研究健儿强身膏对哮喘豚鼠肺组织病理的影响

1 / 5 研究健儿强身膏对哮喘豚鼠肺组织病理的影响 摘要： 目的：观察健儿强身膏对支气管哮喘豚鼠模型肺组织病理的影响。方法：采用卵蛋白（ OVA）致敏法制备豚鼠哮喘模型，将豚鼠随机分为 6 组，即空白对照组、模型组、阳性对照组、中药（高、中、低） 3 个剂量组，分别观察各组引喘潜伏期（ T）、支气管和肺组织的病理及超微结构变化。结果：健儿强身膏 3 个剂量组均能延长豚鼠哮喘诱发潜伏期，与模型组比较差异有统计学意义（ P 关键词： 哮喘；健儿强身膏；豚鼠；肺组织病理 哮喘是由多种细胞，如嗜酸性粒细胞（ EOS）、肥大细胞、T 淋巴细胞、 中性粒细胞及气道上皮细胞等和细胞组分共同参与的气道慢性炎症疾病，也是儿童期最常见的慢性疾病。目前，主要应用于临床的治疗药物是缓解症状和控制发作的药物。长时间使用具有一定的副作用。而中医药在治疗哮喘方面具有效果显著稳定、药效持续时间长、副作用小、善于预防和治本的优点 1。健儿强身膏是南通市中医院江苏省名中医鄂惠的效应方，在临床中能有效控制哮喘发作期症状，可使易感儿童呼吸道感染次数减少，哮喘的发病率下降。本实验旨在基于显著临床疗效的基础上，进行其药效学及作用机理的实验研究，观察其对哮喘豚鼠肺组织的病理变化，2 / 5 为 中药防治哮喘提供一定实验依据。 1 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验动物 健康 2 月龄普通级豚鼠，体重 240 320 g，雌雄不拘，由南通大学实验动物中心提供。实验动物生产许可证号： SCXK（苏） 2001-0011。实验期间分笼饲养于安静室内，自然光照，室温 20 26 ，湿度 40% 70%，饲喂全价颗粒料和新鲜蔬菜，每周换垫料 1 次。 1.1.2 药品及试剂 健儿强身膏口服液：由南通市中医院制剂室按制备工艺生产提供，每毫升相当于生药 1 g生产批文号：通制剂（ 2001） 04 125。药物主要组成成分：党参、炒白术、茯苓、炒白芍、山药、炒谷麦芽、焦楂曲、黄芪、黄精、南北沙参、菟丝子、山芋肉、桑葚子、女贞、生熟地、川断、陈皮、甘草、仙灵脾、天麦冬、蒸百部、红枣、浮小麦、法半夏、黄芩、补骨脂。阳性对照药：地塞米松磷酸钠注射液（江苏涟水制药有限公司，批号： 0411171）。致敏剂：卵蛋白（ OVA），上海伯奥生物科技有限公司，批号 0050114。 1.1.3 主要仪器 PARIBOY 超声雾化机，德国百瑞；密闭透明容器（ 320 mm260 mm200 mm ），自制；奥林巴斯 CX41显 微镜，日本；形态图像分析系统，南京捷达公司；外科手术器械 1 套。 3 / 5 1.2 实验方法 1.2.1 动物分组及剂量 取符合实验要求的豚鼠 48 只，随机分成 6 组：空白对照组（正常组）、哮喘模型组、地塞米松治疗组：地塞米松 1 mg/kg 体重、健儿强身膏低剂量组：生药 4 g/kg 体重、健儿强身膏中剂量组：生药 8 g/kg 体重、健儿强身膏高剂量组：生药 16 g/kg 体重，每组 8 只。 1.2.2 造模及给药方法 按照国际上通用的方法，以经典的卵蛋白致敏和攻击复制动物模型 4。除空白对照组外，其余各组动物每只 分别腹腔注射 10%卵蛋白生理盐水溶液 1 ml 致敏，于第 15、 16、 17 天，将豚鼠逐个放入自制密闭容器中，超声雾化机衡压喷入 1%卵蛋白生理盐水溶液 30 S 任其自由吸入，观察豚鼠呼吸节律、深度、膈肌收缩及有无抽搐跌倒等呼吸道痉挛梗阻等症状。其强度可分为四级： ：呼吸加剧； ：呼吸困难，点头呼吸； ：腹肌痉挛，抽搐； ：翻滚跌倒甚至死亡。出现上述症状即为造模成功。此时立即取出动物，置通风处，换气。同时记录引喘潜伏期（ T），并进行比较。潜伏期：从吸入 1%卵蛋白生理盐水溶液到腹肌痉挛、抽搐的时间。从第 18 天开始给药。 模型组每天给予生理盐水 10 ml/kg 灌胃，中药低、中、高各组按规定剂量灌胃，阳性对照组按 1 mg/kg 体重腹腔注射给药，连续给药18 天。并与给药后第 6、 12、 18 天分别诱喘 1 次，同时记录哮喘发作潜伏期。空白组以生理盐水替代卵蛋白同步实验。 4 / 5 1.2.3 标本采集 最后 1 次给药后 24 h 内，每只豚鼠称重后用 3%戊巴比妥钠 1 ml/kg 注射，麻醉后腹主动脉放血处死。迅速选取右肺中叶于 4%多聚甲醛（含 1DEPC ）中固定 48 h后，常规石蜡包埋，切片，苏木精 -伊红（ HE）染色，光镜观察。 迅速取火柴头大小的右下肺组织标本，用 3%戊二醛固定，1%四氯化锇后固定， Epon-812 树脂包埋，做超薄切片，醋酸铀、枸橼酸铅染色，透射电镜观察并照相。 1.3 统计学方法 所有数据均用 xs 表示， SPSS12.0 统计软件进行单因素方差分析， P2 刘 静 . 具有免疫增强作用的中药药理分析 J.医学导报， XX， 22（增刊） :71-72. 3 张 丽 . 扶正补气方对实验动物 NKC-IFN-IL-2 调节网的作用 J. 北京中医学院学报， 1991， 14（增刊） :30-32. 4 冯 璞 . 四君子汤对小鼠腹腔巨噬细胞功能的调节作用 J. 甘肃医药， 1991， 10（ 3） :135-137. 5 李明华，殷凯生，朱检立，主编 .哮喘病学 M.1 版 . 北京 :人民卫生出版社， 1999:36-38. 6 Saerra M， Turato G. Airway pathology in asthmaJ. Eur Respir J， 2001， 34（ Suppl） :18-23. 7 Lacy P， Moqbel R. Immune effector functions of eosinophils in allergic airway inflammationJ. Curr Opin Allergy Clin Immunol， 2001， 1（ 1） :79-84. 5 / 5 8 Clark K， Simson L， Newcombe N， et al. Eosinophil degranulation in the allergic lung of mice primarily occurs in the airway lumenJ. J Leukoc Biol， XX， 75（ 6） :1001-1009. 9 Shen HH， Ochkur SI， Mc Garry MP， et al. A causative relationship exists between eosiophils and the development of allergic pulmonary pathologies in the mouseJ. J Immunol， XX， 170（ 6） :3296-3305. 10 冼华浩，钟南山，万欢荚，等哮喘手册 M北京：人民卫生出版社， XX:23-25 11 Woolley KL ， Gibson PG ， Carty K ， et al. Eosinophilap optosisa ndth eres olutiono fa irwayin flammationin a sthmaJ. Am J Respir Crit Care Med， 199