DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制.doc

DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制2M Tris-HAc100mM EDTApH8.5配 制 量：配制方法：1L1. 称取Tris碱242.3g，置于烧杯中2. 再称取EDTA固体29.3g或Na2EDTA2H2O固体37.2g3. 加入约700ml ddH2O，溶解完全4. 加入57ml的HAc，充分搅拌5. 用HAc调pH至8.56. 定容至1L，室温保存50TAE缓冲液pH8.5配方：890mM Tris-H3BO320mM EDTApH8.3配 制 量：配制方法：1L1. 称取Tris碱53.88g，EDTA固体2.93g或Na2EDTA2H2O固体3.72g，H3BO3 27.5g置于烧杯中2. 加入约700ml的ddH2O，溶解完全3. 调pH至8.34. 定容至1L，室温保存5TBE 缓冲液pH8.3配方：10mg/ml EB配 制 量：配制方法：100ml1. 称取1g EB固体于专用容器中2. 加入100ml的ddH2O，搅拌数小时至溶解完全3. 转移至棕色瓶中，4避光保存注意：EB为强致癌物质，专用容器小心操作EB溴化乙锭配方：30mM EDTA36%(V/V)丙三醇0.05(W/V)溴酚蓝pH7.0配 制 量：配制方法：100ml1. 用移液器吸取6ml EDTA (500mM，pH8.0)加入约50ml ddH2O中2. 再吸取5ml 1%的溴酚蓝3. 量取36ml丙三醇4. 用2N NaoH调pH至7.05. 定容至100ml，4保存6上样缓冲液Loading Buffer配方：10mM EDTA50%(V/V) 丙三醇0.25%(W/V) 溴酚蓝配 制 量：配制方法：100ml1. 用移液器吸取2ml EDTA (500mM，pH8.0)加入约40ml ddH2O中2. 再称取250mg的溴酚蓝3. 量取50ml丙三醇4. 定容至100ml，4保存10上样缓冲液Loading Buffer配方：1%(W/V)溴酚蓝配 制 量：配制方法：100ml1. 称取1g溴酚蓝置于烧杯中2. 加入约80ml的ddH2O，溶解完全3. 定容至100ml4. 转移至棕色容器中5. 避光，4保存1%(W/V)溴酚蓝配方：10%(W/V) AP配 制 量：配制方法：50ml1. 称取5g过硫酸铵置于烧杯中2. 加入ddH2O定容至50ml3. 分装于1.5ml离心管中4. -20保存10%(W/V)过硫酸铵配方：29.0%(W/V) Acr1.0%(W/V) Bis配 制 量：配制方法：1L1. 称取丙烯酰胺固体290g置于专用的烧杯中2. 再称取10g甲叉双丙烯酰胺3. 加入约500ml ddH2O，充分搅拌，溶解完全后定容至1L4. 用0.45um滤纸过滤除杂5. 转移棕色瓶中，4避光保存注意：丙烯酰胺有毒，需小心操作，专用容器配制30%(W/V)丙烯酰胺储液(DNA用)配方：1. 0.5M EDTA(pH=8.0):在800ml蒸馏水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na22H2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH调解pH值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。最后定容至1L。高压灭菌。2. 5 XTBE:Tris碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5M EDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L。高压灭菌。（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。1 X TBE:5 XTBE缓冲液与蒸馏水按 1: 4稀释就OK。配置方法方法1：1%的溴酚蓝将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。方法2：0.05%的溴酚蓝配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法：0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围pH2.84.6（黄蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。方法3：1溴酚蓝加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。相关词条甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠Western上样缓冲液配制整理 6SDS样品缓冲液4TrisCl/SDS,PH6.8(0.28mol/L)7ml 甘油30%(V/V)3.0ml（3.8g）甘油密度为1.2613g/cm3 (20/4)SDS 1%（m/V）1g溴酚蓝0.0012%(m/V)1.2mgDTT (0.5mol/L)0.93g如果需要，加去离子蒸馏水至10ml；等量分装成0.5ml并于-70贮存 8TrisCl/SDS,PH6.8Tris-base（0.5mol/L）6.05g40ml水中溶解后以1mol/L盐酸调至PH6.8，补加至100ml。HCl调至6.80.45um滤膜过滤，再加0.4gSDSSDS0.4%(m/V)0.4g4可保存1月丽春红S染色液丽春红S 0.2%SDS Loading buffer210ml410mlTris-HClPH=6.80.125 M1.25ml（1mol/L）0.25 M2.5ml(1mol/L)SDS4%0.4g或者(10%SDS4ml)8%0.8g2-ME25%10%DTT30.15 M1.5ml（1mol/L）0.3 M3ml（1mol/L）Glycerol20%2ml30%3mlBromphenol blue.01%0.001g.02%0.002g