（浙江专版）2019版高考生物一轮复习第29讲微生物的利用、浅尝现代生物技术教案.docx

微生物的利用、浅尝现代生物技术章知识内容考试属性及要求考查频率加试微生物的利用1.大肠杆菌的培养和分离2.分离以尿素为氮源的微生物实验与探究能力(1)能独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验(活动)，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用。(2)具备验证简单生物学事实的能力，能设计实验，提出或完善实验思路，能对实验现象和结果进行处理、分析和解释。(3)具有对一些生物学问题进行初步探究的能力，能提出问题、做出假设和预期、确认变量、设计实验方案、处理和解释数据、做出合理的判断，能对一些简单的实验方案做出恰当的评价和修订。2015年10月第32题(1)(3分) 2016年10月第32题(一)(7分) 2017年4月第32题(一)(1)(2分) 酶的应用3.果汁中的果胶和果胶酶4.淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测2016年4月第32题(一)(7分)2016年10月第32题(一)(4)(1分)生物技术在食品加工中的应用5.果酒及果醋的制作6.泡菜的腌制和亚硝酸的测定2017年4月第32题(一)(2)(3)(5分)浅尝现代生物技术7.植物的组织培养2015年10月第32题(3)(5)(3分)第29讲微生物的利用、浅尝现代生物技术考点一微生物的利用一、大肠杆菌的培养和分离1.大肠杆菌(1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。(2)细菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。2.细菌的扩大培养扩大培养用LB液体培养基。3.分离划线分离用LB固体平面培养基。培养基灭菌倒平板接种划线分离培养观察菌种保存50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12 h用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿培养皿倒置(盖在下面)，放在37 恒温培养箱中培养1224 h，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，37 培养24 h后，置于4_冰箱中保存4.消毒和灭菌比较条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物紫外线消毒法接种室、超净台化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌过滤除菌不能加热灭菌的化合物，要用G6玻璃砂漏斗过滤二、分离以尿素为氮源的微生物1.菌种特点含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2.培养基用以尿素为唯一氮源的培养基培养，以LB全营养培养基为对照。3.实验原理(1)筛选以尿素为氮源的微生物，可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。4.实验步骤制备培养基：将已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基分别倒入两个培养皿中，摇匀，平放至凝固制备细菌悬液：用1 g土样和无菌水配制不同浓度的细菌悬液用涂布分离法分离细菌：将不同浓度的土壤稀释液分别加入到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，每个浓度分别各接种到三个培养皿中，并用玻璃刮刀涂布到整个平面上培养：将培养皿倒置，在37 恒温箱中培养2448 h观察：培养基中菌落数量5.反应的鉴定在配制培养基时，加入指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解产生碱性的氨，使培养基上菌落周围出现红色的环带。6.微生物接种的两种常用方法比较比较划线分离法涂布分离法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液用无菌水进行梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别用涂布器涂布到固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，但操作复杂些目的使培养基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体菌落1.(201510月浙江选考节选)科研人员拟将已知的花色基因(目的基因)转入矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答：用_的玻璃刮刀将稀释后的大肠杆菌液_接种到含有抗生素的固体培养基上，经培养形成_，再进行鉴定和扩大培养。解析在细菌涂布分离时，采用灭菌的玻璃刮刀将稀释后的菌液均匀涂布在固体培养基上，经培养形成单菌落，再进行鉴定和扩大培养。答案灭菌涂布菌落2.(201610月浙江选考节选)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：(1)LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加_，灭菌备用。(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用_灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗_，故用于过滤除菌。然后将尿素溶液加到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。(3)取适量含产脲酶细菌的104、105两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48 h，推测固体培养基上生长的菌落数量最少的是_。A.105稀释液尿素固体培养基B.105稀释液LB固体培养基C.104稀释液尿素固体培养基D.104稀释液LB固体培养基在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现_，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生_所致。解析(1)本实验中的LB培养基是要与尿素培养基作对比的，所以要用琼脂糖替换琼脂。(2)尿素培养基的灭菌要分开进行，除尿素外的其他成分仍用高压蒸汽灭菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤除菌，再将除菌的尿素加到已灭菌的其他成分中。G6玻璃砂漏斗由于孔径小，细菌不能滤过，可用于过滤除菌，但需要在使用前进行高压蒸汽灭菌。(3)由于在土壤中产脲酶的细菌远小于普通细菌，所以在尿素培养基上的菌落数相对少得多，另外稀释倍数高的土壤稀释液中细菌数量少，在培养基上菌落数也相对少。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现红色环带，这是因为脲酶催化尿素分解产生氨，使培养基呈碱性，酚红指示剂在碱性下呈红色。答案(1)琼脂糖(2)高压蒸汽孔径小，细菌不能滤过(3)A红色环带氨(或NH3)3.(20174月浙江选考节选)回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用_蘸取少量的稀释液，在MRS乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分离操作，正确的是_。解析从酸奶中分离乳酸菌时，可采用划线分离，方法是用接种环蘸取少量的稀释液，在MRS乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。图示的划线分离中B图方法是正确的，A图不分区划线，但划线太稀疏了，分离效果很差，B、C、D都采用了分区划线，但C、D都没有注意除第一区外，之后每区划线的第一条线都需要从上一区划线的末端开始。答案接种环B本题组对应选修一P19P28，微生物的利用1.大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，是基因工程技术中被广泛采用的工具。2.培养基是指微生物生存的环境和营养物质，一般都含有五大营养要素：即：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子。一般来讲，“细菌喜荤、霉菌喜素”，大肠杆菌一般采用LB培养基，其主要成分为蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水等，若要扩大培养，则采用LB液体培养基，若要分离获得纯种，则采用LB固体培养基，这两者的主要区别在于后者加入了琼脂。霉菌培养基一般用无机物配制成或添加蔗糖的豆芽汁。3.单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。常用的分离方式有划线分离法、涂布分离法两种。它们都采用固体平面培养基。其中涂布分离法单菌落更易分开，并且可用来计数菌体数目，但操作复杂些，且往往要先将培养的菌液稀释；而划线分离操作简单，但不能用于计数。4.菌种保存往往选用固体斜面培养基，于4_冰箱中保存。用灼烧后的接种环从斜面取菌种时，往往要先使接种环接触培养基以达到冷却的目的，然后再取菌体。5.接种完成后应将培养皿倒置培养，目的是：防止水蒸气凝结成的水滴落入培养基表面冲散菌落，影响单菌落的形成和分离。6.灭菌操作：培养基、培养皿、试管、三角瓶、枪头、接种环、镊子等用具通常用高压蒸汽灭菌，这些用具通常需要用牛皮纸或报纸包好，其中容器先要用棉塞或封口膜封口再包好，放入灭菌锅中，在121 (1_kg/cm2压力)下灭菌15 min。实验用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500 g/cm2压力(90 以上)灭菌30 min。由于尿素加热会分解，只能用G6玻璃砂漏斗过滤除菌，但玻璃砂漏斗使用前也要在121 下用纸包好灭菌，用后还需用1 mol/L的HCl浸泡，并抽滤去酸，再用蒸馏水洗至洗出液呈中性，干燥后保存。将培养基转移到三角瓶和试管中时必须用三角漏斗，以免培养基沾到三角瓶口和试管口，发生污染。7.无菌操作通常在超净台中进行，超净台使用前30 min，打开紫外灯和过滤风，注意打开紫外灯后人必须离开，使用时必须关闭紫外灯。角度微生物的利用1.(2017嘉兴期末节选)下列有关大肠杆菌的培养实验，请回答：(1)配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和_作为营养物质，为维持一定的渗透压，常需加入一定量的_。(2)大肠杆菌培养和分离的实验中，在_中进行扩大培养，培养液经_后，在LB固体培养基上进行_，并将培养皿_放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果。为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及_，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。(3)通常对获得的纯菌种可以依据_的形状、大小等特征进行初步的鉴定。(4)关于“大肠杆菌培养和分离”的操作中，下列叙述正确的是_。A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C.为了防止污染，接种工具经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析(1)配制培养细菌的培养基通常用LB培养基，其成分有蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水等，固体培养基还有琼脂。其中蛋白胨、酵母提取物提供营养，NaCl提供无机盐并调节渗透压，琼脂是凝固剂。(2)细菌培养通常用LB液体培养基进行扩大培养和生产，用固体培养基进行分离、鉴定、保存菌种。菌种分离有划线法和涂布法，进行涂布分离时，选稀释菌液，再进行涂布，完成后将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养，可获得分布均匀的单菌落。为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及培养基灭菌是否彻底，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。(3)菌落的形状、大小等特征可以作为鉴定的依据。(4)高压灭菌加热结束后，自然冷却待压力表指针回到零后，开启锅盖，A错误；倒平板时，应将打开上盖的一边，将培养基倒入培养皿，再盖上培养皿上盖，将培养皿置于水平位置，轻轻晃动，使培养基铺满底部，待其凝固，B错误；接种时接种工具经灼烧灭菌后，需先接触培养基使其冷却后，再挑取菌落，C错误；由于培养皿是倒置放在恒温培养箱中培养的，所以用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。答案(1)酵母提取物NaCl(2)LB液体培养基稀释涂布分离倒置培养基灭菌是否彻底(3)菌落(4)D2.(2017金丽衢十二校节选)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图1所示)(1)图1中，为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以_作为唯一碳源。过程需重复几次，目的是_。(2)某同学尝试过程的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图2所示。该同学的接种方法是_；推测该同学接种时可能的操作失误是_。(3)上述工程酵母菌培养过程中，有关操作正确的是_。A.玻璃刮刀用火焰灼烧进行灭菌B.培养基分装到培养皿后进行灭菌C.倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行D.获得的菌种如果需要保存，可置于37 恒温保存解析(1)为筛选得到高效利用淀粉的工程酵母菌菌种，固体培养基应以淀粉作为唯一碳源。多次重复筛选是为获得高效利用淀粉的工程酵母菌的纯化菌种。(2)由图2的结果表明，该同学采用的是涂布分离法，其操作的失误是涂布不均匀，造成平板上菌落未均匀分布。(3)涂布操作用的玻璃刮刀通常保存在70%酒精中，使用前引燃酒精，火焰熄灭后待其冷却后使用；培养基通常先灭菌，后趁热倒平板；保存菌种通常使用斜面培养基，在4 冰箱中保存；倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行，这是无菌操作要求。答案(1)淀粉筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(2)涂布分离法涂布不均匀(3)C1.培养基的种类划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产、扩大培养半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类、鉴定固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物2.培养基营养要素基本营养要素：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。营养要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物构成细胞中的物质和一些代谢产物；既是碳源又是能源有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等将无机氮合成含氮的代谢产物有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基酶和核酸的组成成分；参与代谢过程中的酶促反应考点二浅尝现代生物技术1.植物组织培养的原理(1)理论基础：植物细胞具有全能性。(2)植物组织培养的基本过程(3)植物组织培养影响因素选材：不同植物组织或同一植物组织的不同部分，培养的难易程度差别很大，菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。培养基：植物组织培养需要适宜的培养基，常用的是MS培养基，在配制好的培养基中，常常需要添加生长素和细胞分裂素两种植物激素。实验中使用的生长素类似物是萘乙酸(NAA)，细胞分裂素类似物是苄基腺嘌呤(BA)。其他条件：pH、温度和光照等条件对植物组织培养也很重要。2.菊花组织培养过程制备MS固体培养基：配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌外植体消毒：自然生长的茎离体用70%的乙醇浸泡10 min再用5%的次氯酸钠浸泡5 min再用另一5%的次氯酸钠浸泡5 min最后用无菌水清洗接种：始终在酒精灯火焰旁进行，对接种工具要用灼烧灭菌生芽培养：培养基：发芽培养基(MSBANAA)；培养条件：温度为1825 ；光照14.5 h/d；pH为5.86.0；培养标准：健壮的丛状苗生根培养：培养基：生根培养基(MSNAA)；培养条件与发芽培养相同炼苗：培养基：草炭土或蛭石；培养条件：23 d内湿度控制为80%；23 d后逐渐降低湿度至自然湿度移栽(定植)(201510月浙江选考节选)科研人员拟将已知的花色基因(目的基因)转入矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答：(1)取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70%_浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用_清洗，作为转基因的受体材料。(2)取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的_等条件下进行炼苗。解析(1)用作组培的外植体若取自自然环境则需要消毒，方法是外植体经自来水冲洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗，才能用于接种。(2)组培时，试管苗需经炼苗才能定植，炼苗时需将试管苗从培养瓶中取出，移栽至具适宜的光照、温度和较低湿度的环境中。答案(1)酒精无菌水(2)湿度本题组对应选修一P59P61，植物的组织培养1.组织培养就是取一部分植物组织，如根、茎、花瓣、叶或花粉等，在无菌的条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的光照和温度，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。组织培养必须在培养基中加入生长素和细胞分裂素。两者的摩尔浓度比决定组织是生根还是生芽。当细胞分裂素与生长素的比例高时，诱导芽的生成，两者比例大致相等时，愈伤组织继续生长而不分化；当细胞分裂素与生长素的比例较低时，会趋于生根。2.本实验首先用细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的发芽培养基进行培养，获得丛状苗；然后将丛状苗分株培养。分株后，再移入含较多生长素的生根培养基中，使其生根；将生根的苗从三角瓶中移至草炭土或蛭石中继续生长；苗健壮后再移至土中。角度植物组织培养1.某愈伤组织在如下图甲所示的培养基中培养一段时间后得到如图乙所示的结构，经分析可知该培养基中()A.细胞分裂素多，生长素少B.细胞分裂素少，生长素多C.细胞分裂素和生长素用量相等D.只有生长素解析从图乙中可以看出该培养基有利于生根且抑制芽的形成，所以可推断该培养基中生长素多，细胞分裂素少，B正确。答案B2.(2016温州选考模拟节选)卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素还对葡萄细胞有抑制作用。研究人员将Barnase基因(雄性不育基因)转入葡萄细胞，利用卡那霉素和头孢霉素，通过植物克隆方法成功培育出大粒、无核的葡萄新品种。请回答：(1)构建含Barnase基因、葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒，导入农杆菌，在固体培养基中培养形成_以便鉴定是否混有杂菌，再用_将农杆菌转移至LB_培养基中进行扩大培养。(2)将经过_的幼嫩葡萄叶片切成小块，浸入农杆菌悬浮液中，4分钟后取出(此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上)并接种到固体培养基中。培养至第3天时，可以看到在叶片小块周围出现_和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是_(A.抑制葡萄细胞脱分化B.促进葡萄细胞再分化C.杀灭农杆菌D.促进农杆菌生长)。(3)将叶片切成小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后，转移至生芽培养基中，待其长出_后，再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着_作用，植物克隆的技术基础是_。(4)在卡那霉素培养基中，由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用，获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗，因此还需对试管苗的_基因的表达产物进行生化检测，才能鉴别出真正的转基因试管苗。(5)最后，对转基因试管苗还需进行逐渐_湿度的锻炼，使之适应自然环境。解析(1)构建含Barnase基因、葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒，导入农杆菌，在固体培养基中培养形成单菌落以便鉴定是否混有杂菌，再用接种环将农杆菌转移至LB液体培养基中进行扩大培养。(2)将经过消毒的幼嫩葡萄叶片切成小块，浸入农杆菌悬浮液中，然后取出并接种到固体培养基中。培养至第3天时，可以看到在叶片小块周围出现愈伤组织和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是杀灭农杆菌，从而获得处理的葡萄叶片细胞。(3)将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养获得导入目的基因的葡萄叶片细胞，转移至生芽培养基中，待其长出丛状苗后，再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着筛选导入目的基因的葡萄叶片细胞作用，植物克隆的技术基础是植物组织培养。(5)最后，对转基因试管苗还需进行逐渐降低湿度的锻炼，使之适应自然环境。答案(1)单菌落接种环液体(2)消毒愈伤组织C(3)丛状苗筛选植物组织培养(4)葡糖苷酸酶(5)降低生长素和细胞分裂素用量比例与根、芽的分化生长素和细胞分裂素比值结果比值高时促进根的分化，抑制芽的形成比值低时促进芽的分化，抑制根的形成比值适中促进愈伤组织的生长(时间：40分钟分数：100分)1.检验饮用水的细菌含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问题：(1)要测定饮用水中大肠杆菌的数量，常采用_法，通常将水样进行一系列的梯度_，然后将上述的水样用涂布器分别涂布到_的表面进行培养，记录菌落数量。用该方法统计样本菌落数时_(填“是”或“否”)需要对照组。原因：_。(2)下面所示的四种菌落分布图中，不可能由上述方法得到的是_。(3)大肠杆菌的培养条件是无菌，培养基配制时需加入氯化钠，以维持_。配制培养基时先_(填“调节pH”或“灭菌”)后_(填“调节pH”或“灭菌”)。解析对细菌计数时通常用涂布法接种到LB固体培养基上，必要时要先对菌液稀释再接种。因为需要判断培养基使用之前是否被杂菌污染，所以需要空白对照组。D培养基的培养结果说明是划线法接种的。培养基配制时，添加氯化钠除提供无机盐外还能调节渗透压，配制培养基时通常先调节pH后灭菌。答案(1)涂布分离稀释LB固体培养基是因为需要判断培养基使用之前是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)(2)D(3)渗透压调节pH灭菌2.(20173月稽阳联考节选)回答下列小题：炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病。对炭疽病疑似患者，可通过下图所示鉴定炭疽杆菌的实验进行确诊，其中实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌。(1)若要从炭疽病疑似患者体内分离出炭疽杆菌，可将患者皮肤脓胞渗出物稀释后滴于培养基表面，用无菌玻璃刮刀涂匀，该接种方法称为_。(2)制备图中的液体培养基时需采取_法灭菌。接种可疑菌后，需将三角瓶置于35 下的摇床上_培养24小时，可疑菌会大量繁殖，液体培养基变浑浊。(3)图中，对照组与实验组试管同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组_(填“高”或“低”)，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。此判断的依据是_。解析(1)将细菌培养液滴于培养基表面，用无菌玻璃刮刀涂匀，这种接种方法称为涂布分离法。(2)培养基一般采取高压蒸汽灭菌法灭菌。液体培养基扩大培养时，需将三角瓶置于35 下的摇床上振荡培养24小时，细菌大量繁殖，导致液体培养基变浑浊。(3)实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，炭疽杆菌大量死亡，使培养基浑浊度降低。答案(1)涂布分离法(2)高压蒸汽灭菌振荡(3)低噬菌体侵染炭疽杆菌，炭疽杆菌数量下降3.(20173月宁波模拟节选)回答下列小题：下表是用于从土壤中分离纯化细菌的培养基配方。材料牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水用量5 g10 g5 g20 g1 000 mL请回答：(1)培养基的类型很多，按照“细菌喜_，霉菌喜_”的原则配制上述培养基后，一般还要调节pH并对培养基进行_处理。(2)分离纯化微生物最常使用的划线分离法中，接种环在菌液中蘸菌液_(A.一B.二C.三D.四)次；若用涂布分离法，则制备细菌悬液时，一般需进行_处理，为确保操作过程不被杂菌污染，接种必须在_附近操作。(3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？(列举一项)_。解析(1)根据微生物的营养需求，培养基配制原则是“细菌喜荤，霉菌喜素”，培养基配制完成后，一般还要调节pH并对培养基进行灭菌处理。(2)在划线分离法中，接种环在菌液中蘸菌液一次。在涂布分离法中，则制备细菌悬液时，一般需进行稀释处理，为确保操作过程不被杂菌污染，接种必须在酒精灯火焰附近操作。(3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是：稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程灭菌不严格，受到微生物的污染。答案(1)荤素灭菌(2)A稀释酒精灯火焰(3)稀释倍数不够，菌液的浓度太高(或划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；或培养过程灭菌不严格，受到微生物的污染。)4.(201610月稽阳联考节选)回答下列小题：为了增强发酵效果，提高秸秆的营养价值，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究。请回答有关的问题：(1)纤维素是植物多糖，它在植物细胞中的作用是_(A.能源物质B.贮能物质C.结构组成成分D.将不同的细胞粘连在一起)。该菌株在生态系统中能促进_循环。(2)用_培养基来扩大培养纤维素酶高产菌株，在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用_，以防止培养基沾到三角瓶壁或试管壁上。为了测定纤维素酶高产菌株的数量可以用_法在培养基上进行测定。(3)刚果红与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有透明圈的菌落。透明圈的大小与纤维素酶的_有关。解析(1)纤维素是植物细胞壁的主要成分，是植物细胞结构组成成分。由于纤维素很少能被生物利用，而该菌株能利用纤维素，所以能促进碳循环。(2)通常用液体培养基对菌种进行扩大培养。在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用三角漏斗，以防止培养基沾到三角瓶壁或试管壁上。为了测定菌株的数量可以用(稀释)涂布分离法在培养基上进行测定。(3)由于刚果红不与纤维素降解产物发生反应，所以菌落透明圈的大小与纤维素酶的数量、活性有关。答案(1)C碳(物质)(2)液体三角漏斗涂布分离(3)数量、活性5.(2017衢丽湖舟四地模拟节选)请回答黄花蒿植物组织培养的有关问题：(1)黄花蒿的植物组织培养研究在我国已有数年历史。选取黄花蒿的茎段后，通常用体积分数为70%的酒精等药品对茎段进行_，然后再放入_溶液中浸泡，最后用无菌水冲洗。若外植体不慎被细菌感染，采用划线分离法纯化细菌，在4个区域内划线需要将接种环灼烧灭菌_次。(2)植物组织培养的培养基可采用_灭菌。形成愈伤组织的过程中，除需无菌、营养和激素外，_等外界条件也很重要。(3)23周后将生长健壮的丛状苗在_(A.LB培养基适宜浓度BAB.LB培养基适宜浓度NAAC.MS培养基适宜浓度BAD.MS培养基适宜浓度NAA)上继续生根，形成完整植株。定植前，还需逐渐_进行炼苗。解析(1)植物组织培养时，需对外植体消毒，方法是先后用70%的酒精和5%次氯酸钠溶液浸泡，再用无菌水冲洗。采用划线分离法纯化细菌，在4个区域内划线需要将接种环灼烧灭菌5次，在每区划线前都需要灼烧接种环，而最后划线完成后还要灼烧接种环，才能结束分离操作。(2)植物组织培养的培养基可采用高压蒸汽灭菌法灭菌。在形成愈伤组织的过程中，除需无菌、营养和激素外，光照、温度等外界条件也很重要。(3)健壮的丛状苗需在生根培养基上继续生根培养，形成完整植株。生根培养基成分为MS培养基适宜浓度NAA，BA可以不加，D正确。定植前，还需逐渐降低湿度进行炼苗。答案(1)消毒5%次氯酸钠5(2)高压蒸汽灭菌法光照、温度(任写一个也可)(3)D降低湿度6.(2017绿色联盟适应性考试节选)已知某细菌的两种突变类型细菌和细菌的营养条件和菌落特征都相同，但细菌能分解有机物A而不能分解有机物B，细菌能分解有机物B而不能分解有机物A。现有这两种类型细菌的混合液样品，要将其分离，有人设计了一种方案，部分操作步骤如下图。(1)步骤一使用的是_培养基，其中含有细菌生长所需的水、无机盐、碳源和氮源等营养物质，此外还必须加_，以利于对不同菌种进行分离操作。(2)步骤一采用_方法接种，此接种法可使接种细菌逐渐稀释，经适宜条件培养，可形成单个、独立的_，最终可能得到纯种的细菌；要进行上述接种操作，必须在_及酒精灯火焰附近进行，以避免杂菌污染。(3)步骤三中，若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，当培养液中检测出如下的实验结果，其中能说明培养液只有细菌的是_。A.化合物A与B含量都明显下降B.化合物A含量明显下降，B含量基本不变C.化合物A含量基本不变，B含量明显下降D.化合物A、B含量都基本不变解析(1)从图中不难知道步骤一是为了分离菌种，分离细菌通常采用固体培养基，需要向培养基中添加凝固剂(琼脂)。(2)从图中“蛇形线”描述中可知步骤一采用的是划线分离法，通过划线可以获得单个菌落，从而纯化菌种。(3)由于已知细菌能分解有机物A而不能分解有机物B，所以当培养液中化合物A含量明显下降，B含量基本不变时，可以确定培养液只有细菌没有细菌，B正确。答案(1)LB固体琼脂(2)划线(单)菌落超净台(3)B7.(2017名校联盟第三次联考节选)请回答野生酵母的培养和分离及果酒制作实验的有关问题：(1)从葡萄多年生长的环境中获取少量土样，配制成土壤稀释液，然后取0.1 mL稀释液加入到_培养基中，用_(工具)进行_分离，最后培养得到野生酵母菌。将分离获得的菌种进行诱变培养后，根据不同菌株的_特征，分别筛选出高产谷胱甘肽酵母菌(甲)和低产硫化氢的酵母菌(乙)。实验结束后，使用过的培养基应进行灭菌处理才能倒掉，目的是_。(2)成熟的紫葡萄，常用_(A.高锰酸钾B.次氯酸钠C.乙醇D.无菌水)溶液浸泡约5 min，然后制成匀浆放入发酵罐中，并接种相应菌株，发酵获得高品质的葡萄酒。若向发酵罐中加入一定量的_，可获得酒精含量和糖含量较高的果酒。解析(1)在进行涂布分离微生物时，需要将稀释的样液0.1 mL加到固体培养基上，再用玻璃刮刀均匀涂布，然后进行培养。菌种进行诱变培养后，可根据不同菌株的菌落特征筛选出目的菌株。微生物实验结束后，要对使用过的培养基应进行灭菌处理才能倒掉，这是因为培养基中残留的微生物可能污染环境。(2)酿制葡萄酒时，需要用高锰酸钾溶液浸泡约5 min，起到消毒的作用；若向发酵罐中加入一定量的蔗糖，可获得酒精含量和糖含量较高的果酒。答案(1)固体玻璃刮刀涂布菌落防止造成环境污染(2)A蔗糖8.(20167月杭州期末节选)科研人员拟用组织培养繁殖一种粮食作物，其基本过程为“取材消毒愈伤组织培养出芽生根移栽”。请回答：(1)用于植物组织培养的离体材料都需要消毒，通常消毒所用的药剂是_。植物组织培养实验中无需使用的设备及用品是_(A.封口膜B.灭菌锅C.酒精灯D.玻璃刮刀)。(2)植物组织培养过程中，发现培养基上长有多种细菌，若要从中分离出某种细菌，可用接种环挑取