TNFα对TP酶的调节及其对5FU前体药作用的影响

-本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载-TNF对TP酶的调节及其对5FU前体药作用的影响本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！【摘要】 目的： 探讨TNF对胸苷磷酸化酶（TP酶）的调节及其与5FU前体药化疗敏感性的关系. 方法 ： 应用 TNF诱导肿瘤细胞中的TP酶，ELISA法检测肿瘤组织中TP酶蛋白水平，采用MTT法检测药物敏感性变化. 结果：大肠癌细胞株Lovo和SW620中未检测到TP酶，乳腺癌细胞株MCF7中的TP酶含量为（） g/g，高于MCF/ADR的TP酶（） g/g. TNF上调MCF7和MCF/ADR中TP酶表达呈时间和剂量依赖性. 耐药株MCF/ADR中TP酶上调高达（） g/g，未达非耐药细胞株水平. MCF7细胞中TP酶上调倍，对氟铁龙的IC50降低了倍，有统计学意义. 结论： TNF能剂量时间依赖性上调肿瘤细胞的TP酶，TNF为5FU前体药化疗增效. 【关键词】 胸苷磷酸化酶；氟尿嘧啶；氟尿苷；卡培他滨；肿瘤坏死因子 【Abstract】 AIM： To explore the regulative action of TNF on thymidine phosphorylase(TP) and its effect on the sensitivity of prodrug to 5fluorouracil(5FU) in cancer cell lines. METHODS： The TP level of tumor cells was mearsured by ELISA. And then the MTT assay was done for detecting the drug sensitivity of the cells treated with small concentration of TNF. RESULTS： The TP in Lovo or SW620 was not displayed, and it was significantly higher in MCF7()g/gthan in MCF/ADR（）g/g. TNF caused a concentration and time dependent increase in the level of TP. The TP level of MCF7 displayed a fold increase, while its IC50 displayed a fold decrease. CONCLUSION： TNF can cause a concertration and time dependent increase in the level of TP and enhance the sensitivity of MCF7 to 5FU. 【Keywords】 thymidine phosphorylase; fluorouracil; floxuridine; capecitabine; tumor necrosis factoralpha 0引言 胸苷磷酸化酶（thymidine phosphorylase，TP酶）是近年来发现的嘧啶核苷代谢过程中的一个关键酶，是5FU前体药物（卡培他滨、脱氧氟尿苷）转化为氟尿嘧啶的最后一个限速酶. 近来一些 研究 表明，胸苷磷酸化酶与肿瘤的化疗关系密切，它能增强患者对5氟尿嘧啶(5FU)前体药物化疗的敏感性，提高化疗效果，改善肿瘤患者的预后1. TNF，INF等多种因子能够上调肿瘤细胞内TP酶的表达. 我们应用TNF诱导结肠癌和乳腺癌细胞中TP上调并观察其对5FU前体药物的细胞毒作用，为指导临床用药提供 理论 依据. 1材料和方法 材料 人结肠癌细胞株Lovo和SW620；乳腺癌细胞株MCF7和MCF7/ADR由天津肿瘤 医院 中心实验室保存. RPMI1640培养液、胎牛血清购自Gibco公司，MTT和DMSO为Sigma公司产品. 氟铁龙为上海罗氏制药有限公司生产；5FU(250 mg/支)为天津金耀氨基酸有限公司生产；重组改构人TNF（5 MU/支）为上海赛达生物药业有限公司生产. TP酶检测试剂盒为罗氏诊断公司提供. BCA蛋白浓度测定试剂盒为碧云天生物技术研究所提供. 方法 对肿瘤细胞中TP酶的调节将长满培养瓶对数生长期细胞用无菌PBS洗涤后加入 g/L胰蛋白酶消化细胞，800 r/min离心8 min，加入培养液调整细胞密度为4109/L. 每瓶加入细胞悬液1 mL，再加入培养液4 mL. 37，50 mL/L CO2，饱和湿度培养箱继续培养24 h. 弃去原培养液，加入含20，200，1000 kU/L TNF的新鲜培养液，继续培养48 h，消化、收集、冻存细胞. 另培养24 h后弃去原培养液，加入含TNF的新鲜培养液，使培养液中TNF的浓度为200 kU/L，继续培养24，48，72，96 h，消化、收集、冻存细胞. 取出-80冰箱中冻存的细胞，反复冻溶5次，使细胞充分裂解. Eppendorff离心5 min（13 000 r/min），后收集上清150 L. 按照说明书利用BCA法检测上清液蛋白浓度，ELISA检测肿瘤细胞中胸苷磷酸化酶水平. 应用SPSS统计 分析 软件，绘制标准曲线，再根据测得的A值 计算 出TP酶浓度. 肿瘤细胞中的TP酶含量（g/g）=样品TP酶浓度（g/L）/上清液蛋白质的浓度（g/L）. 法检测药物敏感试验将对数生长期细胞接种于96孔培养板，每孔加入细胞悬液200 L（1104个），置37，50 mL/L CO2孵箱中培养24 h. 弃去原培养液，分别加入含有药物（5FU，5dFUrd）的不同浓度（100，10，1， mg/L）的新鲜培养液200 L（每孔设3个复孔），继续培养48120 h. 每孔加5 g/L MTT 20 L，培养4 h后，吸弃上清，每孔加入二甲基亚砜150 L，振动10 min，用酶标仪测定每孔A570 nm. 计算化疗药物的抑制率=（1-实验孔A570/对照孔A570）100%. 选择一个对细胞生长无 影响 的TNF剂量200 kU/L. 将对数生长期细胞用含有TNF 200 kU/L的培养液培养细胞24，48，72，96 h后按照MTT法继续检测5FU和氟铁龙的敏感性. 统计学处理： 计量资料用xs表示，应用SPSS统计软件进行方差分析，P 为有统