GB-T5009.198-2003贝类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定.pdf

I CS 6 7 . 0 4 0C 5 3中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B / T 5 0 0 9 . 1 9 8 -2 0 0 3贝类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定S h e l l f i s h e s -T e s t me t h o d o f d o mo i c a c i d i n a mn e s i c s h e l l f i s h p o i s o n i n g2 0 0 3 - 0 8 - 1 1 发布2 0 0 4 - 0 1 - 0 1 实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部，中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 甲免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 8 -2 0 0 3P l1吕本标准由中华人民共和国卫生部提出并归日本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、 卫 生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人 ： 卫锋 、 工竹天、 陈明生、 工玉萍、 唐守亭。标准下载网()免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 8 -2 0 0 3贝类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定范 围 本标准规定了海产双壳类贝肉样、 制样和液相色谱测定方法。 本标准适用于海产双壳类贝肉骨藻酸的检验。 本标准检测限为l . 0 fi g . 本标准线性范围为1 p g 一 2 5 0、 贝柱 、 外 套膜 及其 制品 的记忆 丧失性 贝类 毒素 软骨藻 酸检验 的抽、 贝柱、 外套膜及其制品（ 不包括盐渍制品） 的记忆丧失性贝类毒素软2 原理试样以甲醇 水提取 ， 经 L C - S A X强阴离子柱固相萃取（ S P E ） 净化， 用 R P - H P L C定量分析。3 试剂3 . 1 甲醇： 色谱纯。3 . 2 乙睛 ： 色谱纯。3 . 3 三氟乙酸 ： 优级纯。3 . 4 一水柠檬酸： 优级纯。3 . 5 柠檬酸三钱： 优级纯。3 . 6 乙睛水（ 1 -9 ) 03 . 7 0 . 5 m o l/ I， 柠檬酸溶液（ p H=3 . 2 ) ; 4 0 . 4 g 一水柠檬酸和1 4 . 0 g 柠檬酸三钱溶解于中， 以浓氨水调 p H=3 . 2 ， 加入 5 0 mL乙睛 ， 完全溶解后 ， 以水定容至 5 0 0 M L .3 . 8 L C - S AX柱 ： 3 mL o3 . 9 标准储备液： D A C S - 1 C ( 1 0 0 t g / m L ) ， 或相当者。3 . 1 0 软骨藻酸标准溶液： 以乙睛水（( 1 十9 ) 稀释标准储备液分别配成为含软骨藻酸 0 . 11 0 . 0 , 2 5 . 0 p .g / m L的标准工作溶液。4 0 0 mI . 水1 . 0 、 2 . 54 仪器4. 24 . 34. 44. 5高效液相色谱仪： 配有二极管阵列或紫外检测器。组织均质器： 最大转速 2 0 0 0 0 r / m i n e台式高速离心机： 最大转速 6 0 0 0 r / m i n a涡旋均匀器。超声波清洗器。5 分 析步骤5 . 1 提取 称取试样 5 . 0 g （ 精确到 0 . 1 g ) 于 5 0 mI, 加盖离心管中， 加人 1 0 m l - 甲醇十水（( 1 +1 ) 溶液， 涡旋混匀 1 m i n ， 超声提取 5 m i n ， 以 4 0 0 0 r / m i n 离心 2 0 m i n ， 使固液两相彻底分离。移出上清液至 2 5 m 1 ， 容量瓶中， 残渣再加人 5 m l , 甲醇水（( 1 十1 ) 重复提取两遍 ， 上清液均移人 2 5 m L容量瓶中， 以水定容至刻度， 混匀。标准下载网()免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 8 - 2 0 0 35 . 2 净化 取 卜 述提取液 5 . 0 m I移人依次经 6 ml甲醇 ， 3 r n l水， 3 m I甲醇 水（ 1 一 曰 ） 处理过的 L C - S A X柱上， 待液体以 1 滴 s 的速度流出后， 再依次用 5 mL乙睛水（( 1 - - 9 ) , 0 . 5 mL 柠檬酸洗脱液以 1 滴/ s的速度过柱， 弃去流出液， 最后用 2 ml 柠檬酸洗脱液洗脱吸附在柱 上的软骨藻酸， 供 H P L C测定。 注意： 在液体过柱时， 当液体凹液面下端与 柱填料 上 端水平时， 停止液体流出， 避免 L C - S 八 X柱填料与 空气接触5 . 3 测 定5 . 3 . 1 色谱条件5 . 3 . 1 . 1 色谱柱： Z o r b a x S B - C , , , 1 5 0 m m X 4 . 6 m m( i. d . ) , 5 fc m， 或相当者；5 . 3 . 1 . 2 流动相： 乙睛+0 . 1 三氟乙酸( 1 3 8 7 ) ;5 . 3 . 1 . 3 流速： 1 m l - / m in ;5 . 3 . 1 . 4 进样最: 1 0 j- L ;5 . 3 . 1 . 5 测定波长： 2 4 2 n m;5 . 3 . 1 . 6 柱温 ： 室温 。5 . 3 . 2 色谱测定 分别取样液和标准溶液各 1 0 f -.L （ 或相同体积） 注人高效液相色谱仪进行测定， 以保留时间定性 ， 峰面积定量 。在 f几 述色谱条件下 ， 软骨藻酸的保留时问约为 6 . 6 r a i n 。软骨藻酸标准溶液液相色谱图见图 1 。 图 1 软骨藻酸标准样品液相色谱图5 . 4 空白试 验 除不加试样外， 按土述测定步骤进行。6 结果计算川AX、 一 ， XV , X 1 0 0 0A ， Xmx（ V ： / V , ）式 中 ：X 试样中软骨藻酸含量， 单位为毫克每千克（ mg / k g ) ;A 一样液中软骨藻酸峰面积；标准下载网()免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 8 -2 0 0 3A s 标准溶液中软骨藻酸峰面积；c s 标准溶液中软骨藻酸浓度， 单位为微克每毫升（ t g / ml . ) ;m 称取的试样质量， 单位为克（ g ) .V , 试样提取液总体积 ， 单位为毫升（ m L )；V净化用提取液体积 ， 单位为毫升（ m L )；V洗脱液体积 ， 单位为毫升（ m L )。计算结果保留两位有效数字。注： 计算结果需扣除空白 值， 报告结果时以贝类中可食组织部分的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的含量(