板蓝根注射液中对乙酰氨基酚、安乃近检查方法　高效液相色谱法（定稿）

ICS11.220B 42DB37山东省地方标准DB 37/T XXXXXXXXX板蓝根注射液中对乙酰氨基酚、安乃近检查方法高效液相色谱法Determination of acetamionphen, novalgin in banlangen injection additiveshigh performance liquid chromatography - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施山东省市场监督管理局发布DB37/ XXXXXXXXX目次前言II1范围12规范性引用文件13原理14试剂或材料15仪器设备16试验步骤26.1样品制备26.2高效液相色谱参考条件26.3定性测定27结果判定2附录A（资料性附录）对照品色谱图和光谱图3前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省市场监督管理局提出并监督实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省兽药质量检验所。本标准主要起草人：张传津、魏秀丽、李有志、张志民、赵有轩、章安源、尹伶灵。3板蓝根注射液中对乙酰氨基酚、安乃近检查方法高效液相色谱法1 范围本标准规定了板蓝根注射液中对乙酰氨基酚与安乃近的检查方法。本标准适用于板蓝根注射液中对乙酰氨基酚与安乃近的检查。本方法定性检出限为对乙酰氨基酚25 mg/mL，安乃近50 mg/mL。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3 原理板蓝根注射液中的对乙酰氨基酚与安乃近经甲醇提取，液相色谱分离，按照保留时间和紫外光谱对照定性。4 试剂或材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯；水符合GB/T 6682一级水的规定。4.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.2 磷酸二氢钠（NaH2PO4）：分析纯。4.3 三乙胺：分析纯。4.4 针头过滤器：孔径为0.45 m有机系滤膜。4.5 磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钠（4.2）6.0 g，加水1 000 mL，加三乙胺1 mL，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0，过0.45 m水系微孔滤膜备用。4.6 流动相：量取磷酸盐缓冲液（4.5）700 mL与甲醇（4.1）300 mL，混匀，备用。4.7 对乙酰氨基酚、安乃近对照品：纯度不得少于99.0 %。4.8 对乙酰氨基酚、安乃近对照品储备液：称取对乙酰氨基酚10 mg、安乃近对照品20 mg（准确至0.01 mg），置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释制成含0.2 mg/mL对乙酰氨基酚、0.4 mg/mL安乃近的溶液。-20 冰箱储存一个月。4.9 对乙酰氨基酚、安乃近对照工作液：精密量取对乙酰氨基酚、安乃近对照品储备液（4.8）适量，加甲醇溶解并稀释制成含25 g/mL对乙酰氨基酚、50 g/mL安乃近作为对照品工作溶液。4 冰箱储存一周。5 仪器设备5.1 高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器）。5.2 分析天平：感量0.000 01 g，0.01 g。6 试验步骤6.1 样品制备供试品溶液制备：精密量取供试品0.1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理5分钟后，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。6.2 高效液相色谱参考条件色谱柱：C18用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；250 mm4.6 mm，粒径5 m，或相当者。流动相：磷酸盐缓冲液（4.5）-甲醇（70+30）。流速：1 mL/min。进样量：10 L。柱温：35 。二极管阵列检测器采集波长：190 nm400 nm，分辨率为1.2 nm。记录244 nm波长处的色谱图。6.3 定性测定取供试品溶液和对照品溶液各10 L注入液相色谱仪，同时记录色谱图与光谱图。通过与对照品液相色谱图保留时间、光谱图的对比，确定供试品中是否含有对乙酰氨基酚、安乃近。对照品溶液出峰时间顺序依次为对乙酰氨基酚、安乃近。7 结果判定供试品溶液谱图中如出现与对照品溶液色谱图中保留时间一致的色谱峰（差异小于等于5 %）且为单一物质峰；在规定的采集波长范围内，两者光谱图无明显差异；最大吸收波长一致（差异小于等于2 nm），峰面积大于检出限峰面积，判定为检出对乙酰氨基酚或安乃近。AA附录A （