XX年咸阳市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率监测研究.doc

XX年咸阳市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率监测研究 李凤英刘军礼刘美宁马波罗文瑞马婷邹利媛 咸阳市疾病预防控制中心免疫规划科陕西省咸阳市712046 【摘要】目的：了解xx年咸阳市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率状况。方法：采用生化试验、氧化酶试验、PCR试验等方法，检测咸阳市200例健康人群血样，分析脑膜炎奈瑟菌阳性情况。结果：经细菌培养，奈瑟菌共检出6例，我市健康人群奈瑟菌带菌率为3.00%；经定性PCR实验对6例带菌者中有2例为阳性片段，其中1例为C群，1例为B群。结论：我市强化免疫接种措施取得显著成效，但应继续开展带菌率监测，进一步控制流行性脑膜炎的发病率，保护广大居民的身体健康。 关键词脑膜炎奈瑟菌；带菌率；监测 自咸阳市实施扩大免疫规划程序以来，流行性脑膜炎在我市的发病率呈明显的下降趋势1。近年来，我市流行性脑膜炎发病率均保持在1/10万以下。为了解咸阳市健康人群脑膜炎奈瑟菌（Nm）带菌状况，制定更有效的流脑防治措施及策略，咸阳市疾病预防控制中心于xx年8月开展了咸阳市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率监测，现将结果总结报告如下： 1研究对象及方法 1.1研究对象 根据过去3年流脑平均发病水平、人口、地理分布特点等因素，选择泾阳、三原县为监测点，每个监测点分5个年龄组（34岁、56岁、714岁、1519岁、20岁年龄组）进行健康人群带菌率监测。每个监测点每年龄段严格按照随机原则抽取20人，本次共监测200人。 1.2标本采集 依据WS259-xx脑膜炎奈瑟菌实验室检测方法采集研究对象的咽拭子标本，并对样本进行统一编号。 1.3检测方法及判定标准 1.3.1检测方法 用无菌长柄棉签采集其咽后壁两侧分泌物，立即接种于卵黄双抗培养基，采集完后尽快将已接种的培养基送到实验室，37、5%CO2培养24h挑取疑似菌落进行分纯，然后做生化试验，染色镜检，氧化酶试验，血清学鉴定。 1.3.2PCR检测 主要仪器、设备：博日定性PCR仪、SLAN96P、定性PCR反应试剂由之江公司提供。反应参数：94，3min；40（94，20s；TM，20s；72，30s；）72，10min。 1.3.3脑膜炎奈瑟菌判定标准 菌落典型，镜下为革兰阴性双球菌；盐水无自凝现象，氧化酶试验阳性；普通琼脂平板上不生长；生化试验：葡萄糖+麦芽糖+蔗糖-乳糖-果糖-；血清学试验：应与分群血清凝集。 1.4数据处理 应用SPSS16.0和SAS9.2对所得资料进行统计处理，检验水准=0.05。 2结果 2.1咸阳市健康人群奈瑟菌带菌率状况经细菌培养，本次监测结果显示：经细菌培养，奈瑟菌共检出6例，我市健康人群奈瑟菌带菌率为3.00%，该6例病例基本资料如下：男性4例，女性2例；年龄：828（4.226.51）岁；泾阳县4例，三原县2例；4例具有A群流脑免疫史，3例具有A群+C群流脑免疫史；6例奈瑟菌带菌者均农村。 2.2定性引物扩增电泳结果 采用定性PCR实验对6例带菌者血样进一步确定种群。由定性引物扩增电泳结果图可见，6例标本中，扩增出2个阳性片段，将这2个阳性片段送测，结果显示2例阳性结果中，其中1例为C群（引物：YF-siaD-C-3R），另1例为B群（引物：YF-siaD-B-2R）。 2.3奈瑟菌DNA测序结果 样本测序结果与数据库各血清群序列比对结果如下，划红线序列为样本。第一份样本DNA碱基序列与目的基因（BAY234192.1）完全重合，第二份样本DNA碱基序列与目的基因（C-HM037270.1）完全重合，结果与PCR结果一致。 3讨论 我市xx年健康人群脑膜炎奈瑟菌率监测，首次采用了“细菌培养-PCR实验检测-DNA测序”的监测技术及程序。细菌培养方法较为传统，在一定程度上假阳性率高，无法确定细菌亚群。PCR实验可弥补细菌培养的不足，同时能够对细菌进行准确的分型定性。再此基础上采用DNA测序，可以进一步印证PCR实验的准确性，在碱基片段的识别基础上，准确定位细菌种类、亚群等。本次经细菌培养检出6例脑膜炎奈瑟菌带菌阳性者，采用PCR实验及DNA测序，确定2例为脑膜炎奈瑟菌，其中B群1例，C群1例。提示：咸阳市应继续加强A+C群流脑疫苗的查漏补种、强化免疫等工作；同时开展带菌率监测，若条件允许，应开展A群、B群流脑疫苗的免疫接种工作，对散居儿童、流动人口等高危人群优先开展此项工作，进一步降低我市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率，控制流行性脑膜炎的发病率，保护广大居民的身体健康。 参考文献 1刘美真,管大伟,邓小玲等.广东省首例W135群流脑的病原学分析J.华南预防医学,xx,34(3):26-28. 2田晓辉,夏昕,王敏等.张家界市首例C群流脑死亡病例及其密接人群中分离的脑膜炎奈瑟菌实验室分析和PFGE分型J.