食用菌制种技术

第五章 食用菌,第一节：制种技术,教学目标、重点、难点,教学目的：熟练使用制种用品、用具、设备、设施进行制种生产。 本节重点：食用菌制种条件，制种工具的使用。,一、 食用菌菌种的概念与级别,(一)、菌种的概念 菌种是指经人工培养并可供进一步繁殖或栽培使用的食用菌菌丝体，常常包括供菌丝体生长的基质在内，共同组成繁殖材料。 菌种是食用菌生产的首要条件，菌种性状的优劣直接影响到生产的成败。常言道：“有收无收在于种（种子），多收少收在于种（栽培）”,（二）菌种的级别,1.一级种（母种）,2.二级种（原种）,3.三级种（栽培种）,不可再扩,母种、原种和栽培种,二、制种常用的设备与用品,（一）、灭菌设备 1、手提式高压灭菌锅,使用压力：1.5kg/c 灭菌时间：2530min 对象：玻璃器皿、母种培养基、无菌水等。 可用高压饭锅替代，但灭菌时间延长至40min,2、卧式高压灭菌锅,使用压力：1.5kg/c 灭菌时间：1.52h 对象：原种、栽培种培养基的灭菌 使用方便，但造价高，一般菇农用常压灭菌灶。,3、常压灭菌灶,使用温度：100-105 灭菌时间：维持810h 对象：原种、栽培种培养基的灭菌,（二）、制种容器,（三）、接种设备与工具,1、接种设备 （1）、超净工作台（局部净化设备空，气过滤除菌）,（2）、接种箱,2、接种工具,接种针、接种环、接种刀、接种铲、镊子等,（四）、 菌种培养设备,放置接种后各级菌种，并提供适宜温度和通气条件，使菌丝生长良好的专用设备,1、恒温培养箱,根据需要使温度恒定在一定范围内,一般用于培养斜面试管和少部分原种。,2、培养室,培养架：以操作方便为宜,宽0.71.2米，层间40cm 调温：电炉、红外线、暖气管、门窗、抽风机 测温：干湿球温度计 照明：避免使用蓝光 灭菌：紫外灯,三、菌种的制作,(一)母种的制作 1、母种培养基,PDA培养基：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克， 琼脂20克，水1000亳升，PH值自然。适合以一 般母种的培养,. PDA加富培养基：去皮马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000亳升，PH值自然。适合母种的复壮培养。 . PDA综合培养基：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B1510mg，水1000亳升，PH值自然。适合草菇、灵芝、猴头菇、茯苓母种的培养。 . 母种保藏培养基：在PDA培养基中加10g蛋白胨。,粉状,条状,2、 母种培养基的制备,PDA培养基： 去皮马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂15-20g、水1000ml,马铃薯去皮，切片，称取200克，沸水煮20-30分钟，过滤，取滤汁添水至1000ml，加葡萄糖或蔗糖20克、琼脂15-20克煮熔，pH自然，常规灭菌即可。,准备工作,称量、材料预处理 按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉芽眼后称量200g，切成1cm见方的小块。琼脂剪碎后用水浸泡。,熬煮 将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而不烂。,过滤、加可溶药物 用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加 入糖,熬琼脂、定容 在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至1000ml。,母种培养基制作流程 1. 分装试管 2. 塞棉塞 3. 打捆 4. 灭菌 5. 摆斜面,（1）、装管：18 mm180 mm或20 mm200 mm的玻璃试管，分装量掌握在试管长度的1/4-1/5，原则上是摆放成斜面后，斜面的长度为试管长度的1/2-2/3。 （2）、灭菌：母种培养基灭菌时，需用1.051.1 kg/cm2的压强，温度为121，灭菌（保持121）30 min。 （3）、斜面的摆置：趁热摆好斜面,摆斜面 灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和 棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2,3、种菇的组织分离,（1）种菇的选择：外观典型、大小适中、无任何污染、7-8成熟、第12茬的子实体。 （2）接种箱与分离工具的消毒 接种箱：科达气雾消毒粉23g或高锰酸钾5g，甲醛10ml混合气雾消毒30min. 分离工具的消毒：用70-75酒精擦拭后，再在酒精灯上反复灼烧。,（3）种菇的解剖分离,纵剖（撕）菇体 尖头镊取柄盖交界处绿豆粒大的组织 放入新斜面中部,金针菇是横切菌盖上薄的菌肉或取未开伞的幼嫩子实体的菌褶片,灵芝组织分离所取的部位是菌盖边缘的白色生长圈,木耳等胶质菌类的菌肉薄，子实体经无菌水反复冲洗后，撕开子实体或用刀片将两层耳片切开，挑取一小块菌肉组织即可。,（4）种菇分离后的观察培养 将分离好的试管放入23-25的温箱中培养，2436h后开始萌发菌丝，23d后形成菌落，此时注意淘汰杂菌污染或菌丝生长希弱的试管，10d左右菌丝可长满试管，放入冰箱中储存。 选择适宜的季节做出菇试验。,4、母种的转管培养,母种的接种必须在严格的无菌条件下进行。否则将会造成严重污染，给生产造成造成巨大损失。然后将所有试管及接种器具放入接种箱里进行消毒灭菌，力求灭菌彻底。在点燃酒精灯火焰上进行操作，将菌种试管和接种用斜面培养基放在火焰旁。拨去棉塞，把消毒灭菌的接种针伸入菌种试管内，挑小块 菌种放入斜面培养基中，一支 母种可移栽3040支试管。原 始母种可转管24代。,图3-14斜面试管转管接种,培养：将移接好的试管放入20-25的温箱中培养，同时注意反复观察，清杂去劣，经10d左右菌丝可长满试管。,（二）原种的制作,1、原种培养基配方与配制, 木屑培养基：木屑78%，麸皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水适量。适用于培养平菇、木耳、香菇、猴头。 棉子壳培养基：棉子壳78%，麸皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水适量。水适量。适用于培养平菇、猴头、金针菇、鸡腿菇。,谷粒配方：稻谷98%，石膏粉2% 棉子壳谷粒配方：棉子壳50%，谷粒,49%，石膏粉1%,培养料的配制, 木屑、棉籽壳培养料的拌料配制 木屑、棉籽壳培养料按配方称量后，堆制混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水中再拌入。拌料时要控制料的含水量在60左右 。, 谷粒培养料的配制 谷粒因其营养较丰富，制作的菌种具有菌丝萌发早、吃料快、抗衰老能力强、产量高等优点，在生产中应用较多。一般是采用浸泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。 注：煮熟至将开口为度,2、装瓶 灭菌 将培养料拌匀装入菌种瓶（或袋）内、装料松紧适宜，上下一致，装料高度以齐瓶（袋）肩为宜。然后用手指在瓶的中央向下大一个小洞，以利接种定植，塞上棉塞。装好的料瓶（袋）要当天灭菌，以免培养料发霉变质。,培养基的灭菌 通常采用高压蒸气灭菌法和常压蒸气灭菌法以达到灭菌的目的。高压灭菌2小时或常压灭菌于100维持8-10小时，灭菌后培养基最好放在适温下，空白培养5-7天，以检查培养基灭菌的效果。如在此期间没有出现任何杂菌，说明灭菌效果良好。待其冷却30以下可接种。也可高压灭菌（1.52h),3、原种的接种,4、原种的培养,培养室的大小和床架数量应根据生产规模来定。 注意：适温培养，对多数食用菌而言，可保 持2025，定期检查杂菌。时间2540天 。 正常菌丝：洁白、粗壮。 杂菌：有黄、绿、黑橘红等多种颜色，且生长速度快，稀疏无力。,（三）、栽培种的制作,基本上同原种，可参照执行。 容器可用15cm30cm0.005cm聚丙烯朔料袋加套环替代。,接栽 培种,用接种匙（镊、铲）取枣大原种 放于袋的两端或瓶中料面上,返回本节,四、菌种的保藏,（一）菌种的保藏的原理及设备 1、菌种的保藏的原理：采用干燥、低温、隔氧等方法，尽可能地降低菌种的代谢活动