高效液相色谱法测定蒙药复方述达格4有效部位中山奈素和高良姜素的含量.doc

高效液相色谱法测定蒙药复方述达格4有效部位中山奈素和高良姜素的含量 张海玉1李常胜*2塔娜1 1.内蒙古自治区国际蒙医医院药学部，内蒙古呼和浩特010065；2.内蒙古医科大学，内蒙古呼和浩特010110 摘要目的探析蒙药复方述达格-4有效部位高良姜素2与中山奈素应用高效液相色谱法检测的方法。方法应用高效液相反相色谱法，流动相为乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液，检测波长286nm，梯度洗脱（0min20min，34%A37%A；20min60min，37%A），流速1.0mL/min，色谱柱为DiamosilC18（4.6mm250mm，5m），柱温30C，进样量20L。结果山柰素的线性范围为0.01656g0.1656g（=0.9999），高良姜素线性范围为0.04g0.40g（=0.9999）。重复性试验中，山柰素、高良姜素的平均含量分别为0.43%、1.21%；RSD分别为1.43%、0.94%；加样回收率试验评估中，山柰素、高良姜素的回收率平均值分别为98.92%、99.92%，RSD为2.33%、2.09%。结论高效液相色谱检测法的重复性较佳，简便准确，可为蒙药复方述达格-4质量控制提供依据。 关键词山柰素；高良姜素；有效部位；蒙药复方述达格-4 R29A1674-074（4）07（b）130-03 作者简介张海玉（1968-），女，内蒙古呼和浩特人，大专，副主任蒙药师，研究方向：蒙药相关。 通讯作者李常胜，讲师，E-mail:immc_kjc163.。 述达格-4为蒙药传统配方，蒙医中用于止痛平喘，药物成分为100g石菖蒲、100g木香、200g紫硵砂，可止痛消喘，具有镇“巴达干赫依”的作用1。用于胃肠消化功能低下、胸肋刺痛、气短胸闷、膈肌痉挛等临床病症2。述达格-4中主药高良姜具有抗血栓、抗凝血、镇痛、抗腹泻、止呕、抗溃疡等功能，黄酮为其主要药理成分3。本研究富集复方药物中黄酮类成分，对其有效部位的含量应用HPLC法进行检测，取得满意效果，现报道如下。 1试药与仪器 MettlerToledo公司生产的AB135-S电子天平，AB135-S型超声清洗仪，日本日立公司生产的LC-2000全自动进样高效液相色谱仪，AgilentChemstation，L-2455紫外检测器。安国市康达中药材有限公司提供蒙药复方述达格-4中各药材，娃哈哈纯净水，乙腈为Fisher色谱纯试剂，其他试剂为分析纯；山柰素（批号：110861-xx08；中国药品生物制品检定所）高良姜素对照品（批号：111699-xx01；中国药品生物制品检定所）。 2方法与结果 2.1混合对照品储备液制备 于5mL容量瓶内精密称量2.50mg干燥减压后恒重的高良姜素对照品，于10mL容量瓶内称量2.07mg山柰素对照品，甲醇定容混匀后，于25mL容量瓶内分别吸取1mL两种对照品溶液，混合对照品浓度为0.00828mg/mL。 2.2供试品溶液制备 精密称量5g述达格-4药材，放入250mL圆底烧瓶内，将50%的乙醇100mL精密加入，进行2次回流提取，2h/次，用脱脂棉趁热粗滤，将两次提取液合并，溶剂无醇味后回收，对入蒸馏水稀释至15mL；经大孔树脂柱纯化，收集乙醇洗脱液，溶剂回收，25mL容量瓶内定容70%乙醇，摇匀，即为有效部位样品溶液，25mL容量瓶内吸取1mL此溶液，定容70%乙醇，摇匀后用0.45m微孔滤膜滤过。 2.3色谱条件及系统适用性试验 流动相为乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液，检测波长286nm，梯度洗脱0min20min，34%A37%A；20min60min，37%A），流速1.0mL/min，色谱柱为DiamosilC18（4.6mm250mm，5m），柱温30C，进样量20L。在以上色谱条件下，山柰素、高良姜素与相邻色谱峰的分离度均1.5，对称因子在0.951.05之间，理论板数均7000。色谱图见下图1。 1山奈素 2高良姜素 2.4线性关系考察 分别取混合对照品溶液分别进样2.0L、4.0L、6.0L、8.0L、10.0L、20.0L在以上色谱条件下进行HPLC分析，以峰面积Y为纵坐标，溶液质量X（g）为横坐标绘制标准曲线，达到山柰素、高良姜素的回归方程分别为：Y=6469053.8311X-1420.7869=0.9999（山柰素线性方程）；Y=9011119.0984X-26100.0164=0.9999（高良姜素线性方程）；山柰素的线性范围为0.016560.1656g，高良姜素线性范围为0.040.40g。 2.5精密度试验 在以上色谱条件下，选择同一供试品溶液连续6次进样，测得山柰素、高良姜素的峰面积的RSD（n=6）分别为0.90%、2.52%。 2.6重复性试验 同一供试品溶液制备6份，按以上色谱条件检测。 2.7统计方法 采用SPSS17.0软件系统分析所有数据，计量资料采用均数标准差（xs）表示，用t检验，计数资料采用2检验。山柰素、高良姜素的平均含量分别为0.43%、1.21%；RSD分别为1.43%、0.94%，见表1。 2.8稳定性试验 在以上色谱条件下，同一份供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10、12、24h重复进样，检测山柰素、高良姜素的峰面积的RSD（n=8）分别为0.79%、2.40%，说明24h内供试品溶液的稳定性较佳。 2.9加样回收率试验 精密称量2.5g述达格-4药材6份，进行有效部位样品溶液制备，在25mL容量瓶内分别吸取1mL样品溶液，加入0.0245mg山柰素、0.0588mg高良姜素标准品，25mL容量瓶内定容70%乙醇，混匀后用0.45m微孔滤膜滤过，按以上色谱条件检测，计算RSD及回收率。山柰素、高良姜素的回收率平均值分为98.92%、99.92%，RSD为2.33%、2.09%，见表2。 3样品含量测定 取样品3批，3份/批，按以上方法制备供试品溶液，液相色谱仪内注入20L供试品溶液，记录峰面积，药物中山柰素、高良姜素含量测定依据外标一点法。见表3。 3讨论 3.1选择测定波长 选择测定波长时，高良姜素、山柰素分别在282nm、286nm、290nm处可最大吸收4，但经研究二者在286nm处吸收效果最佳5，所以测定波长选定为286nm。 3.2选择流动相 在对流动相的系统选择中，高良姜素在乙腈磷酸水系统中的分离效果较佳6。 3.3选择对照品 分析对照样品时，发现黄酮为复方述达格4有效部位的主要药理成分，山柰素、高良姜素的药理活性较强7。山柰素可发挥抗变态反应、抗炎功能，影响人胃癌细胞原位移植裸鼠中的和一表达8；而高良姜素可显著防护小鼠酒精型胃溃疡及大鼠结扎性胃溃疡，同时抗炎、抗病毒、抗畸形9。 该研究蒙药复方述达格-4有效部位高良姜素2与中山奈素应用高效液相色谱法检测，结果显示：重复性试验中，山柰素、高良姜素的平均含量分为为0.43%、1.21%；RSD分别为1.43%、0.94%；加样回收率试验评估中，山柰素、高良姜素的回收率平均值分为为98.92%、99.92%，RSD为2.33%、2.09%，说明高效液相色谱检测法的重复性较佳，简便准确，可为蒙药复方述达格4质量控制提供依据。 参考文献 1董玉，贾鑫，马强.蒙药复方述达格-4不同配伍对总黄酮和高良姜素含量的影响J.内蒙古大学学报:自然科学版，xx，43(5):173-174. 2贾鑫，武娜，董玉.高效液相色谱法测定蒙药复方述达格-4有效部位中山奈素和高良姜素的含量J.内蒙古医学院学报，xx，33(3):702-703. 3梁选革，张若燕，刘莉丽.红花注射液中槲皮素和山柰素含量的高效液相色谱测定J.时珍国医国药，xx，23(10):153-156. 4杜小伟，王京辉，肖斯婷，等.高效液相色谱法测定不同罗布麻叶中槲皮素和山柰素的含量J.四川医学，xx，31(5):234-236. 5BroviaV，RiiardiA，BarbeitoL.N-Acetyl-aspartylglutamate(NAAG)inhumancerebrospinalfluid:Determinationby?highperformanceliquidchromatography，andinfluenceofbiologicalvariablesJ.AminoAcidsm，xx，9(2):175-184. 6孟宪波.HPLC测定凤眼草中槲皮素与山柰素的含量J.中国实验方剂学杂志，xx，19(8):122-123. 7吴琼，林一帆，王常丽，等.HPLC测定冬胃颗粒中高良姜素的含量J.中国药师，xx，15(9):217-218.