肿瘤标志物检.ppt

,免疫学检验,第二十九章 肿瘤标志物检验,肿瘤抗原的概念及其分类 机体的抗肿瘤免疫效应机制 肿瘤的免疫逃逸机制 肿瘤标志物的概念及常见肿瘤标志物 肿瘤标志物检测的方法,本章要点,目 录,肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一。 肿瘤的免疫学检验即通过免疫学方法检测肿瘤标志物，实现对肿瘤的早期筛选、辅助诊断、疗效考核、病情监测和预后判断等目的。,前 言,第一节 概述,一、肿瘤抗原,二、肿瘤标志物,一、肿瘤抗原,肿瘤细胞是由正常细胞转化而来，与正常细胞不同的是高速占位性增殖、浸润与转移。 肿瘤抗原（tumor antigen） 指在肿瘤发生、发展过程中新出现的或过度表达的抗原物质的总称。,1.肿瘤特异性抗原（tumor sepific antigen，TSA） 指只存在于肿瘤细胞表面，而不存在于正常相应组织或细胞的大分子物质。 2.肿瘤相关抗原（tumor associated antigen，TAA）指非肿瘤细胞特有，在肿瘤细胞和相应的正常细胞中均存在的抗原物质，只是在细胞癌变时其含量才会明显增加。,（一）根据肿瘤抗原的特异性分类,（二）根据肿瘤抗原产生的机制分类,1化学或物理因素诱发的肿瘤抗原 2病毒诱发的肿瘤抗原 3自发肿瘤抗原 4正常细胞成分的异常表达,二、肿瘤标志物,肿瘤标志物（tumor marker，TM） 指在恶性肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞合成、分泌，或是由机体对肿瘤细胞反应而产生和（或）升高的、可预示肿瘤存在的一类物质，存在于血液、体液、细胞或组织中。,（一）肿瘤标志物的概念,（二）理想的肿瘤标志物,（三）影响TM浓度的因素（7个）,第二节 机体的抗肿瘤免疫效应机制,非特异性抗肿瘤免疫,特异性抗肿瘤免疫,体液免疫-次要,细胞免疫-主要,非特异性抗肿瘤免疫,补体介导的肿瘤细胞溶解； NK细胞的杀瘤效应； 巨噬细胞的杀瘤效应； 其它如中性粒细胞、细胞因子如-IFN、穿孔素(perforin) 和TNF等效应分子的作用 。,免疫系统可产生抗肿瘤抗原的特异性抗体，但此效应并非机体抗肿瘤的重要机制。,1.补体依赖的细胞毒作用（CDC） 2.抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC) 3.抗体的免疫调理作用 4.抗体的封闭作用 5.干扰肿瘤细胞的黏附作用,特异性抗肿瘤免疫,一、抗肿瘤的体液免疫效应机制,二、抗肿瘤的细胞免疫效应机制,（一）T细胞,（二）NK细胞,（三）巨噬细胞,（四）树突状细胞,第三节 肿瘤的免疫逃逸机制,一、肿瘤细胞有关方面的因素,二、宿主免疫系统有关的因素,第四节 常见的肿瘤标志物,一、胚胎抗原类肿瘤标志物 二、糖链抗原类肿瘤标志物 三、酶类肿瘤标志物 四、激素类肿瘤标志物 五、蛋白质类肿瘤标志物 六、其他常用的肿瘤标志物,一、胚胎抗原类肿瘤标志物,（一）癌胚抗原 （carcinoembryonic antigen，CEA）,在胚胎期主要存在于胎儿的胃肠管、胰腺和肝脏，出生后组织内含量很低。 在胃肠道恶性肿瘤，乳腺癌、肺癌及其他恶性肿瘤患者亦可检出。,参考值：健康成人CEA浓度2.5g/L（CLIA）。,临床应用时，不建议将CEA用于对健康人群进行早期结直肠癌的筛查。术前CEA水平可与其他因素一起联合用于手术方案的选择，对于CEA水平升高的患者需评估是否存在远处转移，不建议根据术前CEA水平选择患者辅助化疗方案。,一、胚胎抗原类肿瘤标志物,（二）甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）,参考值：健康成人20g/L（CLIA）。,AFP在胎儿期分别由卵黄囊和胎肝合成，在胎儿出生后18个月，AFP浓度下降。 正常成人肝细胞几乎不产生AFP。当肝细胞或生殖腺胚胎组织等癌变时AFP大量表达。,AFP主要用于辅助诊断原发性肝癌及筛查高危人群，也用于肝癌的疗效及预后评估。 持续一个月以上AFP500g/L，并能排除妊娠、活动性肝炎、睾丸癌或卵巢畸胎瘤等，意味着存在肝癌。良性肝脏疾病如肝炎、肝硬化AFP也可升高，但95%小于200g/L。,一、胚胎抗原类肿瘤标志物,（三）胰胚胎抗原（pancreaticoncofetal antigen，POA）,在胚胎期主要存在于胎儿的胃肠管、胰腺和肝脏，出生后组织内含量很低。 在胃肠道恶性肿瘤，乳腺癌、肺癌及其他恶性肿瘤患者亦可检出。,参考值：健康成人CEA浓度2.5g/L（CLIA）。,糖链抗原（carbohydrate antigen，CA）是由于细胞膜糖蛋白中的糖基异常形成的抗原。 正常细胞膜表面有丰富的糖蛋白，正常细胞恶变时，糖蛋白发生变异，形成了与正常细胞不同的特殊抗原，糖链抗原通常存在于肿瘤细胞的表面或由肿瘤细胞分泌。,二、 糖链抗原类肿瘤标志物,CA 125,存在于胎儿体腔上皮分化而来的心包膜、腹膜及胸膜等组织。 是上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物，在浆液性子宫内膜样癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者的亦可明显升高，但在黏液卵巢癌不表达。,CA19-9,存在于胰腺、胆道、胃、肠、子宫内膜、涎腺上皮上的黏蛋白型糖蛋白。 正常血清中含量较低，但在多种消化系肿瘤大量表达。 胰腺癌和结直肠癌的标志物。血清CA19-9阳性临界值为37kU/L。8595胰腺癌患者CA19-9为阳性。,CA 15-3,抗原决定簇是由糖和多肽两部分组成的糖蛋白类抗原。 主要在乳腺癌、肺腺癌、胰腺癌等腺癌细胞表达。 约3050的乳腺癌患者CA15-3明显升高，为乳腺癌术后复发监测的最佳指标。,CA15-3在乳腺癌治疗中的动态变化,三、酶类肿瘤标志物,细胞内的酶因肿瘤细胞破坏或改变细胞膜的通透性，而释放至血液； 肿瘤细胞代谢异常，使某些酶或同工酶的合成增加； 肿瘤组织压迫和浸润，导致某些酶的排泄受阻，患者血清中的酶活性异常升高。,前列腺特异性抗原（prostate specific antigen，PSA） PSA是从前列腺组织中分离出的丝氨酸蛋白酶，相对分子质量34KD，仅存在于前列腺上皮细胞和精液内，PSA在正常男性含量2.5g/L（RIA法、ElA法）。,前列腺特异性抗原,参考区间,T-PSA4.0g/L,F-PSA0.8g/L,CLIA,PSA是目前前列腺癌最理想的TM，用于前列腺癌的筛查、分期及预后评估、疗效判断、复发监测。 目前尚无足够充分的依据推荐采用年龄特异的PSA值参考范围。,神经元特异性烯醇化酶,神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase, NSE） 为烯醇酶的异构体，是一种酸性同工酶，是参与甘油分解的最后一个酶，存在于神经元和神经内分泌组织中。,NSE是神经母细胞瘤和小细胞肺癌的最主要的TM。 NSE对小细胞肺癌的敏感度为80，特异性为8090，是目前公认的小细胞肺癌高特异性和高灵敏性的TM。 嗜铬细胞瘤、胰岛细胞瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤等肿瘤也可使NSE升高。,-L-岩藻糖苷酶,-L-岩藻糖苷酶（-L-fucosidase，AFU）是溶酶体酸性水解酶，可催化含岩藻糖基的糖蛋白和糖苷的分解代谢，广泛存在于人体各组织细胞溶酶体中。,AFU是对原发性肝细胞性肝癌临床诊断的又一敏感、特异的新TM。 血清AFU活力在某些转移性肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢或子宫癌患者间有重叠，在某些非肿瘤性疾病如肝硬化、慢性肝炎、消化道出血等也可轻度升高。 AFU和AFP的联合检测，可提高原发性肝癌的诊断率至90%以上。,四、激素类肿瘤标志物,正常情况下不产生激素的某些组织，在细胞恶变时产生并释放一些肽类激素（异位内分泌激素），导致相应症候群的出现。 这些内分泌激素亦可作为肿瘤相关标志物。,人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin，HCG） 妊娠期胎盘滋养层细胞分泌的糖蛋白激素，有和二种亚基。 亚基结构与卵泡刺激素（FSH）、黄体酮生成素（LH）和促甲状腺素（TSH）相似。 亚基则是其特有的，以特殊的免疫试验可测定HCG的亚单位。,人绒毛膜促性腺激素,参考区间,阴性5U/L,阳性25U/L,MEIA,微粒子酶免疫分析法,-HCG是公认的诊断滋养层细胞肿瘤敏感性最高的标志物。 非精原细胞性睾丸癌70轻度升高，并往往和AFP同时升高。 部分卵巢癌、胆囊癌、乳腺癌、胃肠道癌、肺癌亦可见-HCG升高。 炎症、十二指肠溃疡、肝硬化等良性病变-HCG可轻度异常。,儿茶酚胺类物质,儿茶酚胺类物质（catecholamines，CA）结构中含有儿茶酚的一类物质的总称，包括肾上腺素、去甲肾上腺素、香草扁桃酸（VMA）等。 70神经母细胞瘤VMA升高。 约70肺癌病人ACTH增加。 部分胰腺癌、乳腺癌、胃肠道癌症患者可见大分子量的ACTH增加。,五、蛋白质类肿瘤标志物,大多数实体瘤是由上皮细胞衍生而来，当肿瘤细胞快速分化、增殖时，一些在正常组织中不表现的细胞类型或组分大量出现，如作为细胞支架的角蛋白，成为肿瘤标志物。,细胞角蛋白在正常及恶性的上皮细胞中起支架作用,有20个亚型(CK1CK20)，肿瘤细胞中富含CK18和CK19。 CK19主要分布在单层上皮上，当CK19片段被分泌释放进入血液循环，该可溶性片段即为Cyfra 21-l 。,细胞角蛋白19,血清Cyfra 21-1是非小细胞肺癌最有价值的肿瘤标志物，尤其对鳞状细胞癌的早期诊断、疗效判断及预后监测有重要意义。 Cyfra 21-1可用来诊断肺癌、鳞癌,对非小细胞肺癌有较高特异性。 Cyfra 21-1水平和肿瘤的恶化程度，转移相一致。 Cyfra 21-l也可用于膀胱癌的辅助诊断。,铁蛋白（Ferritin，FE）由24个亚基组成，其亚基分成H和L两类，胎儿组织和癌组织中以H型为主。 为非器官特异性标志物，存在于各种组织和体液中，病理情况下释放入血的量增加。,铁蛋白,男：20250g/L,女：10120g/L,RIA、EIA,参考区间,六、其他常用的肿瘤标志物,第五节 肿瘤标志物的检测和联合应用,肿瘤标志物的检测技术可分为免疫学、生物化学、免疫组织化学、流式细胞和分子生物学技术等。 大部分单个肿瘤标志物不能满足临床需要，现提倡肿瘤标志物的联合应用。,一、肿瘤标志物的检测技术,免疫学 测定技术,免疫学测定技术灵敏度高、特异性好，既可定性又可定量，主要用于血液和体液中TM的测定。,生物化学 测定技术,（1）生化比色法：AFU、-GT等 （2）电泳法：酶和同工酶如ALP及其同工酶，LD及其同工酶等,血清TM检测一般采用免疫学和生化方法。 细胞内TM采用免疫组化和流式细胞技术。,免疫组化 测定技术,用于组织切片，穿刺细胞及脱落细胞的检查，可确定瘤细胞的组织类型与分化程度，判断肿瘤的恶性程度与预后。,流式细胞 测定技术,检测肿瘤细胞的表面标志，对恶性淋巴瘤及白血病的诊断、分型有重要意义，可为确定临床治疗方案提供依据。,分子生物 测定技术,以DNA重组技术、基因扩增与杂交等手段，分析基因的结构与功能改变，研究肿瘤的诊断和发病机制。,大部分单个肿瘤标志物敏感性或特异性偏低，不能满足临床需要。 为提高TM辅助诊断价值和确定何种TM可作为治疗后的随访监测指标，合理选择几项灵