D-Dimer.doc

D-二聚体（D-Dimer）测定（双向测流免疫法）1 实验原理检验时样品中的待检物首先与化学偶合物垫上的特异性抗体1偶合物发生免疫反应形成免疫复合物，其后免疫复合物随着血样在硝基纤维素膜上层析流动，当免疫复合物层析至硝基纤维素膜上的检测区时，与已预先包被在硝基纤维素膜上的特异性抗体2发生反应从而被固定在硝基纤维素膜的检测区上。因此待检物越多，测试带上的复合物越多，条带上的光密度值就越高。反应结束后经过SSJ-2多功能免疫检测仪的分析处理，反映样本中待检物的浓度。同时，在检测过程中，对照偶合物也会随缓冲液在硝基纤维素膜上层析，当层析至硝基纤维素膜的对照区（内控带1和内控带2）时，对照偶合物会与预先包被在硝基纤维素膜上的特异性抗体发生反应从而被固定在对照区上。当样品中不含待检物时，则只在对照区（内控带1和内控带2）显示两条对照带。任何情况下若无对照带显色或显色强度不够，则质控失控，需查明原因重新检测。当反应结束后，SSJ-2多功能免疫检测仪将对检测条带的光密度进行分析，并将所分析得到的结果进行运算，从而得到相对光密度值（RI）。然后检测仪根据已预先设置在检测仪内的标准曲线对检测物的浓度进行计算并显示结果。2 标本采集详见采样手册。3 标本存放3.1 本试剂适用于采用EDTA.K2或肝素抗凝的血清或血浆。3.2 样本采集完后，请立即使用。不应将样本在室温条件下长时间放置。 使用血清或血浆样本检测时，应尽快分离出血清或血浆，避免溶血， 已严重溶血的样本请停止使用。3.3 血清或血浆样本在28条件下可以保存三天，若长期保存应放置在 20以下保存，避免反复冻融。3.4 所有的样本检测前必须恢复至室温才可使用。4 标本运输 执行标本运送制度。5 标本拒收的标准执行不合格标本退回记录单。6 实验材料6.1 瑞莱生物工程（深圳）有限公司D-二聚体（双向测流免疫法）检测试 剂盒。6.1.1 试剂组成成分D-二聚体检测试剂20人份（铝箔袋包装）缓冲液A（一般化学试剂）1瓶（3.5mL）D-二聚体试剂说明书1份6.1.2 储存条件及有效期 室温（1530）、干燥、避光处保存，有效期18个月（生产日期 至失效日期）。6.1.3 试剂质量控制 内部质控：每个试剂盒包含有两条质控带（低质控带和高质控带）， 伴随每次检测过程，确保每次加样的准确性，防止因为加样或其他 原因引起的样本量问题而出现的错误结果。 外部指控：对于有效期内的每一批产品，瑞莱生物工程（深圳）有 限公司质量部定期对留样试剂的性能进行评估，并提供质控报告。 另外，可以通过购买瑞莱生物工程（深圳）有限公司D-二聚体专用 质控品或实验室自制质控品对产品进行外部质控，建议各实验室根 据具体的实际情况安排产品的外部质控周期，以保证报告结果的准 确性。7 仪器设备7.1 仪器7.1.1 仪器名称：SSJ-2多功能免疫检测仪7.1.2 仪器厂家：瑞莱生物工程（深圳）有限公司7.1.3 仪器质量控制 SSJ-2多功能免疫检测仪通过Relia 2操作软件自动检测仪器元器 件（包括光源的校准及稳定性检测、检测条带的自动识别等），确保 仪器运行参数正常。瑞莱生物工程（深圳）有限公司配置的标准测 试盒可以用来辅助控制仪器的运行状况。8 操作步骤开启SSJ-2多功能免疫检测仪仪器电源登录电脑上Relia 2软件（初始用户名：admin；密码：password）LED灯变绿表示软件、仪器串联成功轻按仪器外壳上LED灯或软件相对应区域打开通道拆除D-二聚体铝箔外包装，将试剂盒卡入通道托盘内（即拆即用）软件自动识别试剂盒条形序列码成功识别后软件将自动对应相应D-二聚体标准曲线将自动弹出的病人信息栏依次填写完毕后点击“确定”通道自动弹出在试剂盒Port 1端滴加40L缓冲液通道自动关闭40秒后重新弹出在试剂盒Port 2端滴加100L样本（务必在等待时间4分钟内完成）通道自动关闭进入20分钟孵育反应孵育反应倒计时结束后自动弹出报告结果9 计算方法9.1 光密度值计算：光密度值=log10(底色/反射系数)9.2 回归方程模型建立：y=D+(A-D)/1+(x/C)B10 线性范围及临床参考值10.1 线性范围：5005000ng/mL10.2 临床参考值：通过对303例健康者的血样进行检测，得出98.26%的 健康者血中D-Dimer的浓度小于1200ng/mL。 因D-Dimer的正常含量与年龄存在很大关系，故依据年 龄分段参考表如下分年龄段阴性排除参考值不分年龄段阴性排除参考值阴性预测值 99 %，阳性预测值 30%阴性预测值 95 %，阳性预测值 40%50岁1500ng/mL2400ng/mL5060岁1800ng/mL6070岁2100ng/mL7080岁2400ng/mL80岁2700ng/mL11 临床意义人体纤维蛋白溶解系统，是人体最重要的康宁系统，对保证血管壁的正常通透性，维持血液的流动状态和组织修复起到极为重要的作用。纤溶系统有四个主要成份：纤溶酶原、纤溶酶原激活剂（如tPA）、纤溶酶和纤溶酶抑制物。当血液凝固时，纤维蛋白形成凝结块，tPA激活后，使纤溶酶原被转化为纤溶酶，纤溶酶可溶解凝血中的纤维蛋白凝结块。其降解产物，即各种可溶性蛋白片段组成为：X-寡聚体（X-Oligomer）、D-二聚体（D-Dimer）、中间片段（Intermediate fragments）和片段E（Fragment E）。D-二聚体来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块。D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子X交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物，是确定体内有无血栓形成及继发性纤溶的指标。其含量变化可作为体内高凝状态和纤溶亢进的标志。大量研究表明，静脉血栓栓塞病人、肺栓塞病人及深静脉栓塞的病人，体内循环的D-二聚体含量明显增加。D-二聚体的主要临床意义在于作为排除静脉血栓栓塞的诊断方案，其中以深静脉血栓（DVT）、肺栓塞（PTE）和弥散性血管内凝血（DIC）为主要诊断目标。另外急性心肌梗死（AMI）和脑血栓、纤溶亢进、白血病、溶栓治疗、肝脏疾病、外科手术、妊娠、组织损伤、恶性实体肿瘤等均会引起D-二聚体含量的增加。12 性能指标12.1 准确性：用准确性1500ng/mL的校正品检测，测定结果在1275 1725ng/mL。12.2 剂量反应曲线的线性：在5005000ng/mL的范围内，剂量反应 曲线相关系数（r）应不低于0.9900。12.3 精密度：批内精密度（CV%）应小于15%； 批间精密度（CV%）应小于15%。12.4 灵敏度：测定结果应小于500ng/mL。12.5 特异性：用浓度为2mg/mL的纤维蛋白原特异性质控品检测，结果应 小于1000ng/mL。13 超出范围的结果处理13.1 根据D-Dimer的临床意义可见，D-Dimer主要为静脉血栓类疾病阴性 排除作用，其阳性结果超出线性范围对临床诊断已无实质性意义。13.2 若必须测出实际值，则将样本以0.9%生理盐水稀释后重新测定，最 终结果以测定值为标准乘以稀释倍数得出。稀释过后的结果在精确 性、重复性方面均无法得到保证。14 方法学局限性14.1 高浓度的甘油三酯、胆红素及由溶血导致的高浓度血色素会影响到样 本以及偶合物在硝基纤维素膜上的层析过程，从而导致可能出现错误 的检测结果。因此对于严重脂血（甘油三酯的含量超过15mmol/L， 胆固醇的含量超过4mg/mL）或严重溶血（血红蛋白的含量超过 600g/L）或严重黄疸（胆红素的含量超过4mg/mL）的样本，请勿用 于检测。14.2 由于抗原、抗体反应的血清学方法的局限性，故本检测试剂结果只能 提示全血/血清/血浆中的D-Dimer水平，而不能作为临床诊断的唯 一依据。15 注意事项15.1 本试剂仅用于体外检测。15.2 请勿采用严重溶血或脂血以及黄疸的样本。15.3 单包装破损、标志不清晰、超过有效期的试剂，请勿使用。15.4 请严格按说明书操作，检测开始后，不能中途终止，如果中途终止则 此次检测不可再恢复。若需重新检测，必须更换新试剂重新检测。15.5 无效结果必须重测。15.6 每批试剂都有相应的参数表，必须更新。否则，新批产品的试剂将不 被仪器识别