AKTApurifier操作入门.doc

AKTApurifier 层析系统操作入门为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。一 系统组件及系统功能介绍 1 系统组件(1) 泵 Pump系统泵：(system pump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。(2) 阀 Valve三通阀：(SV-903)两个。分别位于两个系统泵前，用于缓冲液输送管道(A1/A2, B1/B2)切换。七通阀：(INV-907)两个。1. 上样阀(sample valve)，用于上样环切换 (load/inject) 和系统泵清洗时废液管 (waste) 切换； 2. 流向切换阀(flow direction valve)，用于层析柱流向切换 (downflow/upflow)。八通阀：1. 出口阀(outlet valve)，选择收集出口。(3) 收集器 Fraction分段收集。(4) 其它组件梯度混合器(mixer)、柱前过滤器(on line filter)、紫外检测仪(UV-900) 、pH 电导仪 (pH/C-900 内含温度计)等。2 系统功能系统功能由上述各组件相互配合，协同工作。(1) 缓冲液pH及梯度配制(a)梯度制备 (Gradient)A、B泵分别放置A、B液，由A、B泵的流速变化产生梯度。(b)自动缓冲液pH及梯度制备 (BufferPrep)根据所用缓冲液配方，分别将A1、A2、B1、B2放入相应的溶液，由A泵及其三通阀调配缓冲pH，由B泵及其三通阀调配梯度。(2) 上样上样阀上样：将样品经进样阀 3 号口注入储存在样品环(Sample loop)内，再由阀门切换将样品带入层析柱；系统泵上样：由三通阀选择进样管道，由系统泵将样品泵入层析柱。(4) 收集收集器收集：设置收集体积(Frac size)，可自动按条件收集。出口阀收集：按需要选择不同出口管收集。二 开机程序1 开启电脑；2 打开 AKTApurifier 电源；3 启动 UNICORN 软件，输入用户名( User name) 和密码(Password)，默认用户(default) 密码为 default，待AKTA自检结束后，在system control窗口中显示系统准备就绪 （Instruments are ready) 。三 UUNICORN 软件简介Unicorn软件启动后共有四个窗口，其主要功能分别如下：Main: 1. 系统关闭(Quit Program)和退出、登陆(Log on/off)；2. 系统管理的设定，如用户名、密码、文件和使用权限等设定，系统日志等；3. 文件管理，如文件拷贝、移动、删除及压缩拷贝到磁盘等；4. 方法组编辑(MethodQueues)，将几个方法组合在一起，依次运行。Method Editor: 1.方法编辑；2.缓冲液配方设置（如配方修改或新增配方等）System Control: 1. 系统控制，可以手动控制(Manual)或运行方法(Run Method)； 2. 系统设置，包括Alarms/Special/Monitors/Curves； 3. 运行监测，有四个窗口：Run data/Curves/Flow scheme/Logbook。Evaluation: 结果处理，如积分(intergrate)、移动(shift)、 计算 (Subtract/Add/Multiply/Divide )、 平滑(Smooth)、截取(Cut Curve)、绘制(Creat Curve)、打印(Print)等在每个窗口中均有专家建议(Adviser)和帮助信息(Help)。四 系统控制 (System Contral)1 手动操作 (Manual)1.1 手动操作命令简介(1) Pump 泵Flow: 设定系统泵流速Gradient: 梯度设定BufferPrep_pH: 使用缓冲液配制功能时，设定pH值SampleFlow: 设定样品泵流速PumpWashpurfier: 系统泵清洗(2) Flowpath 流路PumpAInlet: A 泵入口三通阀切换PumpBInlet: B 泵入口三通阀切换InjectionValve: 上样阀切换OutletValve: 收集出口阀切换InjectionMark: 插入记号(3) Alarm & Mon 报警、检测WaveLength: 选择监测波长（1-3个）AutoZeroUV: 紫外吸收校零AveragingTime: 计算紫外吸收平均值的间隔时间SetCondScale 0%: 输入0%B时的电导 SetCondScale 100%: 输入100%B时的电导Alarm: 设置压力、紫外、电导、pH等报警限Watch: 监测参数设置，配合方法编辑中的watch功能(4) Frac 收集：Peak_Frac_Parameters: 计峰收集参数设定FracCollect_900: 分布收集每管体积Frac_Stop_900: 停止分别收集FeedTube: 换管收集Peak_Fraction: 计峰收集每管体积Peak_FracStop: 停止计峰收集OutletFraction: 出口阀每风分段收集每段体积等设置ResetFracNumber: 将当前分布收集的管号计为第一管(5) Others 其它Block: 调用程序块（只在方法运行时可用）Next_breakpoint: 跳到下一程序块（只在方法运行时可用）BufferPrepRecipe: 选择缓冲液配方Set_Mark: 插入提示语End_Timer: 设定结束运行时间Record on/off: 手动运行时开始或结束数据记录1.2 手动操作示例(1) 梯度洗脱设定流速、梯度、柱位、收集方法后即可运行。各命令无先后次序要求。(2) 自动配制缓冲pH及梯度必须最先设定缓冲液配方，然后设定其它参数如流速、pH、梯度等。(3) 记录图谱运行“Record on”命令，开始记录图谱，停止记录则运行“Record off”命令。 1.3 运行监测 （Monitoring a run)在系统运行过程中，系统控制窗口同步显示系统检测的数据及各部件当前状态，共有四个窗口，显示不同内容，可同时打开：Rundata: 运行参数Curves: 数据曲线Flow scheme: 系统流路图Logbook: 运行记录2 方法运行( Run Method)启动方式方法一：从主菜单(main)窗口方法(method)栏中，双击所选方法。方法二：从系统(system control)窗口中，依次点击File、 Run，选择运行方法。方法三：从系统(system control)窗口中，点击运行(Run)键，选择运行方法。五 方法编辑1 按照模板编辑新方法(1) 点击方法编辑窗口中FileNew,或点击工具栏中”New Method”按钮， 打开新方法编辑窗口；(2)(2) 在“For system”栏中选择运行方法的系统， 选择“No Template”则可自行编辑方法；(3) 在“Technique”栏中选择层析技术，可选内容有：Anion Exchange: 阴离子交换Cation Exchange: 阳离子交换RPC: 反相层析HIC: 疏水层析Size Exclusion: 分子排阻（凝胶层析）Affinity: 亲和层析Any: 通用模板(4) 在“Template”栏中选择模板类别，以离子交换及凝胶过滤为例，有如下选择IEX Templates（离子交换模板）:CIP （在位清洗）Manual Injection FP BufferPrepManual Injection FP SegmentedManual Injection V BufferPrepManual Injection V SegmentedGF Templates （凝胶过滤模板）:Manual Injection FP IsocraticManual Injection V Isocratic模板解释： Manual Injection: 样品由手工（用注射器等）储存在样品环中，再由进样阀将样品注入层析柱F: 用收集器（Fraction-900）分布收集P: 使用计峰收集(Peak Fraction)功能V: 用出口阀(Outlet Valve)分段收集BufferPrep: 使用自动缓冲液配置Segmented: 不用自动缓冲液配置，可使用梯度Isocratic: 单一流动相(5) 在“For column”栏中，选择所用层析柱型号，若在列单中没有，则选择“Any” (6) 点击“OK”键(7) 若各参数符合要求，则选择“FileSave”，即可完成新方法编辑。2 方法编辑若按模板编辑的方法不能满足要求，或对已使用过的方法进行调整，可在“Method Edit”窗口中对方法进行编辑。编辑可分两类：1 运行参数编辑；2 程序编辑。(1) 运行参数编辑 （Run setup）在菜单中选择“ViewRun setup”，则进入运行参数编辑窗口，各编辑窗口的内容为：Variables: 控制程序可变参数编辑Scouting: 筛选条件设定Question: 开始运行的提问内容设定Notes: 输入实验记录或提示Gradient: 显示梯度曲线BufferPrep: 开启或关闭自动缓冲液配置功能及选择缓冲液配方Column: 显示层析柱参数Reference Curves: 输入对照曲线Evaluation Procedures:数据处理步骤Method information: 方法信息，含运行体积、时间等Result name: 结果保存文件名格式、路径设定Start protocol: 开始运行方案选择(2) 程序编辑 （Text instruction）在菜单中选择“ViewText instruction” 则进入程序编辑窗口。方法控制程序由数个程序块(Block)组成，程序块则由操作命令(instruction)及可变参数(Var.)组成。所以，根据需要，可分别增加或删除可变参数、操作命令、程序块等。六 数据处理 (Evaluation)1 数据浏览Evaluation窗口中可查看层析结果(Chromatogram_Layout)和程序档案(Documentation)等。2 数据加工最常用有曲线的积分、移动、计算（加减乘除）等：2.1 积分 (integrate)(1)选择IntegratePeak integrate或点击Peak integrate按钮，打开积分窗口；(2)在积分窗口中选择曲线、基线和积分表后，点OK键即可；(3)如果想优化积分结果，则可在积分窗口中选择基线设定、积分范围和参数。2.2 移动 (Shift)多条曲线重叠比较时，可用移动功能，使每条曲线错开适当距离，便于分析。移动可以左右移动，也可上下移动。2.3 相除计算 (Divide)将两条UV曲线相除，可判定吸收峰的纯度：如果一个峰的组分是单一的，则整个峰的相除结果应是恒定值。根据峰的相除值，还可判定峰的成分，因为不同物质的两个波长相除值应是不同的。(1)选择OperationDivide，打开Divide (相除)窗口；(2)选择两条相除的曲线，点OK键，即可；(3)若需优化计算结果，可设定极限范围(Threshold)，也可在计算前用相减(Subtract)功能，消除基线漂移的影响，还可用平滑(Smooth)功能，减小计算结果的波动。2.4 输出报告 (Report and Print)(1)打印当