谷胱甘肽S转移酶M1基因缺失与老年性白内障发病关系的研究.doc

谷胱甘肽S转移酶M1基因缺失与老年性白内障发病关系的研究 闫吉田杰 沈阳市第四人民医院检验科，辽宁沈阳110031 摘要目的通过检测谷胱甘肽S转移酶M1（glutathioneS-transferaseM1,GSTM1）的基因缺失，探讨其与老年性白内障发病关系。方法对105例老年性白内障患者和60例健康人利用聚合酶链反应(PCR)测定外周血的GSTM1基因；白内障患者组同时取白内障晶状体囊膜上皮细胞进行GSTM1基因检测。结果白内障患者GSTM1基因缺失率达64.8，显著高于对照组的48.3（P0.05）。结论GSTM1基因缺失者患白内障的危险性高于GSTM1基因携带者，提示GSTM1基因缺失很可能是老年人易患白内障的遗传因素之一。 关键词谷胱甘肽转移酶；老年性白内障；基因缺失 R776.1A1674-074（4）09（c）053-02 白内障是目前致盲性最高的眼病之一，以老年性白内障最为常见1。目前老年性白内障发病机理尚不明确，可能自由基引起的超氧化反应对白内障发病有关2-3。谷胱甘肽S转移酶（GST）是一组多功能蛋白，其同工酶在代谢外来化学物，特别是亲电子物、药物的转化及对抗脂质过氧化损伤等方面有重要作用。GST同工酶有、等型4，其中在代谢化学致癌物、解除各种亲电子毒性上基质特异性最强。中的M1在人群中存在表型差异，其表型差异由基因缺失所致，GSTM1基因缺失表现为其酶活性缺失与老年性白内障有关5-9。该实验xx年8月xx年4月通过检测老年白内障患者GSTM1基因，旨在探讨GSTM1基因缺失与老年性白内障发病关系，现报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料 选择明确诊断老年性白内障在该院行白内障手术的患者105例，男56例，女49例，平均年龄（70.610.4）岁；将60例健康体检者作为对照组，男30例,女30例，平均年龄（69.211.6）岁，对照组无白内障及其他眼病史。 1.2方法 标本收集：将患者组手术摘除的晶状体囊膜用无菌BSS清洗后-80保存。抽取患者组和对照组23mL静脉血（EDTA-K2抗凝），与等量Hanks液混和后2000rpm离心20m，提取单个核细胞加入倍体积Hanks液，1500rpm离心10m，洗涤两次后离心弃上清-80保存。 提取RNA：将晶体囊膜及血细胞标本复融致室温，加入1mLTrizol液混匀（晶体囊膜要磨碎）放置10m；加入200uL氯仿混匀10m；413000rpm离心15m取上层液移入另一离心管，加入等体积异丙醇混匀10m；413000rpm离心15m吸弃上清加入1mL75的乙醇清洗，48000rpm离心10m吸弃上清，重复一遍后干燥5m加入适量DEPC水待用。 合成c-DNA及GSTM1测定：逆转录试剂及引物均广州达安基因生物技术公司。采用ROCHLightCycler型实时荧光定量PCR仪，按试剂说明设定好参数后进行c-DNA合成及GSTM1检测。 1.3统计方法 应用SPSS16.0软件对数据进行统计学分析，实验各组间GSTM1基因缺失率的比较均采用2检验，正态分布的资料采用均数标准差（xs）表示。 2结果 2.1白内障组与对照组的一般情况 两组年龄、性别比较，二者差异无统计学意义（P0.05），说明两组患者基本情况无差异。 2.2白内障组与对照组的GSTM1基因缺失率比较 白内障患者GSTM1基因缺失率显著高于对照组，差异有统计学意义（P0.05），见表2。 3讨论 白内障的形成与自由基有关10，急剧的氧化应力导致细胞机能障碍，细胞代谢和一些外部因子均可使细胞形成自由基，这些自由基会毒害细胞，特别是富含不饱和脂肪酸的细胞膜对氧化反应最敏感。通常晶体本身有一个完善的抗氧化防御系统11，能有效地清除各种原因产生的自由基，其中还原型谷胱甘肽(GSH)是晶体中最重要的抗氧化剂之一含量较高，能捕捉晶体内产生的自由基，GSH解毒作用很大程度依赖GST同工酶的催化作用，GST同工酶中GSTM1的基质特异性最强，随着年龄的老化GSTM1可能缺失，表现为GSTM1酶活性失活，使自由基与体内抗氧化系统之间失衡，产生氧化应力攻击细胞膜，使脂质过氧化、损伤DNA和胞内蛋白质，导致晶状体混浊形成白内障。 徐美芳等6和皮静波等12等检测老年性白内障患者外周血中的GSTM1基因，结果显示老年性白内障的发病与GSTM1基因缺失密切相关。该研究显示白内障患者外周血中的GSTM1基因的缺失率为64.8%，对照组外周血中的GSTM1基因的缺失率为48.3%，白内障患者外周血中的GSTM1基因的缺失率显著高于对照组(P0.05)，表明晶体上皮细胞与外周血单个核细胞中GSTM1基因具有一致性。即使晶体在胚胎发生、发育过程与周围环境隔绝，具有特殊性，但晶体上皮细胞DNA与外周血单个核细胞相同，可以适用于基因缺失率的比较。 综上，目前多数研究已经表明，老年性白内障与晶体的氧化损伤密切相关。特别是分子生物学技术的发展，能从基因缺失角度上解释白内障产生的原因。该研究发现，GSTM1基因缺失者患白内障的危险性高于GSTM1基因携带者，提示GSTM1基因缺失很可能是老年人易患白内障的遗传因素之一。随着研究的深入，可能更多白内障相关基因被逐渐发现，对于今后白内障的预防和治疗起到很大的帮助。 参考文献 1陈健华.超声乳化联合人工晶体植入术治疗老年性白内障的疗效分析J.当代医学,xx（35）:25-26. 2冯江虹.抗氧化营养素与老年性白内障发病的关系J.中国医疗前沿,xx（18）:6，23. 3李慧敏,斯琴.老年性白内障发病过程中肾上腺髓质素的变化J.临床眼科杂志,xx（2）:179-180. 4高昂，董频，王国良，等.谷胱甘肽硫转移酶T1基因多态性与喉癌易感性的Meta分析J.中国耳鼻咽喉头颈外科,xx（1）:21-25. 5ZhongS,WyllieAH,BarnesD,etal.RelationshipbetweentheGSTM1GeicPolymorphismandSusceptibilitytoBladder,BreastandColonCancerJ.Carcinogenesis,1993,14(3):1821-1824. 6徐美芳，付书华，张莉华.谷胱甘肽转移酶M1基因缺失与老年性白内障易感性的关系J.江西医学院学报,xx,479(4):33-38. 7ZhouJ,HuJ,GuanH.TheassociationbetweencopynumbervariationsinglutathioneS-transferaseM1andT1andage-relatedcataractinaHanChinesepopulationJ.InvestigativeOphthalmology,xx，51(8):3924. 8ZuercherJ,NeidhardtJ,MagyarI,etal.Alterationsofthe5untranslatedleaderregionofSLC16A12leadtoage-relatedcataractJ.InvestigativeOphthalmology，xx，51:3354-3361. 9李晨,管怀进.谷胱甘肽S转移酶系与年龄相关性白内障的研究进展J.国际眼科杂志,xx（11）:1932-1934. 10BonnefoyMetalCombinedeffectofantioxidantsupplementationandresistancetrainingonoxidativestressmarkers,muscleandbodypositioninanelderlypop