联合应用神经生长因子和神经节苷脂对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用探讨.doc

联合应用神经生长因子和神经节苷脂对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用探讨 刘坤刘维婕李薇 大连大学附属中山医院，辽宁大连116000 摘要目的研究神经生长因子（NGF）联合神经节苷脂1（GM1）对于坐骨神经损伤大鼠的脊髓神经元保护作用。方法选择实验用SD大鼠50只，随机分为A组（生理盐水NS组，14只）、B组（NGF，12只）、C组（GM1，12只）和D组（NGF+GM1，12只），造成5mm坐骨神经缺损，各组术中均以硅胶管进行局部加药，手术后于损伤侧小腿处予以相应药物肌注。结果生长4周时，D组的脊髓运动神经元数以及神经传导速度均显著优于另外三组(P0.05)，且B、C组显著优于A组(P0.05)；生长8周时，B、C、D三组的脊髓运动神经元数以及神经传导速度均显著优于A组(P0.05）。结论NGF联合GM1对于坐骨神经损伤以后的脊髓运动神经元具有保护作用，且相比于单纯应用NGF或者GM1能够更早地发挥作用，且保护效果明显更好，值得推广应用。 关键词神经节苷脂；神经生长因子；坐骨神经损伤；脊髓神经元 R745A1672-5654（xx）03（a）-0009-02 ProtectiveeffectsofNGFandgangliosideonsciaticnerveinjuryofratspinalcordneuronstoinvestigate LIUKunLIUWeijieLIWei TheaffiliatedZhongshanHospitalofDalianUniversity，Dalian116000，China AbstractObjectiveSpinalcordneuronsinratsofNGFbinedwithGM1ontheprotectionofsciaticnerveinjury.MethodsThe50SDrats，wererandomlydividedintoAgroup(groupNS，14rats)，Bgroup(NGF，12)，Cgroup(GM1，12)andDgroup(NGF+GM1，12)，5mmsciaticnervedefectcausedby.ResultsThegrowthof4weeks，groupDinmotorneuronsofthespinalcordandnerveconductionvelocityweresignificantlybetterthantheotherthreegroups(P<0.05)，andB，CgroupwashigherthanthatofAgroup(P<0.05);growthatweek8，B，C，DspinalmotorneuronnumberthreegroupsofnerveconductionvelocitywassignificantlybetterthantheAgroup(P<0.05)，butB，C，Dnosignificantdifferencebetweenthethreegroups(P>0.05).ConclusionNGFbinedwithGM1hasaprotectiveeffectonspinalcordmotoneuronsaftersciaticnerveinjury，andparedtothesimpleapplicationofNGForGMCanplayaroleearlier，andtheproteltiveeffevtwassignificantlybetter，Shouldwidelyapplied. KeywordsGangliosides;Nervegrowthfactor;Sciaticnerveinjury;Spinalcordneurons 周围神经损伤是相应脊髓节段也可发生一过性或者永久性的损伤，且可导致脊髓前角运动神经发生凋亡等1。目前，神经生长因子（NGF）以及GM1的研究较多2。研究建立坐骨神经损伤大鼠模型，单独或联合应用NGF与GM1，并设置生理盐水对照组进行了对比分析，现总结报道如下。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物选择鼠龄为6个月的SD大鼠5只，雌雄不限，体质量在220240g之间，平均为（232.14.4）g。 1.1.2试剂及仪器GM1（香港精优企业有限公司）、NGF（Sigma公司）、苏木素伊红(HE)染色试剂盒（上海圻明生物科技有限公司）、多导生理记录仪（SiemensAG）、JEM21200E透射电子显微镜（日本电子光学公司）。 1.2方法 1.2.1分组及模型准备50只SD大鼠，随机分为A组（生理盐水NS组，14只）、B组（NGF，12只）、C组（GM1，12只）和D组（NGF+GM1，12只），各组的定点观察时相分别为伤后1周、4周及8周。大鼠均予以腹膜腔内注射2%的戊巴比妥钠进行麻醉，剂量为40mg/kg，并常规进行消毒铺单，于大鼠的右大腿外侧行1个纵向切口，以显露其坐骨神经，找到梨状肌，于其下方5mm部位切断坐骨神经，将远近神经段均纳入长度为10mm、内径为2.0mm的硅胶管之中，然后以9-0显微缝线将神经外膜固定在硅胶管的管壁上，保持神经阻断端之间相距5mm。手术过程中经硅胶管滴加相应药物各1次，手术后8周内于小腿予以腓肠肌注射1次，用量视体重而定，B组为NGF用量10ng/100g，C组为GM1用量100g/100g，D组为NGF用量5ng/100g，GM1用量50g/100g，A组予以等量的生理盐水。 1.2.2神经传导速度（NCV）的测定各组分别于术后4周以及8周时选择双侧坐骨神经应用生理记录仪测定NCV，测定方法按照说明书操作。 1.2.3脊髓前角运动神经元数测定各组分别于术后1周、4周以及8周时选择L1-6脊髓前角进行测定，常规进行固定、包埋以及切片，控制片厚为5m。然后进行HE染色，在各个标本中抽取中间部位切片5张，以直径15m进行计数，最终结果取平均数。同时，密切观察并记录脊髓前角运动神经元数变化情况。 1.2.4电镜观察术后1、4周及8周时选择L4-6脊髓，采用3%的戊二醛进行固定，并进行定向包埋，选择超薄切片此阿勇枸橼酸铅进行染色，然后采用电镜观察并记录其超微结构，比较各组大鼠的超微结构变化情况。 1.3统计学分析 数据以SPSS18.0软件进行分析，以（xs）表示计量资料，并经t检验；以百分率表示计数资料，并经2检验，P0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1各组NCV比较 术后4周以及8周时，B、C、D组的NCV均显著优于A组（P0