血清HBVDNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物模式的相关因素探讨.doc

血清HBVDNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物模式的相关因素探讨 颜敏 湖北省医药学院附属医院十堰市人民医院检验科，湖北十堰442000 摘要目的通过探讨血清HBV-DNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物模式的相关因素，旨在为乙肝的早期诊断合理用药提高患者生活质量提供理论依据。方法选择在该院收集的360例乙肝血清标本，用荧光定量PCR法进行HBV-DNA检测，同时采用ELISA法进行乙肝病毒标志物检测，并根据不同乙肝病毒标志模式情况的检测结果进行对比分析。结果乙型肝炎患者血清标本乙肝病毒标志物模式中HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)组患者最多为101例，其次为HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)70例，HBsAg(+)、HBcAb(+)43例；阳性率比较HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)的阳性率最高为97.03%，其次为HBsAg(+)HBcAb(+)阳性率为88.37%和HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)阳性率为78.57%、HBsAb(+)为42.42%、全阴性最低为16.67%。结论血清HBV-DNA荧光定量PCR检测对于乙肝病毒标志物各种模式均有检出率，乙肝病毒标志物与HBV-DNA有明显关系，但是不同乙肝病毒标志物模式检出率差异显著，说明单独使用乙肝病毒标志检测对疾病进行诊断准确性差，应用血清HBV-DNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物联合检测可以全面掌握病毒的复制情况，对疾病的早期诊断和科学治疗有着重要的临床应用价值。 关键词hbv-dna；乙肝病毒标志物；相关性 R440A1674-074（4）09（b）193-02 作者简介颜敏（1974-），女，四川成都人，大专，副主任技师，研究方向：分子生物。 通讯作者瞿新（1971-），男，湖北十堰人，学士，副主任技师，研究方向：医学免疫检验。 乙型肝炎是世界上最为常见的严重危害人类健康的传染病，乙肝病毒(HBV)感染后可引起多种类型的急慢性肝炎，还是导致肝硬化、原发性肝细胞癌的主要原因，也是严重威胁患者生命的严重疾病1，目前研究表明乙型肝炎的发病率和病死率都有上升的趋势，在降低患者生活质量的同时危害生命安全2。现阶段对乙肝病毒感染的病理生理机制掌握上不全面，临床症状及表现形式复杂，病情迁延导致患者出现不同血清学标志物模式3，因此针对乙肝病毒血清标志物检测对于临床诊断乙肝病毒感染情况及传染性分析，同时指导临床科学治疗有着重要的临床应用价值。酶联免疫吸附法（ELISA）是检测乙肝病毒血清标志物的常用方法，但是检测率相对较低对于病毒早期感染检测效率差4，随着分子生物学的快速发展，聚合酶链式反应(PCR)引起特异性高、灵敏性强，已经广泛用于病毒的检测，尤其是实时荧光聚合酶链反应技术能准确检测患者体内HBV感染的具体状态，同时能对HBV-DNA的检测进行量化对比5，全面掌握病毒的复制状态和传染性，对于临床诊断和提供科学治疗方案有着重要作用。该研究xx年1月xx年1月间通过血清HBV-DNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物模式的相关因素，旨在为探讨HBVDNA含量与各种乙肝病毒标志物的关系，为进一步研究乙型肝炎病毒复制、感染性及临床抗病毒的研制提供理论依据，报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料 选择该院接受乙肝治疗的360例患者，其中男196例，女164例，年龄为2369岁，平均年龄为(39.861.01)岁，所有患者均符合2000年第10次全国病毒性肝炎及肝病学术会议所制订的病毒性肝炎防治方案中的诊断及分型标准，并排除甲、丙、丁、戊、庚型肝炎的重叠感染的患者，空腹采集患者血清，分离后进行分装备用。 1.2方法 仪器与设备：HBV-DNA荧光定量PCR检测的试剂盒由达安基因生物工程股份有限公司提供，ELISA法乙肝血清标志物(HBVM)采用珠海丽珠有限公司乙型肝炎检测试剂盒，在美国ABIViiATM7实时荧光定量PCR仪上测定，科华KHBST-360型酶标仪、安图Iwo-960型洗板机。乙肝病毒血清标志物检测：应用ELISA法检测，根据试剂盒说明书的指导进行操作，应用酶标仪对结果进行读数并记录；HBV-DNA检测：采用荧光定量PCR的方法，取患者血清样本100L，加入100LDNA提取液，充分混合后用离心机12000rpm离心10min，弃去上清后加入25L处理液，100水浴中预热10min后再离心10min，取2L上清液加入PCR管，应用PCR仪设定好正确程序进行检测，同时设置强阳性对照、弱阳性对照、阴性对照、阳性标准品对照，反应结束后应用阳性梯度标准品的Ct值制作标准PCR荧光曲线，再依据样品的Ct值计算DNA的含量6。 1.3统计方法 应用SPSS16.0软件对数据进行统计学处理，计量资料用均数标准差(xs)表示，组间比较采用t检验，计数资料用百分率比较，采用2检验7。 2结果 360例乙型肝炎患者血清标本有9种乙肝病毒标志物模式，其中HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)组患者最多为101例，其次为HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)70例，HBsAg(+)、HBcAb(+)43例；阳性率比较HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)的阳性率最高为97.03%，其次为HB