铁椆树果与红菇抗氧化有效成分提取及活性比较.doc

铁椆树果与红菇抗氧化有效成分提取及活性比较开智中学生化教研组谢荃摘要 目的：研究铁椆树果和红菇多糖、总酚、黄酮等有效成分的含量和体外抗氧化活性，探讨铁椆树果替代红菇研制成天然抗氧化剂的可能性。方法：均于广西容县浪水乡红菇基地获取新鲜铁椆树果和红菇，分别以乙醇抽提法、水浴回流法、水浴加热抽滤法，获得多糖、总酚、黄酮粗提取液。利用标准曲线法测定铁椆树果和红菇有效成分的含量，采用1，1二苯基2苦肼基自由基(DPPH)法、铁氰化钾还原法和邻苯三酚自氧化法测定铁椆树果和红菇有效成分提取液清除DPPH自由基、还原力和清除O2-的能力，比较评价铁椆树果和红菇有效成分的体外抗氧化活性。结果：铁椆树果多糖、总酚、黄酮含量（mg/g）分别为：14.100、0.022、0.040，红菇多糖、总酚、黄酮含量（mg/g）分别为：3.000、0.013、0.260，在清除DPPH自由基能力方面，铁椆树果多糖（94.32%）高于红菇多糖（70.79%），呈极显著差异（P0.01）；铁椆树果总酚（84.87%）高于红菇总酚（81.43%），铁椆树果黄酮（93.05%）低于红菇黄酮（95.64%），都不呈显著差异（P0.05）。在还原力方面，铁椆树果多糖（1.058）、总酚（1.679）、黄酮（2.366）均高于红菇多糖（0.201）、总酚（0.415）、黄酮（0.356），都呈极显著差异（P0.01）。在清除O2-能力方面，铁椆树果多糖（17.86%）、总酚（10.69%）都低于红菇多糖（70.14%）、总酚（54.85%），呈极显著差异（P0.01）；铁椆树果黄酮（56.23%）低于红菇黄酮（62.42%），呈显著差异（P0.05）。结论：在清除DPPH自由基能力、还原力方面铁椆树果的抗氧化活性几乎都强于红菇，清除O2-能力方面铁椆树果的抗氧化活性弱于红菇，总之铁椆树果的抗氧化活性略强于红菇，可在一定程度上作为红菇的抗氧化活性功能替代物。 关键词：红菇、铁椆树果、抗氧化有效成分、活性比较Castanopsis glauca fruit with Russula antioxidant effective components extraction and activity comparisonBiotechnology2009 LuojingyanSupervisor GanyaokunAbstractObjective: To study the content of active ingredients of polysaccharide,total phenol, flavonoids,and in vitro antioxidant activity of castanopsis glauca fruit and russula,and to study the posibility of castanopsis glauca fruit replacing russula as a natural antioxidant.Methods: Drawing fresh castanopsis glauca fruit and russula matierials from russula base in Langshuixiang,Rongxian,Guangxi,respectively by the method of ethanol extraction and water bath circumfluence,water bath heating the suction filter method, obtain polysaccharide,total phenol and flavonoids crude extract.Castanopsis glauca fruit using the standard curve method,and russula content of effective components,using 1,1 diphenyl-2-bitter hydrazo free radical (DPPH) method,potassium ferricyanide reduction method and its adjacent phenyl phenol three autoxidation method,castanopsis glauca fruit and russula extract effective components remove DPPH free radicals,reducing power and the ability to remove O2-,comparative evaluation of castanopsis glauca fruit and russula effective components in vitro antioxidant activity.Results:Castanopsis glauca fruit polysaccharide,total phenol and flavonoids content (mg/g),respectively:14.100,0.022, 0.040,and russula polysaccharide, total phenol and flavonoids content (mg/g), respectively: 3.000,0.013,0.260,in terms of removal ability of DPPH free radical,castanopsis glauca fruit polysaccharide (94.32%) than russula polysaccharides (70.79%),show very significant difference (P 0.05).In terms of reducing power,castanopsis glauca fruit polysaccharide (1.058),total phenol 1.679), flavonoids (2.366) are higher than russula polysaccharide (0.201), total phenol (0.415) and flavonoids (0.356),show very significant difference (P 0.01).In removing O2- ability, castanopsis glauca fruit polysaccharide (17.86%),total phenol (10.69%) is below russula polysaccharides (70.14%),total phenol (54.85%),with a very significant difference (P 0.01);Castanopsis glauca fruit flavones (56.23%) is lower than russula flavonoids (62.42%),show a significant difference (P 0.05).Conclusion:On the removing ability of DPPH free radicals and reducing power ,the antioxidant activity of castanopsis glauca fruit is stronger than the russula.On removing O2- the ability of castanopsis glauca is weaker than russula,In a word,the antioxidant activity of castanopsis glauca fruit is slightly better than russula, it can,to some extent, act as substitution for the antioxidant activity function of russula. Key words：Russula,Castanopsis glauca fruit,Antioxidant active ingredients, Activity comparison 目录1.前言11.1红菇简介及其研究现状11.2 铁椆树简介及其研究现状11.3 选题意义12.材料与方法22.1实验材料22.2主要仪器22.3主要试剂22.4试剂配制22.5实验方法32.5.1铁椆树果和红菇多糖的提取与含量测定12,1332.5.2铁椆树果和红菇总酚的提取和含量测定42.5.3铁椆树果和红菇黄酮的提取及含量测定52.5.4 铁椆树果和红菇有效成分清除DPPH自由基作用18的能力62.5.5 铁椆树果和红菇有效成分还原力的能力72.5.6 铁椆树果和红菇有效成分清除超氧阴离子自由基的能力72.6 实验数据处理与分析83.结果与分析83.1铁椆树果和红菇各有效成分含量83.2铁椆树果和红菇各有效成分清除DPPH自由基能力的测定83.3铁椆树果和红菇各有效成分还原力的测定93.4铁椆树果和红菇各有效成分清除超氧阴离子自由基能力的测定104.讨论与结论124.1铁椆树果和红菇各有效成分含量与抗氧化指标讨论124.2小结125.展望13致谢13参考文献141.前言1.1红菇简介及其研究现状红菇(Russula)是一种外生菌根真菌，属于担子菌亚门、层菌纲、红菇目、红菇科、红菇属1。红菇呈单生，散生或小区域群生于铁椆树林间腐殖层地带，菇柄基部着生多条白色索状菌丝，向下延伸，成为菌与根之间的外生菌根2。红菇具有多种生物活性功能，如抗氧化、抗衰老、降血糖降血脂、抗菌、抗肿瘤等。甘耀坤等采用红菇水提取液灌胃小鼠模型方法，检测小鼠血清中超氧化物的活性和谷胱甘肽、丙二醛的含量，研究证明红菇水提取液中存在抗氧化成分3。Tumay等对红菇的乙醇提取物进行清除DPPH自由基和螯合二价铁离子（Fe2+）能力测定，结果表明10mg/L的红菇乙醇提取物清除DPPH自由基达到26%，5mg/L的红菇乙醇提取物螯合二价铁离子（Fe2+）达到58%，从而也证明了红菇提取液中抗氧化成分的抗氧化能力很强4。1.2 铁椆树简介及其研究现状铁椆树（Cyclobalanopsis glauca）是壳斗科、青冈属植物，别名青冈栎、青栲等，为构成我国亚热带森林的主要成分之一。具有较强的适应性，喜阳性，喜生于微碱性、中性至微酸性土壤中。铁椆树中含有大量的生物活性物质，包括单宁、多糖、生物碱、多酚、VB2、VB1、VC、脂类等，其主要活性成分单宁等具有抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抑菌、止血消炎、抗心血管疾病等多项生理功能。近年来，我国学者对铁椆树提取物进行抗癌、抗疲劳、抗氧化、抑菌和降血脂等方面进行了深入的研究，并取得了一定的成果5-9。甘耀坤等人通过建立高糖高脂动物模型的方法，饲喂含有铁椆树叶粉的加富高糖高脂饮料21天后，测定大鼠肾脏超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，结果表明大鼠肾脏SOD活性显著提高，而MDA含量下降明显，从而证明铁椆树对高糖高脂症大鼠具有抗氧化活性作用10。1.3 选题意义 经研究证明，红菇和铁椆树果提取物具有抗氧化作用，却尚未清楚起抗氧化作用的具体化学成分。然而许多学者对其他植物已进行深入研究，明确了起抗氧化主要作用的具体物质有多糖、总酚、单宁酸、黄酮等。刘平怀等通过DPPH体外清除实验研究萝芙木水溶性生物碱抗氧化活性，证明萝芙木水溶性生物碱具有抗氧化活性，可以开发为天然抗氧化剂11。红菇提取物也具有抗氧化作用，若将其有效成分研发为新药或保健品,将具有广阔的市场和前景。但由于目前红菇尚未能进行大规模栽培，且野生红菇资源日益稀少。为此我们采取逆向思维，把研究注意力转移到其共生植物铁椆树，期待能找到具有红菇类似抗氧化活性功能替代物。本实验采用DPPH法、铁氰化钾还原法和邻苯三酚自氧化法测定和评价红菇和铁椆树果有效成分提取液体外抗氧化的效果，比较红菇和铁椆树果有效成分的体外抗氧化能力，以求能否用资源丰富的铁椆树果替代稀少昂贵的红菇资源，对其资源的开发提供更为有力的依据。2.材料与方法2.1实验材料铁椆树果和红菇（均于7月16日采于广西容县浪水乡红菇基地）。2.2主要仪器TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、索氏提取器（天津玻璃仪器厂）、RE-52D旋转蒸发仪（上海青浦沪西仪器厂）、SHB-III循环水式真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、BCD-215KS冰箱（青岛海尔有限公司）、FA1104型电子分析天平（上海精密仪器有限公司）、202-LA型数显式电热恒温干燥箱（上海泸越实验仪器有限公司）、L420台式低速自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）、YP102N电子天平（上海精密科学有限公司）、数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）、FW100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。2.3主要试剂无水乙醇、95%乙醇、去离子水、邻苯三酚、氯化铁、三氯乙酸（TCA）、DPPH(1,1-dipheny1-2-picryl-hydrazyl)(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)、铁氰化钾K3Fe(CN)6、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠。以上试剂均为分析纯。2.4试剂配制0.1mmol/L DPPH的溶液：准确称取0.00395gDPPH，用95%乙醇溶解并定容至100mL。0.2mol/L，PH=6.6磷酸盐缓冲液：0.2mol/LNa2HPO4溶液37.5mL与0.2mol/L NaH2PO4溶液62.5mL的混合液。5mmol/L邻苯三酚：称取0.073g邻苯三酚，用10mmol/L HCl溶解并定容至100mL。50mmol/L PH8.2 Tris-HCl缓冲液：50mL 0.1mol/L Tris与22.9mL 0.1mol/L盐酸混匀并稀释至200mL。2.5实验方法2.5.1铁椆树果和红菇多糖的提取与含量测定12,132.5.1.1样品溶液配制准确称取各种样品5.0g，分别置于索氏提取器滤纸筒中，用200mL无水乙醇抽提2h除去脂溶性成分，挥干乙醇后再用200mL蒸馏水索氏提取3h，抽滤，滤液在容量瓶中定容至250mL，再吸取上述溶液2.5mL稀释至25mL，备用14。2.5.1.2多糖标准曲线的绘制准确称取干燥至恒重的葡萄糖标准品0. 1000g于一个干净的小烧杯中，用蒸馏水溶解并定量转移至100mL的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为1.0mg/mL。分别吸取1. 0mg/mL的葡萄糖标准溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL于6个50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀。再分别吸取上述溶液各2mL于6支具塞刻度试管中，另准备1支试管加2mL蒸馏水作为空白管，往以上7支试管中再各加蒽酮硫酸试剂6mL，摇匀后置于沸水浴中加热15min，冷却后于625nm波长处用1cm吸收池测定吸光度。绘制标准曲线，并求出标准线性方程：y=2.8929x-0.0144，R2=0.9940。其中Y表示吸光度（A625），X表示葡萄糖浓度（mg/mL）。图2.1 葡萄糖标准曲线Fig.2.1 Standard curve of soluble sugar2.5.1.3含量测定分别吸取稀释后的样品溶液1mL于具塞刻度试管中，各加1mL水，再各加蒽酮硫酸试剂6mL，摇匀后置于沸水浴中加热15min，冷却后于625nm 波长处用1cm吸收池测定吸光度，样品均平行测定3次，按照标准曲线回归方程计算出多糖含量。2.5.2铁椆树果和红菇总酚的提取和含量测定2.5.2.1总酚的提取称取5.000g样品粉末，置于250mL锥形瓶中，在料液比120、30%乙醇、60的条件下水浴回流提取1h，趁热过滤、洗涤，收集滤液，滤液40旋转真空浓缩，浓缩液加水定容至100mL，得到样品多酚物质粗提液15。2.5.2.2总酚标准曲线的绘制精密称取没食子酸标准品0.0110g，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得浓度为0.11mg/mL的标准液。准确吸取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL置于25mL的棕色容量瓶中，加蒸馏水至6.0mL，然后分别加入福林试剂0.5mL，混匀，在0.5-8min内加入1.5mL 20%的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30避光放置0.5h，以不加标准液的6.0mL蒸馏水为空白对照，760nm下测定吸光值，每个样品平行测定三次。以没食子酸在反应体系中的质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。然后计算得出回归方程：y=0.618x+0.0538，R2=0.9909。其中Y表示吸光度（A760），X表示没食子酸浓度（ug/mL）。 图2.2 总酚测定的标准曲线Fig.2.2 Standard curve of protein2.5.2.3含量的测定准确量取制备好的乙醇粗提液0.5mL于50mL容量瓶中，加入9.5mL蒸馏水，摇匀，再加入0.5mL福林试剂，混匀，在0.5-8min内加入1.5mL20%的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30避光放置0.5h，以没食子酸标准液为空白对照，760nm下测定吸光值，每个样品平行测定6次。根据标准曲线回归方程计算样品中总酚的含量。2.5.3铁椆树果和红菇黄酮的提取及含量测定2.5.3.1黄酮的提取称取样品粉末5.0g，加20倍体积60%乙醇溶液，于70恒温水浴中加热2h。提取物经抽滤后30%乙醇溶液定容在100mL容量瓶中16。2.5.3.2黄酮标准曲线的制作精密吸取0、2、4、6、8、10mL芦丁标准溶液至于25mL容量瓶中，加30%乙醇溶液至10mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.7mL，摇匀，静置5min，再加入5%硝酸铝溶液0.7mL，摇匀，静置5min，加入1mol/L氢氧化钠溶液5.0mL，最后用30%乙醇溶液定容到刻度线，摇匀，静置5min后，在波长510nm处测定吸光度。绘制标准曲线。然后计算得出回归方程：y=5.5800x+0.0110，R2=0.9952。其中Y表示吸光度（A510），X表示芦丁溶液浓度（mg/mL）。图2.3 黄酮标准曲线Fig.2.3 Standard curve of flavone2.5.3.3含量的测定采用NaNO2-Al(NO3)3比色法17。准确吸取0.5mL提取液，加入25mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.7mL，摇匀，静置5min，再加入5%硝酸铝溶液0.7mL，摇匀，静置5min，加入1mol/L氢氧化钠溶液5.0mL，最后用30%乙醇溶液定容到刻度线，摇匀，静置5min后，在波长510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算提取物总黄酮的含量。2.5.4 铁椆树果和红菇有效成分清除DPPH自由基作用18的能力 照周玮婧19略有修改，准确称取0.00395gDPPH，用95%乙醇溶解并定溶至100mL，配制成0.1mmol/LDPPH的溶液。取不同有效成分的样品液2 mL与2 mL DPPH溶液混合摇匀，室温下放置30min后测定517nm处的吸光值，所有测定均为三次平均值，由公式（2.1）计算DPPH自由基的清除率。DPPH清除率（%）= (2.1) A样=2mL样品+ 2mLDPPH； A对照= 2mL样品+ 2mL95%乙醇；A空=2mLDPPH+ 2mL70%乙醇。计算样品对DPPH自由基的清除率，并绘制DPPH自由基清除率与不同浓度样品的曲线。2.5.5 铁椆树果和红菇有效成分还原力的能力依照文献20,21的方法，略有修改。取2 mL不同浓度的样品液分别加到磷酸盐缓冲液（0.2mol/L，PH=6.6）和铁氰化钾K3Fe(CN)6（1%，w/v）溶液各2mL，混合物在50保温20min，然后在反应混合物中加入2 mL三氯乙酸（10%，w/v），于3000r/min离心10min，然后取上清液2 mL与2 mL蒸馏水及0.4 mL氯化铁（0.1%，w/v）在试管中反应，10 min后测定其在波长700nm处吸光值计为提取物的还原力，以不加FeCl3作空白调零，阴性不加样。吸光度的大小反映了样品还原力的强弱，从而反映其抗氧化能力的大小，吸光度值越大，则样品的还原能力越强，抗氧化能力也就越强。2.5.6 铁椆树果和红菇有效成分清除超氧阴离子自由基的能力采用改良的邻苯三酚自氧化法22产生O2-，邻苯三酚自氧化产物最大吸收波长为325nm，O2-清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在A325受到抑制。通过A325值的变化可判断O2-清除剂的清除能力及抑制能力。反应体系：分别加入以下试剂，4.5mLpH8.2的Tris-HCl缓冲液(50mmol/L)，1mL样品稀释液（稀释10倍）(对照管不加提取物)，0.2mL邻苯三酚(5mmol/L)，总体积5.7mL。常温下，反应体系启动后，每隔30s读取一次A325值，至240s止。(各加样管以不加邻苯三酚管作对照，即A空白)。以Tris-HCl缓冲液作空白调零用，O2-清除率及抑制率按公式（2.2）计算。O2-清除率（%）= （2.2） A空白：为不加邻苯三酚时体系溶液的吸光度(消除粗提物本身颜色对测定的干扰)；A对照：为某时刻不加样品时体系溶液的吸光度；A样：为某时刻加入样品时体系溶液的吸光度。计算样品对超氧阴离子自由基的清除率，并绘制清除率与不同浓度样品曲线。2.6 实验数据处理与分析所有实验均做三组重复，采用spss18.0软件进行分析统计，差异显著性采用单因素方差法分析，显著性水平取=0.05和=0.01，使用Excel软件作图，实验数据以均数标准差（s）表示。3.结果与分析3.1铁椆树果和红菇各有效成分含量铁椆树果和红菇各有效成分含量如表所示：表3.1 铁椆树果和红菇有效成分含量Table3.1 Castanopsis glauca fruit and the Russula effective component content成分红菇多糖（mg/g）果多糖（mg/g）红菇总酚（mg/g）果总酚（mg/g）红菇黄酮（mg/g）果黄酮（mg/g）含量3.00014.1000.0130.0220.2600.0403.2铁椆树果和红菇各有效成分清除DPPH自由基能力的测定二苯基苦基苯肼(DP-PH)是一种很稳定的以氮为中心的自由基，它的结构中含有3个苯环，1个N原子上有1个孤对电子，其醇溶液呈紫色的特性，在517 nm处有强吸收峰。当有自由基清除剂存在时，由于与孤对电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速定量分23。由表3.2和图3.1可以看出，从红菇中提取的多糖、总酚、黄酮三种有效成分都具有较强的DPPH自由基清除能力（清除率都在70%以上），铁椆树果中提取的多糖、总酚、黄酮也具有较强的DPPH自由基清除能力（清除率都在80%以上）。铁椆树果多糖与红菇多糖比较，其清除率都较高且呈极显著差异（P0.01），表现出较强的清除能力；铁椆树果总酚清除率高于红菇总酚，不呈显著差异（P0.05）；铁椆树果黄酮低于红菇黄酮，不呈显著差异（P0.05）。结果表明：在原材料含量相同的情况下，铁椆树果中多糖、总酚比红菇的多糖、总酚的DPPH自由基清除能力强，铁椆树果黄酮比红菇黄酮的DPPH自由基清除能力弱。表3.2 铁椆树果和红菇有效成分清除DPPH自由基能力Table3.2 The clear DPPH free radical ability of Castanopsis glauca fruit and the Russula effective component红菇清除率铁椆树果清除率多糖70.792.6194.321.74*总酚81.431.9484.870.49黄酮95.640.9193.050.98注：*：P0.05，* *：P0.01与红菇比较。Note: *:P0.05,*:P0.01compare with Russula .图3.1 铁椆树果和红菇有效成分清除DPPH自由基能力（s，n=3）Fig.3.1 The clear DPPH free radical ability of Castanopsis glauca fruit and the Russula effective component3.3铁椆树果和红菇各有效成分还原力的测定还原力的测定是以普鲁士蓝Fe4(Fe(CN)6)3的生成量作为指标，将铁氰化钾K3Fe(CN)6还原成K4Fe(CN)6，K4Fe(CN)6再利用Fe3+形成普鲁士蓝24，在此反应过程中，供应的电子可使Fe3+还原为Fe2+，使反应溶液的颜色逐渐变深，吸光度也变大。还原力强的样品除了可使Fe3+还原为Fe2+外，也可与自由基反应，使自由基成为更稳定的物质，样品的吸光度也更大。即样品的吸光度与还原力之间呈正相关，因此，可以用700 nm处吸光值的变化测定还原力大小，吸光度值越大，则样品的还原能力越强，抗氧化能力也就越强。由表3.3和图3.2可以看出，红菇三种有效成分还原力都较低（吸光值均小于1）。铁椆树果多糖、总酚、黄酮的吸光值都比红菇的三种对应成分高，都具有极显著性差异（P0.01）。实验表明：在原材料含量相同的情况下，铁椆树果三种有效成分还原力都优于红菇。表3.3铁椆树果和红菇有效成分的还原力Table3.3 Castanopsis glauca fruit and the Russula effective component, s reduction force红菇清除率铁椆树果清除率多糖0.2010.0141.0580.034*总酚0.4150.0521.6790.035*黄酮0.3560.0062.3660.056*注：*：P0.05，* *：P0.01与红菇比较。Note: *:P0.05,*:P0.01compare with Russula . 图3.2铁椆树果和红菇有效成分的还原力（s，n=3） Fig3.2 Castanopsis glauca fruit and the Russula effective component, s reduction force3.4铁椆树果和红菇各有效成分清除超氧阴离子自由基能力的测定邻苯三酚在自氧化过程中,会产生O2-自由基和其他有色中间物质，如果加入O2-自由基清除剂，便可抑制邻苯三酚的自氧化，同时也抑制了有色中间物质的产生，通过比色便可得出O2-自由基清除剂对O2-自由基的清除效力25。由表3.4和图3.3可以看出，红菇多糖、总酚的清除O2-自由基清除能力比铁椆树果的多糖、总酚强，且具有极显著性差异（P0.01），红菇黄酮的清除O2-自由基清除能力显著大于铁椆树果黄酮的清除能力（P0.05）。实验表明：在原材料含量相同的情况下，红菇多糖、总酚、黄酮的清除O2-自由基的能力明显比铁椆树果多糖、总酚、黄酮的清除O2-自由基的能力强。表3.4 铁椆树果和红菇有效成分清除O2-自由基能力Table3.4 Remove O2- free radicals ability of Castanopsis glauca fruit and the Russula effective component红菇清除率铁椆树果清除率多糖70.140.2317.860.87*总酚54.851.1310.691.20*黄酮62.422.9756.231.05*注：*：P0.05，* *：P0.01与红菇比较。Note: *:P0.05,*:P0.01compare with Russula .图3.3 铁椆树果和红菇有效成分清除O2-自由基能力（s，n=3）Fig.3.3 Remove O2- free radicals ability of Castanopsis glauca fruit and the Russula effective component4.讨论与结论4.1铁椆树果和红菇各有效成分含量与抗氧化指标讨论研究铁椆树果和红菇多糖、总酚、黄酮等有效成分的含量和体外抗氧化活性，探讨铁椆树果替代红菇研制成天然抗氧化剂的可能性。由实验可知，铁椆树果多糖、总酚、黄酮含量（mg/g）分别为：14.100、0.022、0.040，红菇多糖、总酚、黄酮含量（mg/g）分别为：3.000、0.013、0.260，在清除DPPH自由基能力方面，铁椆树果多糖（94.32%）高于红菇多糖（70.79%），呈极显著差异（P0.01）；铁椆树果总酚（84.87%）高于红菇总酚（81.43%），铁椆树果黄酮（93.05%）低于红菇黄酮（95.64%），都不呈显著差异（P0.05）；在还原力方面，铁椆树果多糖（1.058）、总酚1.679）、黄酮（2.366）均高于红菇多糖（0.201）、总酚（0.415）、黄酮（0.356），都呈极显著差异（P0.01）。在清除O2-能力方面，铁椆树果多糖（17.86%）、总酚（10.69%）都低于红菇多糖（70.14%）、总酚（54.85%），呈极显著差异（P0.01）；铁椆树果黄酮（56.23%）低于红菇黄酮（62.42%），呈显著差异（P0.05）。4.2小结从实验结果可知，清除DPPH自由基能力依次为：铁椆树果三成分几乎都高于红菇三成分。还原力大小依次为：铁椆树果三成分均高于红菇三成分。清除超氧阴离子自由基能力依次为：铁椆树果三成分均低于红菇三成分。结果说明铁椆树果多糖、总酚的含量、DPPH自由基清除能力和还原力都高于红菇多糖、总酚，超氧阴离子清除能力低于红菇多糖、总酚，表明铁椆树果多糖、总酚的抗氧化能力在一定程度上强于红菇多糖、总酚；铁椆树果黄酮的含量、DPPH自由基清除能力和超氧阴离子清除能力低于红菇黄酮，还原力高于红菇黄酮，表明红菇黄酮抗氧化能力在一定程度上优于铁椆树果黄酮。在清除DPPH自由基能力、还原力方面铁椆树果的抗氧化活性几乎都强于红菇，清除O2-能力方面铁椆树果的抗氧化活性弱于红菇，总之铁椆树果的抗氧化活性略强于红菇，可在一定程度上作为红菇的抗氧化活性功能替代物。5.展望研究植物和中草药中的抗氧化成分，不仅具有重要的理论意义，更重要的是抗氧化剂在药用和保健品等方面具有很高的实用价值。铁椆树是红菇的共生树，资源十分丰富，具有巨大的开发和利用潜力。本文通过测定红菇和铁椆树果各有效成分提取液的DPPH、还原力和O2-的清除能力，并比较其抗氧化能力大小，以求能用更加实惠的铁椆树资源替代昂贵的红菇走向药用与保健品市场。本实验表明铁椆树果的抗氧化活性略强于红菇，可在一定程度上作为红菇的抗氧化活性功能替代物。由于时间有限，对于红菇和铁椆树果在其它方面的生物活性如抗菌、抗肿瘤、抗衰老作用的比较有待进一步研究。致谢一路走来，非常感谢在这两年的教学和生活中给予我深切支持、帮助和关怀的老师和同学们。我的论文设计从一开始的选题、策划方案、准备实验仪器药品、开始实验分析数据、直至论文撰写的整个过程，忙碌了许久时间终于接近尾声。由于经验的匮乏，在整个设计过程中难免有许多考虑不周全的地方，如果没有导师的指导，以及一起工作的同学们的支持，想要完成这个设计是难以想象的。首先我特别感谢组长林芳老师的指导，林芳老师严谨求实的治学态度、积极进取的科研精神、非常渊博的知识、敏锐的学术思维、孜孜以求的工作作风和诲人不倦的师者风范对我产生重要影响。非常感谢林老师给我提供良好的实验环境和实验各方面的指导。从论文的选题到做实验的过程，林老师给予具体的指导和帮助，让我能够顺利完成本次毕业论文。在此，请允许我再次向尊敬的林老师表示真挚的谢意！其次，我还要感谢我的好友兼同事岑敏姬老师、杨振玉老师、黄桂文主任、王丽丹老师等，他们为我完成实验提供了巨大的帮助。非常感谢大家！参考文献1陈旭健,甘耀坤,王名光等.红菇的分离培养研究初探J.玉林师范学院学报(自然科学),2005,26(5):64-65,77.2甘耀坤,陈旭健,冯槐全等.广西容县的红菇资源及开发与保护J.食用菌,2005(6):11-12.3甘耀坤,娄小华,李岩. 红菇子实体抗氧化性能的初步研究J. 食用菌,2007, (1):57-59.4Tumay T& A.Belma, O.Sahlan. Antimicrobial and antioxidant activities of Russula delica FrJ.Food and Chemical Toxicology,2009,(47):2052-2056.5甘耀坤, 陈旭建,韦巧春.铁椆抗氧化性能的初步研究J.安徽农业科学, 2008,36(29):12738-12740.6陈旭健, 甘耀坤