青岛大学优秀教案.ppt

第四章,灭菌法,青岛科技大学优秀课程教案,1.各种湿热灭菌法及其安全操作； 2.F0的意义,本章重点：,本章要求：,1.掌握湿热灭菌法及其安全操作； 2.掌握无菌操作要点； 3.熟悉干热灭菌、紫外灭菌、过滤灭菌以及化学灭菌法； 4.了解辐射灭菌及微波灭菌。,第四章 灭菌法,第四章 灭菌法,第四章 灭菌法,目录：,第一节 F与Fo值在灭菌中的意义与应用,第二节 物理灭菌法,第三节 化学灭菌法,第四节 无菌操作法,第一节 F与Fo值在灭菌中的意义与应用,灭菌法指杀死或除去所有微生物的方法。,第四章 灭菌法,微生物,细菌 真菌 病毒 芽胞,细菌的芽胞具有较强的抗热力，不易杀死，药剂中灭菌效果以杀死芽胞为标准。,对灭菌方法的可靠性进行验证用F(或F。)值作为验证灭菌可靠性的参数。,第四章 灭菌法,第四章 灭菌法,对灭菌过程和无菌检验中存在局限性的问题,灭菌温度测量多系灭菌器内的温度而不是灭菌物体内的温度,一、微生物致死时间曲线与D值,微生物死亡速度属一级过程，在一定温度下符合下述方程式：,lg Nt=lg N0-Kt/2.303,第四章 灭菌法,第四章 灭菌法,Nt=N0e-Kt,N0为原始的微生物数，Nt为t时残存的微生物数,D = t = 2.303/k (LogN-LogNt) =2.303/k Log100Logl0 = 2.303/K,第四章 灭菌法,第四章 灭菌法,D值：,在一定温度下杀死被灭菌物品中微生物数90所需的时间.,即：,因此，D也可定义为降低微生物一个 对数值所需的时间，如图所示。,不同灭菌方法不同微生物的D值,第四章 灭菌法,蒸汽灭菌 蒸汽灭菌 蒸汽灭菌 蒸汽灭菌 干热灭菌 红外线灭菌,灭菌方法,微生物,温度（）,介质或样品,D值（min）,嗜热脂肪芽胞杆菌 嗜热脂肪芽胞杆菌 嗜热脂肪芽胞杆菌 产芽胞梭状芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌,105 121 121 105 135 160,5%葡萄糖水溶液 5%葡萄糖水溶液 注射用水 5%葡萄糖水溶液 纸 玻璃板,87.8 2.4 3.0 1.3 16.6 18秒,二值,斜率K=logD2-logD1/(T2-T1) (T1 - T2) / logD2-logD1,第四章 灭菌法,z值：为降低一个LogD值所需的温度数。,LogD温度图,在一定温度范围内，LogD与T呈直线关系,即z值是降低微生物数90所需要的温度数。,下表是一些药物溶液的z值。,第四章 灭菌法,不用溶液以湿热芽胞杆菌测定的Z值,溶液,Z值,5%葡萄糖水溶液 注射用水 5%葡萄糖乳酸盐溶液 pH7磷酸缓冲液,10.3 8.4 11.3 7.6,三、F值与F0值,T0是参比温度(reference temperature) At是测量被灭菌物温度的时间间隔，一般为0.5-1.0min T 是每个At测量被灭菌物的温度.,第四章 灭菌法,1.F值：,1.F为在一定温度(T)，给定z值所产生的灭菌效力与参比温度(T0) 给定z值所产生的灭菌效果相同时所相当的时间(equivalent time)。,以分为单位，F值的数学表达式如下：,F=t10,(二)Fo值。,对于湿热灭菌，参比温度规定为12l，并假没特别耐湿热的微生物指示剂(嗜热脂肪芽胞杆菌)的z值为l0，则,第四章 灭菌法,F=t10（T121）/10,F。值为一定灭菌温度(T)z值为10所产生的灭菌效果与121z值10所产生的灭菌效力相同时所相当的时间(分)。,F0是将各种灭菌温度使微生物的致死 效力转换为灭菌物品完全暴露于121 使微生物的致死效力。,F。还可认为是以相当于12l 热力灭菌时杀死容器中全部微 生物所需要的时间,F。值的意义：,第四章 灭菌法,不受包装材料的影响,第二节 物理灭菌法,繁殖型细菌： 100以上 1h,第四章 灭菌法,一干热灭菌法,USB：输液瓶250,耐热性细菌芽胞：,大肠杆菌内毒素:,120不死亡，140前后则杀菌效率急剧增长,250时F值为750分， 210时F值为1950分。,缺点:穿透力死，温度不易均匀， 灭菌温度过高不适用于橡胶、 塑料及大部分药品,SDA？,GMH系列对开门干热灭菌烘箱,以电能为热源（干热），可长期在250温度下灭菌，为消除热源提供了可靠的保证。 工作温度由程序设计或（根据要求）采用PLC电脑控制，对内部温度可自动记录。 出风口装有高效空气过滤器，防止了外界对内部的污染。 内部装有高温高效过滤器，内部循环热风经高温高效空气过滤器过滤，保证了进入有效空间的热风达到100级洁净要求。,二湿热灭菌法,（一） 热压灭菌法 （二）流通蒸气灭菌和煮沸灭菌法 (三)低温间歇灭菌法 (四)影响湿热灭菌的因素 1微生物的种类和数量 2注射液的性质 3药物的稳定性,第四章 灭菌法,CG系列纯蒸汽灭菌柜,第四章 灭菌法,KJG系列快速冷却灭菌柜,SYG系列水浴式灭菌柜,AJG系列安瓿检漏灭菌柜,三、紫外线灭菌法 特点：表面,第四章 灭菌法,四过滤除菌法 微孔薄膜作灭菌滤器，孔径0.22um滤膜。 材料：聚四氟乙烯,五、辐射灭菌法 射线杀菌。射线由放射性同位素C060产生。,射线适用于较厚样品的灭菌，维生素类、抗菌素、 激素、肝素、羊肠线、医疗器械等物质的灭菌。,六、微波灭菌法、高速热风灭菌法,第三节 化学灭菌法,一、气体灭菌法 1.环氧乙烷(Ethylene 0xide),第四章 灭菌法,性质：室温下无色，沸点10.8， 沸点以下为无色透明液体， 1ml水中可溶195ml(20 ，760mmHg) 环氧乙烷，有较强的扩散和穿透能力，作用快。,环氧乙烷灭菌箱,1灭菌机理,环氧乙烷属烷化剂,第四章 灭菌法,CH2-CH2 + R-SH,R-S-(CH2CH2OH),O,细菌蛋白质分子 酶 核酸,氨基 羟基 羧基 巯基,与环氧乙烷结合,2.应用范围,第四章 灭菌法,热敏感的固体药物,塑料容器、 塑料管道、 聚乙烯、 聚氯乙烯薄膜包装的药物；,纸、橡胶制品、注射器、衣服、敷料、皮革制品,对细菌(包括结核杆菌)芽胞、 真菌、立克次氏体和病毒等 各种微生物均有杀灭作用， 属于广谱杀菌剂。,3环氧乙烷灭菌应用注意事项,第四章 灭菌法,(2)环氧乙烷对塑料、橡胶纸板穿透力强，亲和力也强， 故灭菌完毕后需通空气12-24小时驱除。,(1)环氧乙烷具可燃性，当与空气混合、空气含量达3.0(vv)时即可爆炸,方案,应用时需用CO2或卤代烃(氟利昂、溴烷等)稀释,环氧乙烷l0，加CO2 90; 环氧乙烷10-12，氟利昂88-90等,第四章 灭菌法,材料对环氧乙烷的吸收情况,材料 吸收的量,材料 吸收的量,PE（聚乙烯） 2 PVC(聚氯乙烯） 19.2 纸板 10.4,棉花 4.1 羊毛 4.1 丁腈橡胶 15.2,4影响环氧乙烷灭菌效果的因素,(1)浓度：,第四章 灭菌法,(2)温度：55。,850-900mg/L，灭菌时间3h， 浓度为450mg/L，灭菌时间5h。,(3) 压力:,5环氧乙烷灭茵的操作程序,HO-CH2-CH2-OH,第四章 灭菌法,灭菌器内密闭、抽空，通入混合气， 保持一定浓度、温度及相对湿度,灭菌结束后的残余环氧乙烷通入水内，使成乙二醇排放,CH2-CH2+H20,O,第四章 灭菌法,6毒性,表现为恶心、呕吐、意识模糊等症状，并损害皮肤及眼粘膜，可产生水泡或结膜炎。 应用时要注意灭菌成品作残余量检查。,第四章 灭菌法,环氧乙烷对中枢神经系统有麻醉作用， 与大剂量环氧乙烷接触可发生急性中毒,(二)甲醛(Formaldehyde),甲醛灭菌力强，使菌体蛋白质产生不可逆变性，为广谱杀菌剂，广泛用于无菌操作室的灭菌。 甲醛溶液加热熏蒸，每M3空间用40甲醛溶液30ml。 甲醛对粘膜有强烈的刺激性，灭菌后剩余的甲醛气体可排除。,第四章 灭菌法,(三)其它,丙二醇： 具有不挥发性和无引火性等特点，室内空气灭菌，杀菌力虽不及甲醛，但对人无害。 三甘醇： 无色粘稠浓体，沸点285，溶于水，使用方法与丙二醇同。对粘膜、眼部无刺激性，对金属制品、医疗器械均无影响。,第四章 灭菌法,二化学杀菌剂的应用(液体等）,0.1-0.2%新洁尔灭溶液， 2左右的酚或煤酚皂溶液， 75酒精等。,第四章 灭菌法,特点：不能杀死芽胞，仅对繁殖体有效。,用于物体表面 浓度不宜过高。,注意：,常用：,臭氧灭菌箱,第四节 无菌操作法,1967年WHO制订GMP对药品生产环境提出了要求； 七十年代开始空气洁净技术成为各国GMP中的内容之一。,第四章 灭菌法,一、空气洁净技术,创造洁净的空气环境(洁净空气室、洁净工作台)， 以保证产品纯度，提高成品率,二、空气洁净技术中常用的术语,洁净度：是指洁净空气环境中空气含尘量的多少的程度。,第四章 灭菌法,检径：是指尘粒由某种测定方法测出的长度尺寸， 不含有具体的几何形状，单位用微米（um)表示。,含尘浓度：含尘浓度是指单位体积空气中所含浮游尘粒的数量， 以粒/L或mg/m2表示。,全面净化和局部净化： 洁净区，控制区等。 (一)洁净室标准: 目前国际上对洁净室尚无统一的标准 。 (二)洁净室含尘浓度的测定 1尘埃粒子计数器测定法 能测出最小粒径为0.3um,第四章 灭菌法,2.滤膜显微镜计数法: 将空气中的尘埃收集在薄膜过滤器上，用光学显微镜计算出尘埃数。,第四章 灭菌法,131型：白底黑格膜和无网格膜，带3mm宽度粉红色的疏水边缘,特点：可直接观察到尘埃的形状、大小、 色泽等物理性质， 为极宝贵的资料，其它方法达不到。,缺点：取样计数过程复杂，时间长， 对洁净度要求高，操作人员须经过 专门训练。,硝酸纤维素网格滤膜,白底黑格膜(114型)、灰底白格膜(130型)、,各国洁净室标准 美国联邦标准（ USA Federal Standard ） 209E （ 1992 年） GGMP (1989)FRANCE AFNOR (1981) GERMANY VDI 2083 (1990) JAPAN,第四章 灭菌法,五、洁净室设计,分级：尘粒个数/体积： (美） 0.5um 5um 活微生物数/m3 l0万级 3.5万 个/ L l0万级 3500个/ L 20个/ L 500 l万级 350个/ L 2个/ L 100 100级 3.5个/ L 0 5 (一)生产工艺要求 生产车间根据工艺流程和生产要求进行合理分区，对每个“区域”要确定不同的控制级别，从而对土建工程的要求、管道、设备的布置、温度、湿度、照明、震动条件等再进行设计。,第四章 灭菌法,一般生产区(General)：无洁净室级别规定，原料、割瓶、成品检漏、灯检、参观走廊等。 控制区(Contro1)：l0万级 洁净区(Clean)：控制1万级，为一般无菌工作区 无菌区(Sterile)：控制100级。,第四章 灭菌法,要求：各个区域用颜色线条分开，工作服的颜色、质料也不同， 避免混杂。,(二)土建要求,郊