微生物培养基质量控制技术.ppt

,微生物检验培养基质量控制技术,培养基质量的重要性,培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。,主要内容,培养基制备、使用、贮存中的注意事项培养基质量控制2010版药典附录实例（培养基质量对实验结果的影响）CHP与USP的异同点同行的方法介绍新技术部分菌种在培养基上的典型特征,培养基制备过程中的注意事项,培养基的水化培养基水化时不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长；配制培养基最常用的溶剂是纯化水,不能含有任何可能抑制或影响微生物生长的物质；,培养基制备过程中的注意事项,培养基的溶解在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均匀,使用电炉等设备煮沸培养基时,应用小火加热,并边加热边搅拌,避免培养基焦化或爆沸溢出。,培养基制备过程中的注意事项,培养基的灭菌已配制好的培养基必须立即灭菌湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间,培养基制备过程中的注意事项,培养基的pH微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。调整培养基的pH,应用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调整pH，一般灭菌前比最终pH高0.20.3。,培养基制备过程中的注意事项,培养基的保温灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。,培养基使用过程中的注意事项,培养基的接种平板在接种使用时,表面必须无明显潮湿水珠；对于保存的培养基,需待温度回复至室温后才可使用,并且使用前应检查；,培养基贮存过程中的注意事项,干燥培养基应遵循先入先出的原则；贮存于阴凉干燥处,避免强光直射；,培养基贮存过程中的注意事项,已配制的培养基建议平板倾注后立即使用；在平板上标上制备日期和/或有效期和名称；固体培养基灭菌后的再融化只允许一次；,实例,三糖铁培养基（TSI）未校正pH时，不同厂家的TSI培养基产硫化氢强度不一；校正pH7.5后，各培养基硫化氢反应均有改善,不同厂家的TSI培养基产硫化氢强度仍不相同；,实例,三糖铁培养基（TSI）由于培养基pH太低,本身就是黄色,细菌生长后下层仍为黄色,而斜面变为橙红色,易误判断为下层“变为黄色”。由此定为发酵菌，造成误判；,培养基质量控制（2010版药典）,培养基适用性检查,计数培养基,控制菌检查用培养基,计数培养基适用性检查,对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。,计数培养基适用性检查,大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉白色念珠菌,营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基,计数培养基适用性检查,结果判定被检培养基上的菌落平均数对照培养基上的菌落平均数菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致计数培养基,70%,控制菌检查用培养基适用性检查,促生长能力抑制能力指示能力,检查项目,控制菌检查用培养基适用性检查,增菌培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。,控制菌检查用培养基适用性检查,固体培养基促生长能力检查：取试验菌各0.1ml（含菌数50100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。被检培养基与对照培养基生长的菌落大小形态特征应一致。,控制菌检查用培养基适用性检查,培养基抑制能力检查：接种不少于100cfu的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养，试验菌应不得生长。,控制菌检查用培养基适用性检查,固体培养基指示能力检查：取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。,控制菌检查用培养基适用性检查,液体培养基指示能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。,培养基质量控制（2010版药典）,实验室配制的培养基的常规监控项目pH适用性检查试验定期的稳定性检查以确定有效期,培养基质量控制（CHP与USP的异同点）,计数培养基的适用性检查：CHPUSP菌种的选择大肠埃希菌铜绿假单胞菌结果判定比值大于70%1/22培养基营养琼脂培养基大豆消化酪素培养基玫瑰红钠琼脂培养基沙氏葡萄糖培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD),培养基质量控制（CHP与USP的异同点）,控制菌检查用培养基的适用性检查：CHP与USP方法基本一致，检查用培养基不同。,同行的方法介绍,培养基质量控制理化试验方法包括测定培养基的pH值和凝胶强度微生物学方法包括固体培养基和液体培养基,同行的方法介绍,固体培养基定量质控采用倾注平板法、涂布法、划线法(半定量法)、改良的MilesMisra法等测定生长情况；定性质控评价目标微生物非目标微生物接种以后的生长情况；,同行的方法介绍,液体培养基采用定量稀释法,用目标菌和杂菌的混合菌株评价选择性增菌培养基的选择性；利用OD值评价液体培养基生长率；,同行的方法介绍,分值计算质量比较,新技术介绍,BioBall是一个很小的水溶性球状物，包含了数量精确的微生物个体，它可以使微生物质控中的定量控制达到非常高的精确度。,新技术介绍,BioBall目前可以提供超过25种菌株；可应用于培养基质控、方法验证等需要定量质控的各个领域；,新技术介绍,BioBallSingleShot提供1次精确接种量BioBallMultiShot-550提供10次精确接种量,新技术介绍,BioBallSingleShot每个BioBallSingleShot都含28至33cfu；标准误差小于或等于3cfu；,新技术介绍,BioBall与常规稀释法相比的优势使用方便；精确的cfu数量；不同批次间cfu数量稳定；减少了由于接种量的变化，造成的质控失败的风险；,BioBall,典型特征,大肠杆