细菌检查

1,细菌感染的 检查方法和防治原则,第四节,一、细菌感染的检查方法,细菌学诊断-直接找病原体 血清学诊断-检测相应的抗原抗体 现代细菌学检测技术-三大标记技术 分子生物学技术,（一）细菌学诊断,标本采集送检 六大原则,1. 注意无菌操作,2. 在相应部位采集标本,3. 注意抗生素对采集标本的影响,4. 病变部位采集标本,6. 注意检测标本的保存和运送,5. 保持采集标本新鲜,致病菌的检验程序,直接涂片镜检,分 离 培 养,生化试验 血清学试验 动物试验 药物敏感试验 基因诊断技术,明确诊断,初步诊断,标本,直接涂片检查,肺结核患者痰液（抗酸染色）,脑膜炎患者脑脊液（革兰染色）,特殊标本：特定部位标本 特殊形态：特殊细菌形态,6,分离培养,药敏试验,MIC 最低抑菌浓度,Disk diffusion,E-test,Tube dilution,基因诊断技术(核酸杂交、PCR、DNA 芯片),（二）血清学诊断,原理 用已知的细菌或其特异性抗原检测患者血清中 有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。 标本 双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍者方有意义 种类 凝集试验：肥达试验、外斐试验等 沉淀试验：梅毒VDRL、RPR试验等 中和试验：抗“O”试验等 补体结合试验：Q热柯克斯体抗体检测等,10,（三）现代细菌学检测技术,标记技术,分子生物学技术,用标记物标记抗体或抗原，进行抗原抗体反 应借以提高免疫学诊断的敏感性。,放射性同位素： 125I、131I,酶：辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶,荧光素：异硫氰酸荧光素等,三 大 标记物,核酸杂交、PCR、DNA 芯片等,获得性免疫的产生方式,二、细菌感染的防治原则,细菌感染的特异性预防,人工主动免疫,定义：将疫苗或类毒素接种于人体，使机体 产生获得性免疫力的一种防治微生物 感染的措施。 特点：免疫出现时间较晚，但较强 维持时间长，有免疫记忆（回忆反应）应用：预防,常用制剂,生物制品 ： 来源于生物体的用于人工免疫的制剂,疫苗：,灭活疫苗、减毒活疫苗,类毒素：,新研制疫苗：,亚单位疫苗、基因疫苗、治疗性疫苗,外毒素脱毒后失去毒性，保留抗原性,人工被动免疫,定义：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化 免疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制 剂，使机体即刻获得特异性免疫力 特点：立即出现免疫效果，但维持时间短 应用：紧急预防、治疗,抗毒素,细胞免疫制剂,抗菌血清,胎盘球蛋白,丙种球蛋白,常用制剂,比较,人工主动免疫与人工被动免疫,抗菌药物：抗菌素、化学合成抗菌药物 合理使用抗菌药物、防止耐药性产生 （药敏试验、剂量、疗程）,细菌感染的治疗,呼吸道传播的细菌,结核分枝杆菌-结核病 脑膜炎奈瑟菌-流行性脑膜炎 流感嗜血杆菌-呼吸道等炎症 肺炎支原体-非典型性肺炎 肺炎链球菌-大叶性肺炎,主 要,以呼吸道作为入侵门户，感染机体引起致病的细菌,第五节,结核分枝杆菌Tubercle bacillus,俗称结核杆菌、引起人类结核病的病原菌 致病菌主要为 人型结核杆菌 牛型结核杆菌 结核病在旧中国流行严重，死亡率高，各种死因之首 近年来由于艾滋病、吸毒、应用免疫抑制剂 及耐药菌的增多，发病率又有上升的趋势现 目前，我国有病人600万,死亡25万,我国结核病疫情表现有“六多”,感染人数多：感染过结核菌的病人达5.5亿 患病人数多：活动性肺结核患者450万 新 发现病人多：新发现病人65万/年 耐药病人多：占全球的1/4至1/3 农村人数多：农村病人约占80% 死亡人数多：死于结核病的人数约13万/年,形态染色,1、形态：细长、弯曲、有分枝状生长现象 2、染色：抗酸染色阳性 3、无鞭毛、芽胞 4、近年发现有荚膜，但染色时破坏，见不到,一、生物学特性,培养,专性需氧,营养要求高,常用罗氏培养基,生长慢缓慢,菌落形态,固体：花菜状菌落,液体：表面生长（菌膜）,三特点,生长现象,抵抗力,四抗,干抗燥,抗酸碱,抗碱性染料,抗青霉素等,怕抗痨药物,四怕,怕湿热,怕紫外线,怕酒精,变异,可 发 生 多 种 变 异,形态结构变异,结核杆菌的L型,毒力变异,卡介苗-牛结核杆菌的减毒株,耐药性变异：,耐异烟肼及其他抗结核药物的 结核菌株日益增多,菌 体 成 分,二、致病性与免疫性,荚膜,粘附、保护等作用,脂质,索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）,磷脂（形成结核节结） 硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体酶结合） 蜡质D（引起迟发性过敏反应）,蛋白质,引起迟发性过敏反应,无毒素、侵袭性酶，认为菌体成分和荚膜与致病有关,致疾物质,通过各种途径，主要呼吸道 引起各种结核病,传播与扩散,体内,细菌,呼吸道 消化道 破损皮肤粘膜,淋巴管 血液 支气管 消化道,扩散,侵犯多种组织器官 引起相应的结核病,传染源,痰涂片阳性者是主要传染源。,所致疾病,肺部感染:最多见,分原发感染和继发感染,原发感染：初次感染，外源性感染,多见儿童，无免疫力，原发综合症,90%以上，病灶纤维化或钙化而痊愈 5% 发展为活动性肺结核 少数病灶扩散，引起全身TB、粟粒型TB,（反应一般，渗出性炎症）,致病特点,肺原发综合征,肺原发病灶,肺门淋巴结结核,继发感染：外或内源性感染（原发感染留下的）,（反应剧烈，干烙性坏死、空洞）,病灶局限 引起局部结核 可形成干酪坏死，液化、病灶破入气管， 成开放性结核 传染性强,多见成人，有免疫力，,空 洞,干酪性肺炎,结核球,午后低热、乏力、咳痰 咳血、体重减轻、盗汗,典型临床症状,其他部位感染:全身各个部位,关节结核,肾结核,脊髓结核,免疫性,1、抗体无作用，机体对结核的免疫为,3、产生免疫同时也产生过敏反应,2、结核的免疫属于,传染免疫（有菌免疫）,细胞免疫,免疫与变态反应平行,4、结核菌素试验 （OT Test）,方法： 肤皮下、皮内 注射结核菌素,定义：应用结核菌素进行皮肤试验来测定机 体对结核分枝杆菌是否有迟发型超敏 反应的一种试验,结果：72小时：有反应 阳性 有免疫力 无反应 阴性 无免疫力,应用,：1、选择预防接种对象及接种后效果观察 2、婴儿作为TB感染的辅助诊断 3、肿瘤病人的细胞免疫测定 4、流行病学调查,标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理） 直接镜检：抗酸染色、金胺染色 分离培养：培养基、时间（24周后见结果） 动物试验：豚鼠等 快速诊断：PCR等 药敏试验：,三、微生物学检查,痰液等,四、防治原则,抗痨药，防止耐药性的产生，做到： 早期、连用、适量、规律、全程,卫生宣传、提高机体抵抗力 （营养好，发病少，社会病）,积极发现治疗痰液中细菌阳结核病人 儿童接种BCG,WHO确立的全球结核病控制策略 我国全国结核病防治规划(20012010年),特异性 预 防,一般性 预 防,治疗 原则,结核防 治策略,革兰阴性双球菌,肾形或豆形,无鞭毛，无芽胞，多数有菌毛及荚膜,一、生物学性状,形态染色,脑膜炎奈瑟菌 N.meningitidis,引起流行性脑膜炎（流脑）的病原菌,培养特性,营养要求较高，用巧克力（色）培养基,抗原分群,抵抗力,初次分离需CO2，,根据荚膜多糖抗原分13个群，我国多见流行A群,弱，特别对外界环境、干燥、寒冷、热敏感,室温2-3 小时死亡故采标本应注意保温,二、致病性与免疫性,致病物质荚膜、 菌毛、 脂寡糖（类似内毒素）等,免疫性,致病过程,经呼吸道传播，主要引起脑膜炎,致病三步曲 咽喉部感染 败血症 脑膜炎,可产生相应的抗体，有一定作用， 小儿免疫力低，血脑屏障不全，发病率高,三、微生物学检查,标本,不同病程不同标本（注意保温） 病 人：脑脊液、血液、出血点渗出液 带菌者：鼻咽拭,分离培养与鉴定,直接涂片镜检,如见中性粒细胞内、外有革兰阴性 双球菌，可作出初步诊断。,出血瘀斑阳性率在80%左右,巧克力色培养基,快速诊断：对流免疫电泳、协同凝集试验等,四、防治原则,流行期间带菌者口服磺胺药物等预防。,抗菌素，注意血脑屏障,防,治,呼吸道疾病预防措施、病人隔离,特异性预防：荚膜多糖疫苗,肺炎支原体 M.Pneumoniae,支原体 是一类缺乏细胞壁，能够在人工培养基上生长的最小的原核细胞型微生物广泛分布在自然界和人、动物体中。 肺炎支原体 常见对人致病的支原体之一，主要引起原发性非典型性肺炎。,形态： 0.20.3m大小，无细胞壁，呈球形或丝状 培养： 繁殖以二分裂为主，也有出芽，分枝等方式 营养要求高，生长慢固体培养基上形成“油 煎蛋”菌落 低抗力： 因无细胞壁，对消毒剂抵抗力比细菌差， 但对结晶紫（甲紫）、醋酸鉈抵抗 抗菌素有效，但青霉素及头孢类抗生素耐药,生物学特性,飞沫传播，引起原发性非典型性肺炎 其特点为症状较轻，仅有发热、咳嗽等， 与细菌性肺炎不同，起病缓慢，病程长，预后好 少数严重者可并发支气管肺炎，症状较重。,致病性与免疫性,感染后机体可产生特异性免疫力 包括：呼吸道黏膜产生分泌型IgA 细胞免疫有助清除体内支原体,诊断方法主要包括： 分离培养： 病人痰液或咽拭接种支原体培养基 血清学检查： 用已知抗体检测痰液等中抗原,治疗： 主要用抗菌素,