补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用研究.doc

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用研究 朱雪钦1韩静2胡娟1,2庞文生1,3 1福建中医药大学药学院，福建福州350122；2福建中医药研究院，福建福州350003；3福建省第二人民医院，福建福州350003 【摘要】目的：探讨补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用线栓法制造大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，给药组给予补阳还五汤原方剂量的水煎液，每日一次，连续灌胃7d；模型组与假手术组均给予同体积生理盐水。测定SOD、GST和GSH-PX活性以及血清中MDA含量。结果：补阳还五汤可以显著提高脑缺血再灌注大鼠SOD、GST、GSH-PX的活性，明显抑制MDA的生成。结论：补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，抗氧化作用是其发挥脑缺血保护作用的机制之一。 关键词补阳还五汤；mcao大鼠模型；sod；gst；gsh-px；mda 【】R2855【文献标志码】A【】1007-8517(xx)01-0042-02 补阳还五汤是中医益气活血法的经典方，由黄芪、当归尾、赤芍、地龙、川芎、桃仁、红花七味药组成。临床广泛用于缺血性脑血管疾病，对灌注的大鼠皮层及小脑中活性氧（ROS）的生成、对大鼠血管源性脑水肿的抗应冠心病、心肌梗死及其他血栓栓塞性疾病均有作用1，可显著抑制脑缺血/再激具有治疗作用。大量研究显示，补阳还五汤对抗脑缺血所致的氧化应激损伤具有神经保护作用2,3。本文将采用线栓法制作大鼠脑缺血/再灌注（MCAO）模型，并通过测定SOD、GST和GSH-Px活性以及MDA的含量，着重观察补阳还五汤经典方在大鼠脑缺血/再灌注损伤中的抗氧化作用，为其临床应用提供理论依据。 1材料与方法 11实验动物SPF级雄性SD大鼠，体重25020g，由福建医科大学动物实验中心提供。 12实验仪器VF3001全波长扫描多功能酶标仪（美国）。 13药物与试剂黄芪（批号：1203131，源和堂中药饮片有限责任公司）；当归尾（批号：1203046，源和堂中药饮片有限责任公司）；赤芍（批号：1203072，源和堂中药饮片有限责任公）；地龙（批号：1112207，源和堂中药饮片有限责任公司）；川芎（批号：1203055，源和堂中药饮片有限责任公司）；桃仁（批号：120201，源和堂中药饮片有限责任公司）；红花（批号：1203083，源和堂中药饮片有限责任公司）；氯化钠（批号：Fxx0307，国药集团化学试剂有限公司）；SOD、GSH-Px和MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所）；GST试剂盒（上海生工生物技术有限公司）。 14方法 141动物模型制备采取线栓法制作大脑中动脉闭塞/再灌注模型4。动物术前禁食12h，自由饮水。用10%水合氯醛3ml/kg行腹腔注射麻醉。钝性分离右侧右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、和颈内动脉（ICA），并小心分离迷走神经，分别电凝ECA分支枕动脉和甲状腺上动脉。在距CCA分叉大约1cm处结扎ECA近心端，电凝远心端。用无创小动脉夹夹闭CCA，在ECA残端距CCA分叉3mm处剪一小口，将制备好的线栓经ECA插入ICA，线栓头端距CCA分叉处约18mm，此时进线有轻微阻力，栓线正好插至颅内的大脑前动脉，堵住大脑中动脉（MCA）开口，制成MCAO模型。造模后2h，以半剂量10%水合氯醛再次麻醉动物，拔出线栓，结扎ECA残端。术后2025条件下饲养大鼠，自由进食水。假手术组除不在颈内动脉插入线栓外，其余步骤与上述相同。 142分组与给药将21只大鼠随机分成3组，每组7只，分别为模型组、给药组、假手术组。给药组给予补阳还五汤煎剂原方剂量，黄芪120g，当归尾6g，赤芍5g，地龙3g，川芎3g，桃仁3g，红花3g。用水煎煮两次合并混匀。模型组与假手术组均给予生理盐水。每日一次，连续给药7d。 143SOD、GST、GSH-Px的活力测定大鼠于缺血再灌注24h后断头取脑，冰上分离缺血侧大脑皮质适量，在冰浴中匀浆，用09%生理盐水制成10%的组织匀浆液。4000r/min离心10min，取上清。采用WST-1方法测定脑组织中SOD活力，CDNB法测定GST活力，采用酶联免疫吸附法测定GSH-Px活力。 144MDA的含量测定按“143”中的方法获得脑组织匀浆液，采用硫代巴比妥法测定脑组织中MDA含量。 15统计学处理数据采用SPSS170软件进行统计分析，所有结果以均数标准差（xs）来表示，组间差异用t检验分析结果，以P005为差异有统计意义。 2实验结果 模型组与假手术组比较，SOD的活力显著降低（P001），GST的活力显著降低（P001），GST的活力显著降低（P001），GSH-Px的活力显著降低（P001），其差异具有统计学意义；补阳还五汤组与模型组比较，SOD的活力显著提高（P005），GST的活力显著提高（