080%病人血清中有IgG抗基底膜循环抗体。抗体滴度与病情活动性之间似无明显关系。,26,.,4、 疱疹样皮炎（DH） DIF 非受损皮肤真皮乳头部有颗粒状IgA沉积。阳性率为95%，抗体沉积最常见为颗粒型，而连续线型少见。个别病人除IgA沉积外还伴有C3沉积。（颗粒状IgA沉积在真皮乳头弹力纤维原纤维） IIF 循环抗基底膜抗体阴性。抗平滑肌肌内膜IgA循环抗体阳性（80%）。,27,.,5、 线状IgA大疱性皮病（LABD） DIF IgA在基底膜呈线状沉积，阳性率100%，1/3病人可有IgM、C3沉积。 IIF 约733%病人血清中有循环抗体IgA，抗原为97KD（沉积在致密板的两侧，即透明层和致密板下区）,28,.,6、 妊娠疱疹（HG） 为在妊娠期出现的特殊类型的大疱性类天疱疮。 DIF 基底膜C3线状沉积，阳性率100%，约3050%病人也可伴有基底膜IgG线状沉积。（沉积在透明层） IIF 未查到循环抗体。,29,.,7、获得性大疱性表皮松懈症（EBA） DIF 基底膜IgG、C3沉积,阳性率100%,少数伴IgA、IgM沉积(沉积在透明层) IIF 循环抗基底膜IgG抗体阳性率2560%。(沉积在基底板下),30,.,31,.,几种大疱性皮肤病的 鉴别诊断,1、BP与EBA鉴别： （1） 临床特征 （2）免疫电镜和免疫印迹 （3）盐分离皮肤法：盐分离正常皮肤作底物，IIF，EBA抗体与真皮侧起反应，BP抗体与表皮侧起反应。 盐分离损害周围皮肤，DIF,32,.,2、BP与HG鉴别： BP，70%IIF可查到IgG抗基底膜循环抗体，而大多数HG病人查不到循环抗体，HG病人血清含补体结合的循环抗BMZ抗体（又称HG因子），用IIF很难检出。,33,.,3、线状IgA大疱性皮肤病 与DH鉴别： 线状IgA大疱性皮肤病，DIF检查基底膜处IgA线状沉积，循环抗体为IgA，而DH是真皮乳头颗粒状IgA沉积。,34,.,大疱性皮肤病抗体沉积部位超微结构图,图1、正常表皮基底膜超微结构,35,.,图2、表皮基底膜显示自身抗体结合部位的超微结构,36,.,图3、 大疱性皮肤病自身抗体沉积部位及抗原分子量,37,.,图4、寻常型天疱疮(DIF),38,.,图5、寻常型天疱疮(IIF),39,.,图6、IgA天疱疮(DIF),40,.,图7、大疱性类天疱疮(DIF) IgG沉积,41,.,图8、大疱性类天疱疮(DIF) C3沉积,42,.,图9、线状IgA大疱性皮肤病(DIF) IgA沉积,43,.,图10、获得性大疱性表皮松懈症 盐分离正常皮肤(IIF) IgG沉积在真皮侧,44,.,图11、大疱性类天疱疮盐分离正常皮肤(IIF) IgG沉积在表皮侧,45,.,图12、红斑狼疮(DIF) IgM带状沉积,46,.,少见大疱性皮肤病例介绍,例1 患者 女 43岁，干部 口腔溃疡，疼痛3个月。 口腔双侧颊粘膜后侧及舌左侧缘表浅溃疡，左侧颊粘膜溃疡约0.50.3cm，未见水疱。,47,.,图13,48,.,图14,49,.,图15,50,.,例2,患者 男 21岁 农民 主诉：全身反复起水疱3年，复发加重1个月 现病史：3年前双足起水疱，易破溃，3天后泛发全身，用激素治疗后消退，但停药后复发，反复治疗达2年余，至5个月前停药，又复发，收入院治疗。 皮肤科检查：四肢躯干广泛密集分布豆大丘疹，水疱，疱壁紧张，尼氏征（-），头皮散在淡红色斑块，躯干散在大小不一淡白色斑片，口腔粘膜（-）。 病理检查：表皮下水疱，疱底真皮浅层散在嗜酸性粒细胞。胶原纤维水肿，血管扩张。 DIF 表皮基底膜IgG、C3强阳性沉积，IgM、IgA弱阳性。,51,.,图16,52,.,图17,53,.,图18,54,.,图19,55,.,图20,56,.,图21,57,.,图22,58,.,参