兔、豚鼠实验动物的一般操作技术2卫生毒理学.ppt

II实验动物的一般操作技术（兔、豚鼠）,08级硕士 李志芳,2,3,一、实验目的,1 了解动物实验在毒理学和预防医学中作用和地位。 2了解实验动物正确操作一般原则的意义。 3. 掌握兔、豚鼠实验动物的基本操作技术。,4,二、实验内容,（一）动物的选择 选择健康的实验动物，检疫12周后，进行实验。 1.外观：体形丰满，被毛浓密有光泽，紧贴体表、眼睛明亮，反应行动灵活。 2.体重、年龄：动物的年龄常按体重大小来估计。 豚鼠 兔 急性： 450700g 2.02.5Kg 慢性（亚慢性） 150200g 1.51.8Kg,5,内容,（二）动物的抓取 正确地抓取和固定动物是为了在不损害动物健康，不影响观察指标，防止被动物咬伤、抓伤的前提下，确保动物实验顺利进行。 1.豚鼠： 豚鼠胆小易惊，抓取时要稳、准、迅速，先用手掌迅速扣住豚鼠，抓住其肩胛上方，将手张开，用手指环握住颈部，另一只手托住臀部即可。,6,2.兔： 从笼内提兔时，轻轻打开笼门，将手伸入笼内，从头前阻拦它跑动，将兔耳放入右掌心内，右手抓兔颈部的皮毛提起，左手托住臀部或腹部，让体重的大部分集中在左手上。 注意：在实验工作中常用兔耳采血、静脉注射，所以家兔的两耳尽量保持不受损伤，不要抓耳。,7,（三）性别鉴定 1.豚鼠： 用一只手抓颈部，另一只手扒开靠生殖器孔的皮肤，在圆孔中露出性器官突起，则出现三角形圆隙，成年鼠有两个乳头。 2.兔： 成年：圆孔中露出圆椎形向下弯曲的阴茎，并且两侧有裸露的睾丸。：为一条朝向尾巴的长缝呈椭圆形间隙，有乳头812个。,8,（四）实验动物的标记方法: 实验动物常需要编号标记以示区别。编号的方法很多，根据动物的种类、数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法。 兔： 挂牌法 刺纹法 剪毛法 染色法 豚鼠：挂牌法 刺纹法 染色法 剪耳法,9,挂牌法：该法适用于狗等大型动物。 打号法：该法适用于耳朵比较大的兔、狗等动物。用刺数钳(又称耳号钳)将号码打在动物耳朵上。 刺纹法：该法适用于大小鼠、豚鼠等。用7号或者8号针头蘸碳素墨水在动物耳朵、前后肢、尾巴等部位刺入皮下，留下黑色标记，在实验动物数量少的情况下，也可用于兔、狗等动物。 剪毛法：该法适用于大、中型动物，如狗、兔等。此法编号清楚可靠，但只适于短期观察。 剪耳法：此种方法常在饲养大量动物时作为终身号采用。 化学药品涂染动物被毛法（染色法）： 常用的染料：苦味酸酒精饱合溶液（黄色）；5%中性红或品红溶液（红色）；小鼠和大鼠用得多。,10,（五）实验动物随机分组方法: 各组非处理因素齐同，防止非处理因素干扰处理因素的效应。 1.将动物按性别，用感应量为0.1g的天平称重，编号，按体重从大到小排序。 2.按实验设计要求进行分组。常见的实验设计方案是配伍设计、 完全随机分组设计和随机区组设计。随机方法有：随机数字表和随机分组表。常用“Z”字型分组法。 3.各组之间尽量齐同，同组、同性别动物体重变异系数小于10%。不同组间同性别动物体重变异系数小于5%。 4.如对性别无特殊要求，宜选用雌雄动物各半，单独分组后雌雄合并。（常采用每组20只，雌雄各10只）,11,（六）实验动物染毒途径和方法: 根据实验目的、实验动物种类，最关键是要参照人接触受试物途径。 例： 经口药品、保健品、食品 采用经口染毒 静脉药品 采用静脉、腹腔染毒 农药、化妆品 经皮染毒 易挥发物质 经呼吸道染毒,12,1. 经口染毒： 喂饲:将受试物掺入动物饲料或饮水中供实验动物自行摄入。 优点：符合人类接触受试物的实际情况； 但缺点多：适口性差的受试物，实验动物拒食；易挥发和水解的受试物不适用。而且，实验动物应该单笼喂饲，以食物消耗量计算其实际染毒剂量。,13,灌胃 适用于小鼠、大鼠、兔、犬等动物。 优点：剂量准确。 缺点：工作量大，并有伤及食管或误入气管的可能。 吞咽胶囊 适用于大动物。如犬等。将一定剂量的受试物装入胶囊中，放至犬的舌后部，迫使动物咽下，此法剂量准确，适用于易挥发、易水解和有异味的受试物。,14,例如： 兔子灌胃：将兔子固定后，一手按住头部，另一手将开口器（中间有一小孔）开口，将舌头压在下面，将胃管经小孔穿入，沿咽后壁插入食管，遇到阻力即可停止，一般可插入25cm，然后将导管放入有水烧杯内，若无气泡产生，则可进行灌胃，否则重新插胃管。最大灌胃容量5.0ml/Kg。,15,2. 经皮肤染毒：经皮染毒的目的有两种。一种是经皮染毒毒性实验；另一种是皮肤刺激和致敏实验。 剪毛法 拔毛法 脱毛法 脱毛法（1） 先用剪刀将动物脊柱两侧的长毛剪短，左右各一块，一块做测试，另一块做对照。再用电剪逆着毛的方向剪，不要损伤皮肤。 （2）取脱毛剂在剪毛区均匀地涂一薄层，用塑料刮板逆被毛的方向梳理，让脱毛剂与被毛充分接触，隔几分钟，有被毛开始脱落后用纱布沾水轻轻擦洗，并且要清洗干净，因脱毛剂有刺激性。 （3） 放置24小时后，观察动物皮肤是否有损伤。,16,3. 经呼吸道染毒： 静式吸入染毒，动式吸入染毒，气管内注入染毒。 4. 注射染毒 静脉注射： 兔：耳缘静脉注射 兔耳中央为动脉，耳缘为静脉。两人配合操作，一人按住耳根阻止静脉回流使耳缘静脉充盈。另一人进行静脉注射，绷紧皮肤，消毒后，持头皮针从静脉远端进针，回抽有血，固定针头，缓慢推入药液，拔针，压迫数分钟止血。 豚鼠：股静脉注射（两人配合操作） 一人固定豚鼠，另一人剪除后退的被毛，消毒，绷紧皮肤，持头皮针从静脉远端进针，回血后，固定针头，缓慢推注药物，拔针，压迫止血。,17,皮下注射：左手拇指和食指提起皮肤，将连有针头的注射器刺入皮下。注射部位一般在大腿内、外侧，背部、耳根部、腹部。 皮内注射： 肌内注射： 腹腔注射：（以大、小鼠为例）,18,（七） 生物标本采集 根据实验观察指标采集生物标本，如血液，尿，粪便和胆汁等，血液是常用的生物标本。 血液采集： 1.兔耳缘静脉采血法：（用头皮针，真空采血管）方法同静脉注射（仅限取少量血） 2.兔心脏采血法 3.兔耳中央动脉取血,19,（八）实验动物的处死方法 1.麻醉致死法：豚鼠 采用化学物质如：氯仿、乙醚、CO2 2.麻醉后急性放血法：麻醉后，剪断股动脉，血液大量流出，动物迅速死亡。 3.空气栓塞法：兔等大动物。 4.化学药物致死法： 兔、狗、猴等大动物 常用10%KCl或10%甲醛溶液进行静脉注射。 5.脊椎脱臼法： 例：兔子： 空气栓塞法：用注射器经耳静脉注入10ml空气，几分钟之内兔子死亡。 豚鼠： 脊椎脱