262CryIA(c)-2A-gna融合基因、CryIA(c)和CryIA(b)单价基因遗传转化甘蔗的研究-硕士论文

C r y L 4 俐一2 , 4 - g n a 融合基因、C r y l A 纠和C r y I A 仰单价基因遗传转化甘蔗的研究 n “l - - n - n n I I l “I I - AT h e S i S R e s e a r c ho nt h eC r y l At c ) 一2 A - g n af u s i o ng e n e ，C r y l A ( c ) a n dC r y l A ( b ) T r a n s f o r m a t i o ni ns u g a r c a n e F o rt h eP h D D e g r e ei nA g r o n o m y B yF e n gC u i l i a n g r i c u l t uracollegagricultur a lc o l l e g e H a i n a nU n i v e r s i t y S u p e r v i s o r ：Z h a n gS h u z h e n A c a d e m i cT i t l e ：P r o f e s s o r S i g n a t u r e A p p r o v e d J u l y , 2 0 1 0 海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。 除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。 对本文的研究做山重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人 承担。 ：理牲 嗍冲年6 月多日 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有 关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学 位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和 汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属海南大学。 保密论文在解密后遵守此规定。 论文作者签名： 日期：扣卜年莎月 本人已经认真阅读“C A L L S 高校学位论文全文数据库发布章程 ，同意将本人的学位论文提交 “C A L L S 高校学位论文全文数据库岁中全文发布， 埕銮丘造厦! 旦坐生i 旦= 生i 堕三生苤盔。 论文作者签名赡翠邑 日期：彦口f 一年6 月日 并可按“章程”中规定享受相关权益。旦壶途塞 翩张。杂衙力 日期：弘压年月岁自 丽唑私鼎名压躲2 彩已日一 O y M 俐一2 A - g n a 融俞圳儿剃俐和C r y M 例巾价肚川! ! ! l j ：宰化。”烈! 的f c J l ：究 _ 咖啪啸靠订I l I n “枷舅吖嗍舶棚肿睢m l 岫I 嘣m 膏哪n 啪埘岫咖嘲删帅啊- 哺椰悯删f 砷- n 嘲- I “n “一m 碰拜“m 盯“I n M n n - “ 摘要 嬲：( 6 a c c h a s 4 1 1 1 1 1o f f i c i n a r u mL ) 足重要的籼料和能源f 4 - I 复S ，甘溅生产I I I 螟虫( 鳞翅 E 1 ) 、I _ 1 蔗绵岈( 同翅I I ) 以及蛴灿( 惝趔| 1 ) 锋揶虫I f l J 地椰已成为土C 持续、稳定和健康 发展的严重障僻。为了使”燃抗虫4 ：簟丛凶的研究工1 1 ：旦! 有针剥性，我们刘海i 打廿溅虫害 的种类及乓危宙做了全而的调查，其I 红尾 1 螟、二点螟、条螟、粉蚧、绵蚜，熙：根织 等危宙上i j 2 f 限重，1 7 I j 这些宙虫主要集- l 1 ：鳞趔目、刚翅| I I 两火类，该明查绌粜与全巨l - | J 藏! ： 蔗区害虫n 勺危争 情况丛小一致。 礼”跌! _ ：J I ：虫丛凶二L 税I I 通过将j 九虫蛋I 三J 丛l 剁导入 溅水抛舟I ：1 旅刘虫i l j 的抵执能 力U 成为一利一削蜜J f i 行效的力法。I j f 竹越水越多扰虫蛋白被发现，人们揶试图聚川多丛 凶J k 衷j ：厶的筇略将多利l 九虫蛋白- I 川4 ：簟入植物，以抛t i l J l L - I I 物的执虫能力刷扩人扰虫沿。 f ll 足，I J I ：J ：受到叮选抒的缄1 小数I ：I 缄 小容量的I ；诞制，该H 的 诞难较生I g 实现。融合瘩 l D I - 1 支术的发J i 4 J , J Z 为解决这一难题f ：J 4 - i 。效途径。通过构建触合丛凶，可以实现多个7 i l D _ l f 内 l , i l 少、蚓水s 卜表达。一足这些优点，融合占凼技术越来越受到人们的灭注。计划| 1 蔗生 j 札l I 鳞翅日、I 司趔L I 两火类主要害虫，奉研究选择B tC r y I A 纠刷g l i n t 两个已经i l l ! i l , l J J L 乱t 1 1 ! I I I l 执螟虫刷蚜虫f i g ；) J 的抗虫蛋l l ，采川重叠延1 I I lI C R 技术( g e l es p l i c i n gb yo v e r l a p e x t e n s i o nP C R ，简称S e EP C R ) ，通过连接多从F M D V 2 A 序列将C r y l A 俐刷g n a 基I X 2 1 年f I I f 剞! 合，得到C r y l A 俐2 A - g n a 执, I t 删! 合I I 斟，通过农十I I 籀介导转化II + 戚，实脱叫个蛋 I ，1 1 1 1 I 川庶休内f i g J t 表达，以求达到抛I 啊1 I 蒇刘虫似f 内j 氐扰能力的I _ 1f 门。土要实验结果如 。卜： ( I ) 刈海i 钶”蔗J ：区5 个县( | 1 ) 1 6 个乡 j l 进行宙虫调查，钏少摸消了海1 幻t l 燃 ! f 虫利t 类，发现翟 虫9U3 5 科5 8 利，j 川鳞她H 10 科l5 利，半翅H4 科5 利，I 司遄 7 科9 种，蝴翅I J7 科1 2 利，直翅I | 4 科I2 种，蜚蠊H 、等翅l - I 、缨她I - - 1k l l l ：i 4 I I t T H 各I 科l 利。分析了蔗生广：的土要 ! f 虫分加、危害特点、发生规律。j 一红尾口蜞、 二点螟、条螟、粉蚧、绵, J e f ，蒇橄琢等危害i 】2 严重； ( 2 ) 4 t 1 O y l A 俐利g n a 丛I X _ iJ 1 1 - l 致J - 4 i f l 我蛆切功能f 门F M D V 2 A 序列肄拨予连接， 成功了融合O T I A 俐2 A - g n a 基凶； ( 3 ) 构处了含有融合越凶C r y l A 俐2 A - g n a 的4 | I ! i 物农达j 戈体p N U B G 。l i i _ J l l J 构建了 C r y l A 亿) 利C r y l A 例两个m 独J _ 占l k lf 门1 ：I ! 【物表达j 毙体p U B T C 利p U B T B ，扶 j 的三个 ! l ! 【 物表j 厶裁1 小川“冻剐! 法”：1 1 1 i t ；导入橄癌农牛r I 籀E l I A l 0 5 I ( 4 ) 将三个表达载1 小分别通过农4 ：r | 籀介导法刈。I I 贬进行遗传转化：7 J ( 1 t t - 4 ；# 融合丛凶 C ，M 纠2 A g 舰执性桃株1 9 6 株，4 ：簟O T I A 俐删刿8 6 株，转C r y l A 例丛凶抗性植株 7 8 株。所得l ，I 勺抗性枇株进行P C R 检测，转Cr y l A 俐2 A - g n a 融合丛凶j 九性枇1 ：I ：生性 的耵1 3 5 株，转C f y 朋俐摅凶的5 7 株，转Cr y A 例& L I A _ ；I , f t i 5 2 株，钏少让叫外源丛凶 已枇合到I I 蔗n 勺丛I _ A l f l l I I ； ( 5 ) 选取4 ：融合基因C r y l A 俐一2 A - g n a 的6 株P C R 呈悱的机株进j 丁S o u t h e r nb l o t 枪测， = I l f 株l ，2 ，3 ，5 ，6 有杂交信号，单拷贝，证l pJ 夕l 、i ! l ： 肚因已蹩合到”蔗的尿网约l 巾，只有机株4n 勺无杂交信吁； ( 6 ) 选I 阪转融合越因C r y l A 纠2 A g n af 内5 株S o u t h e r nb l o t 5 堋l 性的1 = l l 【株进行 R T - P C R 检测，5 株转泉囚I I 蔗的外源2 蜂闪C r y l A 纠2 A - g n a 基因n ：转录水j F 上得剑了表 达： ( 7 ) 选l I ) ( 4 ：融合基因C r y l A 俐一2 A - g n a 的5 株S o u t h e r nb l o t 枪洲二己中l j 的1 ：I I f 株抛l 【) ( J f i l 步J l l , 3 i 门I f 进行G N A ) 鬟；( f l i t 实验，说I ! J J 融合 k C r y l A 何一2 A - g n a1 1 1 f 内g n a2 I E I 闪扯转 J 川I l 燃干I I 【株I I - 有不同程度的农达； ( 8 ) 选J D ( 4 ：f f ：融介删J i lC r y l A 俐2 A - g n af 门5 株S o u t h e r nb l o t 枪测圳仆f l c J 机株抛撇 ：I I 【 物籼蛋r l ，利川B t 。C r y lA b A c 免疫枪测试纸条进行B t 杀虫蛋h 枪测，全部农现为悱 结求，存B t C r y l A b A c 免疫枪测试纸条一l ：脱了两条紫红也条诳，一条质控线，一条检 测线，说I J 删! 合J 。E C r y l A 俐一2 A g n a l f f JC r y i A S 仃4 ：铋I 1 1 脏枇株I I I 甜纠农达。 关键词：”蔗，j 进1 4 ：化，融合J - I ，币稀延1 I I IP C R 披术，连接多肤F M D V 2 A ，C r v t A 纠 g n a ，C t T I A ，执土I “啾I W i t ht h ed e v e l o p m e n to fi n s e c t - r e s i s t a n tg e n ee n g i n e e r i n g ，t r a n s f e r r i n ga n t i p e s t sg e n e s i n t os u g a r c a n eg e n o m eh a sb e e nad i r e c ta n de f f e c t i v ep a t h w a yt op e s t s c o n t r 0 1 F o rm o r e a n dm o r ea n t i p e s t sp r o t e i n sd i s c o v e r e d ，m u l t i - t a n d e ma n t i - p e s t sg e n e sc o u l db et r a n s f e r r e d t op l a n t sf o ri m p r o v i n gt h ei n s e c tr e s i s t a n c ea n de x p a n d i n gi n s e c tr e s i s t a n ts p e c t r u m H o w e v e r , i ti sd i f f i c u l tt ot r a n s f e rm u l t i - g e n es i m u l t a n e o u s l yb e c a u s eo f t h el i m i t a t i o no n v e c t o r sn u m b e ra n dc a p a c i t y G e n ef u s i o ni sa ne f f i c i e n tw a yt os o l v et h i sp r o b l e m C o n s t r u c t i n gf u s i o ng e n e sc a nm a k em u l t i - g e n e se x p r e s s e ds i m u l t a n e o u s l yo nt h es a m el e v e l J u s tb e c a u s eo ft h e s ea d v a n t a g e s ，g e n ef u s i o nt e c h n o l o g yh a sb e e na p p l i e dw i d e l y T o w a r d s t h et w om a i np e s t ss p e c i e sL e p i d o p t e r 、H o m o p t e r ao ns u g a r c a n e ，B t C r y l A 俐a n dg n ap r o v e d o fg r e a tr e s i s t a n c ew e r es e l e c t e dt oc o n s t r u c tf u s i o ng e n e s B t C r y l A 俐a n dg n aw e r el i n k e d b yc o n n e c t i n gp e p t i d eF M D V 2 Af o r m i n gC r y l A ( c ) 一2 A - g n ag e n eu s i n gg e n es p l i c i n gb y o v e r l a pe x t e n s i o nP C R A sar e s u l t ，B t C r y l A ( c ) a n dG N A c a ne x p r e s st o g e t h e ri ns u g a r c a n e t oi n c r e a s es u g a r c a n er e s i s t a n c et ob o r e ra n da p h i d T h em a i nr e s u l t sa r ea sf o l l o w s ： ( 1 ) A f t e ri n v e s t i g a t i o no ns u g a r c a n ep e s t si n16t o w n si n5c o u n t i e so fH a i n a nP r o v i n c e ， w eb a s i c a l l yc l a r i f i e dt h ep e s t s s p e c i e so c c u r r i n go ns u g a r c a n e At o t a lo f5 8p e s t ss p e c i e s w e r ei d e n t i f i e db e l o n g i n gt o3 6f a m i l i e si n9o r d e r s ：15s p e c i e si n10f a m i l i e so fL e p i d o p t e r a o r d e r ，5s p e c i e si n4f a m i l i e so fH e m i p t e r ao r d e r , 9s p e c i e si n7f a m i l i e so fH o m o p t e r ao r d e r , 12s p e c i e si n11f a m i l i e so fC o l e o p t e r ao r d e r ，O n eB l a t t o d e as p e c i e s ，1I s o p t e r as p e c i e s ，1 T h y s a n o p t e r as p e c i e sa n d1m o l l u s k T r y p o r y z ai n t a c t aS n e l l e n ，H i e r o g l y p h u st o n k i n e n s i s I B o l i v a ra n dE p i s o m o i d e sa l b i n u sM a t s u m u r aw e r et h eh a r m f u ls u g a r c a n ep e s t si nH a i n a nb u t f e wr e p o r t si no t h e rp r o v i n c e si ns u g a r c a n e T h ep e s t sd i s t r i b u t i o n ，h a z a r dC h a r a c t e r i z a t i o n a n do c c u r r e n c er e g u l a r i t yw e r ea n a l y z e d ( 2 ) B t C r y l A 俐a n dg n aw a sc o n n e c t e db yas e l f - s l i c es e q u e n c eF M D V 2 A l i n k e r , c o n s t r u c t e df u s i o n ( 3 ) T h ep l a n te x p r e s s i o nv e c t o rc o n t a i n i n gt h ef u s i o ng e n ew a sc o n s t r u c t e d ，a n dn a m e d p N U B Gr e s l ；e c t i v e l y I n a d d i t i o n 。a n o t h e rt w ov e c t o r sc o n t a i n i n gC r y l A c ) a n dC r y l A 例，r e s p e c t i v e l y , w e r ec o n s t r u c t e da sc o n t r 0 1 T h e nt h e s ee x p r e s s i o nv e c t o r sw e r ei n t r o d u c e d i n t oA g r o b a c t e ，i “mt u m e f a c i e n sE H A 10 5b yf r e e z i n g - m e l t i n gt r a n s f o r m a t i o nm e t h o d ( 4 ) T h r e ee x p r e s s i o nv e c t o r sw e r ei n t r o d u c e di n t os u g a r c a n eb yA g r o b a t o r i u m 。m e d i a t e d t r a n s f o r m a t i o n a n d13 5P C Rp o s i t i v ep l a n t sc o n t a i n i n gC r y l A 俐一2 A - g n ac o n s t r u c t s ，5 7P C R p o s i t i v ep l a n t sc o n t a i n i n gC r y I A ( c ) a n d5 2P C Rp o s i t i v ep l a n t sc o n t a i n i n gC r y l A ( b ) w e r e o b t a i n e d T h e s er e s u l t ss h o w e dt h a tt h e r ef o r e i g r ig e n e sh a db e e np r o b a b l yi n t e g r a t e d i n t o s u g a l c a n eg c I I O I I l e ( 5 ) S i xC r y l A 俐一2 A g n aP C Rp o s i t i v ep l a n t sw e r es e l e c t e dt od e t e c tb yS o u t h e mb l o t , T h er e s o u l I so fS o u t h e mb i o tw e r ef i v et r a n s g e n i cl i n e sa l ls h o w e dh y b r i d i z a t i o nb a n d s ，O n el i n e s h o w e dn oh y b r i d i z a t i o nb a n d ( 6 ) F i v eC o , 1 A 俐2 4 - g n aS o u t h e r nb l o tp o s i t i v ep l a n t sw e r ed e t e c t e db yI P C R ，a n d e a c hp l a n te x p r e s s e dO T I A ( c ) 一2 4 - g n ao nt r a n s c r i p t i o nl e v e l ( 7 ) E x t r a c t e dr a wp r o t e i n s u s e dt or e db l o o dc e l la g g l u t i n a t i o nb i o a s s a y f r o mf i v e S o u t h e r nb l o tp o s i t i v ep l a n t sa n d ，t h er e s u l t si n d i c a t e dt h a tG N A w e r ee x p r e s s e di np a r t t r a n s f e r r e dp l a n t sa td i f f e r e n td e g r e e ( 8 ) E x t r a c t e dr a wp r o t e i n s f r o mf i v eS o u t h e r nb l o tp o s i t i v ep l a n t s t od e t e c tB t i n s e c t i c i d a lp r o t e i nb yB ti m m u n ed e t e c t i o ns t r i p sa n d ，t h er e s u l t si n d i c a t e dt h a ta l lp l a n t s s h o w e dp o s i t i v e K e yw o r d s ：S u g a r c a n e ，G e n e t i ct r a n s f o r m a t i o n ，S O EP C R ，F M D V 2 A ，F u s i o nG e n e ， C r y l A ( c ) g e n e 。g n ag e n e ，C r y l A ( b ) V C r y l A 何2 4 - g n a 融合基冈、c 哆删俐和C D , I A 彻单价基冈遗传转化甘蔗的研究 _ _ _ 删啊u - h _ 瞄_ 州_ _ - 嘲_ 似_ - u - _ - 矗瑚h - 曲- _ 翻脯- _ _ u 捌- - - u - _ - _ _ 啊啊舶呐- _ _ 嘲_ _ 蜘- _ _ - 翻_ _ _ - 喇翻嘲鞠确_ 纠嘲 目录 第一章引言与文献综述1 1 甘蔗概况1 l ：l 甘蔗害虫种类及其危害：1 1 2 甘蔗害虫的综合防治4 2 植物抗虫基因的研究进展6 2 1 抗虫基因及其作用原理6 2 2 抗虫基因工程潜在的问题及解决途径1 2 3 甘蔗转基因的研究进展1 4 3 1 甘蔗的遗传背景1 4 3 2 甘蔗转化系统建立和优化15 3 3 甘蔗的抗虫转基因研究现状1 5 3 4 甘蔗抗病转基因研究o 1 6 3 5 甘蔗抗除草剂转基因研究16 3 6 提高甘蔗抗逆性的转基因研究1 7 3 7 提高甘蔗蔗糖含量和改良蔗糖色泽的转基因研究1 7 3 8 甘蔗生物反应器研究进展。18 4 融合基因研究进展18 4 1 传统获得多价转基因植物的策略1 9 4 2 利用融合基因获得多价转基因植物的策略2 0 5 本研究的目的意义、内容及技术路线2 5 5 1 研究目的意义j ：2 5 5 2 研究内容2 6 5 3 技术路线2 6 第二章海南蔗区害虫调查2 8 1 材料与方法2 8 1 1 调查时间与地点2 8 1 2 材料2 8 1 3 调查方法及数据处理2 8 2 结果与分析：2 8 2 1 海南甘蔗害虫种类2 8 2 2 甘蔗害虫危害情况2 9 3 讨 仑一3 4 4 小结：3 4 第三章植物表达载体P N U B 2 A G 、P U B T C 和P U B T B 的构建3 5 1 材料与方法：3 5 1 1 材料：一3 5 1 1 1 质粒及菌种3 5 1 1 2 酶与生化试剂3 5 1 2 研究方法3 5 1 2 1C 砂纠俐和g n a 融合基因植物表达载体的构建3 5 1 2 2 C r y A 俐初C 砂1 4 倒单价基因植物表达载体的构建一4 4 1 2 2 1 中间载体p U B I 的构建4 4 1 2 2 2 植物表达载体p U B T C 的构建4 5 1 2 2 3 植物表达载体p U B T B 的构建4 5 2 结果与分析4 6 2 1C r y l A 纠和g n a 融合基因植物表达载体的构建4 6 2 1 1C r y l A 纠和g n a 基因的融合：4 6 2 1 2 中间表达载体p N U B I 的鉴定4 9 2 1 3 植物表达载体p N U B G 的鉴定4 9 2 1 4 p M D B 2 A G 冻融法转化根癌农杆菌5 0 2 2C r y l A ( e ) 4 初C r y l A 例单价基因植物表达载体的构建5 2 2 2 1 中间载体p U B I 的鉴定5 2 2 2 2 植物表达载体p U B T C 的鉴定5 2 2 2 3 植物表达载体p U B T C 的转化农杆菌5 3 2 2 4 植物表达载体p U B T B 的鉴定5 5 2 2 5 植物表达载体p U B T B 的转化农杆菌5 7 3 讨论5 7 3 1 关于连接多肽F M D V 2 A 序列5 7 3 2 关于重叠延伸P C R 技术5 8 4 小结一5 9 第四章C R Y I A 仰一2 A G N A 、c n Y r 4 ( c ) 初C R Y I A ( B ) 基因遗传转化甘蔗6 0 1 材料与方法6 0 一一_ 一一 一 一_ 一 ，： C ，3 , I A 俐2 A - g n a 融合基因、C r y l A 俐和C r y M 例单价基冈遗传转化甘蔗的研究 h 翻- _ - _ “_ _ 啊_ 啪蜘h - - - 啊_ - _ _ _ _ 啊帼嘲- - _ - - - _ 岫帽- _ - 越响帕- _ _ H 翻删啊哪_ 删_ “_ 皤矗- - 矗“q 曲_ _ _ 袖H h 融- 晴瞳帅m H 脯 1 1 植物材料6 0 1 2 试剂6 0 1 3 主要的甘蔗培养基6 0 2 方法6 0 2 1 甘蔗转化材料及其农杆菌菌液的准备6 0 2 2 农杆菌菌液浸染愈伤组织及共培养：6 1 2 3 农杆菌浸染后的愈伤组织分化成苗6 1 2 4 甘蔗小植株的筛选培养6 1 2 5 甘蔗抗性苗的炼苗6 2 3 结果与分析6 2 3 1 甘蔗胚性愈伤组织的诱导及分化成苗6 2 3 2 农杆菌浸染后的愈伤组织分化成苗及其P P T 筛选6 2 3 3 甘蔗抗性苗的炼苗6 4 1 材料与方法6 6 1 1 植物材料：P P T 抗性筛选后阳性转化甘蔗植株6 6 1 2 方法6 6 1 2 1 转化植株的P C R 检测6 6 1 2 2 融合C r y l A 2 , 4 - g n a 基因转化植株S o u t h e r nB l o t 检测一6 8 1 2 3 融合C r y l A 纠2 l - g n a 基因转化植株的R T - P C R 检测7 1 1 2 4C r y l A ( c ) - 2 A - g n a 转基因植株叶片蛋白提取液凝血活性测定7 3 1 2 5C r y l A 俐2 l - g r a 转基因植株B t - C r y l A b A c 免疫检测试纸条检测7 3 2 结果与分析7 3 2 。1 甘蔗总D N A 的微量提取7 3 2 2 转化植株的P C R 检测7 4 2 3S o u t h e r nB l o t 检测7 6 2 4 转基因植株的R T - P C R 检测结果。7 7 2 5 凝血活性测定实验数据及S A S 分析结果7 8 2 6 转基因植株的B t C r y lA b A c 免疫检测试纸条的检测7 8 3 讨论7 9 3 1 关于P P T 筛选7 9 3 2 关于甘蔗D N A 微量提取7 9 4 ，J 、结8 0 v i i i 5 本实验研究的后续工作8 0 附录8 1 1 培养基及常用抗生素的配制- 8 1 1 1 培养基配制8 1 1 2 抗生素及激素的配制8 l 2 实验仪器：8 1 3 英文缩写符号及中英文对照表8 2 参考文献8 4 攻读博士期间发表论文情况：一9 3 致谢9 4 海南人! 了：I t 孽- I - ：孑：似论文 _ 咖n n 喇枷_ 皤“喇l 翻啪岫嘲瑚瑚粕帕晌油呐帕喇嘲翻纠咖啊啪抽h 晌帅n h 嘲“m n 曲A “喇矗_ h “m H - I “岫I “m 们_ 翻嘲“h 州h 删“H 瑚岫枷n 慵_ m 刊岫“H 啪删h 咖 第一章引言与文献综述 l 甘蔗概况 甘蔗( S a c c h a r u mo f f i c i n a r u mL ) 足一种重要的经济作物，足制糖工业的主要原料， 也足生物能源燃料作物乙醇的最重要原料。近年来，在国家产业政策导向和各级党 委、政府的关心重视下，在制栅企业改制动力的乖引下，我幽栅业产业有了较人的发展： 形成了以；- - i L q 、云南、广东、海南、村- 建为主的j l c ! ：栅生产基地。掘：I _ I 棚f m 统计，0 8 0 9 榨零企图共产食糖1 2 4 3 1 2 吨，比上榨季1 4 8 4 0 2 J I I i 乜减少2 4 0 9 ：a t h l , ：，减幅1 6 2 3 ： 截至6 月底，累计已销售食糖9 1 2 7 3 力吨，产销率7 3 4 2 ，比去年同期抛I 断4 9 8 。 ”i ： E 火1 1 生产的整个生长发育j 9 j 内均会受剑1 2 0 余种虫害威胁( 黄应昆，2 0 0 2 ) ，苗J 9 J 害虫主要有蔗螟、蔗龟、绵蚜、蓟马等；f I l I 长J 9 J 害虫有绵蚜、束腰蛤蟓、粉介壳虫等。 其。I f 鳞翅日害虫( 火螟、二点螟等) 的为害尤其T 虻重，曲期为害造成柚心，降低有效茎数 从而引起产量下降；生长期为害造成虫害茎、虫害节，不但风折率高、产量降低，而且 引起蔗桃分和压榨汁纯度降低。其次同翅曰害虫( - 【1 馥l 渤j 蚜等) 也足廿溅重要害虫，它们 刁i 但造成- I J 蔗产量产量损失、蔗糖含量的下降，还传播多利- 甘蔗病毒以及病害复合侵染 等( ! c I I 虫牙虫危害容易引起烟霉病) ，造成J I J J 接的拟失比直接为害造成的损火更为严重。 然而近年来山于高产、高枇 蔗。5 淅- I I 的火i 】 f 移 使刚，义缺乏棚应的执虫饥种，l _ 1 ! ：c ! ： 虫害益严重。甘蔗大生产的整个生K 发育删I 均会受到1 2 0 余利一虫害威胁。按害虫 危害部位的差异，大致可以把”溅害虫分为蛀茎性密虫、食叫性害虫取I 地下害虫。 1 1 甘蔗害虫种类及其危害 1 1 1 蛀茎性害虫 蔗的蛀茎性害虫主要有廿j 【l c 二，? ，i 螟、条! 1 0 I l 、黄螟、大螟、红尾臼蜞等。此类害虫 以幼虫蛀食廿蔗幼曲平茎：1 7 ，造成柑心羽I 螟害：1 7 ，俗称u 溅钻心虫，足在广火苁! ! 区普她 发生、危害，限重的一类害虫。廿蔗从插利剑砍收的挫个过程均可受到危害。利1 1 I ! f 划受害 后种茁不能i 见芽出土；茁划受害后生K 点死亡形成1 ：l I 心，使i ! c 数和有效茎减少；在生长 的，I ，后J 纠蔗茎或茎基部被钻蛀啮食，茎内组钐 被破坏，影响u 蔗生长，降低栅分含量。 遇上火风，蔗茎常从虫口处折断；且虫l I i ! i 后尉一I ( f J 9 0 口也足赤腐病等病原凿I ，I 勺侵入1 7 _ 1 ， 致使虫害与病害交叠发生，不仅造成减产也影响蔗的宿根性。掘广西。I _ 1 。蔗l i J I ：究所谭裕 模所长硼I ：究每一株有1 3 个螟害：宵，粘分下降O 5 2 个百分点。这说叨 嫩：受螟害后损 失J 旷重。据2 0 0 3 年石榴河园艺场调查，螟害率最商的达5 8 ，低的1 2 ，平均3 1 7 ， 大大地超出了防治指标( 文厂人儒) 。据报道，山于种植I J 蔗尤其足水果型一U 溅比种植玉米 等传统农作物具有较高的经济效益，因此2 0 0 6 年贵州一I _ - I 蔗的种植面积已达3 力h m ，利 C r y l A 纠一2 4 - g n a 融合基冈、C r y I A 俐和C r y l A 例单价基冈遗传转化十t 蔗的研究 - h 岫妇_ _ 岫捌n “- _ “幽- - “l l t “i l l 自I 自I I - l 【- _ I - _ 幽蕾臼- _ l l - l 山圳m I “b - “_ 崔瑚轴矗“n _ 岫扯- 妇“_ “H 翻_ _ 删虹旺H “h 矗轴_ _ “岫“_ _ 蜘_ 嘲嘲函轴- _ 捆啦瑚出柚日曲相 植舰模和区域呈逐年扩大趋势，然而螟虫危害也逐年增长，螟虫可使甘蔗减产5 2 0 ，糖分降低0 9 3 3 5 绝对值，新植蔗枘心率5 10 ，宿根蔗枯心率达1 0 2 0 严重影响糖厂的制糖效益和蔗农的经济效 ：矗( 张亦诚，2 0 0 8 ) 。 条螟P r o c e r a sy e n O S 订，淞( w a l k e r ) 又称斑点螟，届鳞翅日螟蛾科。其幼体白色，体氏 可达3 0 m m 。背部F 上方无背中线，背部及侧而仃四条淡紫色纵线，即背线、侧线各 两条，斫i 满照色疣突，疣突上生有细毛。胸足3 对，短小，腹足4 对。身体两侧具有两 列气孔，1 面：1 宁一对，全部分斫i 于侧线上( 张亦溅，2 0 0