食用菌菌种标准使用指南.ppt

食用菌菌种标准使用指南,金科玉律,种子法食用菌菌种管理办法黑木耳菌种GB19169-2003香菇菌种GB19170-2003双孢蘑菇菌种GB19171-2003平菇菌种GB19172-2003杏鲍菇和白灵菇菌种NY862-2004,一、术语和定义,我国食用菌菌种繁育体系,菌种culture生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。,一、术语和定义,母种stockculture经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。,一、术语和定义,原种motherspawn由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。,一、术语和定义,栽培种spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称三级种。,一、术语和定义,拮抗现象antagonism具有不同遗传基因的菌落间互相抑制产生不生长区带或形成不同形式线形边缘的现象。,一、术语和定义,角变sectoring因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。,一、术语和定义,高温抑制线（高温圈）high-temperaturedline食用菌菌种在培养过程中受高温和通气不足的不良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象。,一、术语和定义,生物学效率biologicalefficiency单位数量培养料的风干物质所培养产生出的子实体或菌丝体质量（鲜重），常用百分数表示。如风干料100千克产生了新鲜子实体50千克，即为生物学效率50。种性charactersofvariety指食用菌的品种特性。一般包括生理特性、农艺性状和商品性状。,二、检测内容,容器感官检验微生物学检验菌丝生长速度母种农艺性状和商品性状,二、检测内容,母种质量要求容器：使用玻璃试管和棉塞试管18mm180mm或20mm200mm棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。,二、检测内容,母种质量要求感官要求：,二、检测内容,二、检测内容,母种质量要求：菌丝生长速度：在PDA上，在适温下，长满斜面10d14d。香菇：24110d14d平菇：2526d8d黑木耳：26210d15d双孢蘑菇：24115d20d母种栽培性状：供种单位，需经试验确证农艺性状和商品性等种性合格后，方可用于扩大繁殖或出售。产量性状：平菇生物学效率不低于10双孢蘑菇需进行EST同工酶类型鉴定，判定与对照相同生物学效率不低于3.,二、检测内容,原种质量要求容器：使用650ml-750ml，耐126高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶，或850ml耐126高温白色半透明符合GB9678卫生规定的塑料菌种瓶；或15cm28cm耐126高温符合GB9688卫生规定的聚丙烯塑料袋；棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。也可以使用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞,二、检测内容,原种质量要求感官要求：,原基primordium尚未分化的原始子实体的组织团。,原种质量要求和母种质量要求相同微生物学要求：,二、检测内容,原种质量要求：菌丝生长速度：在适宜培养基上，在适温（232）下，长满容器35d-50d。香菇（232）35d-50d。平菇（252）25d-30d。黑木耳（262）40d-45d。双孢蘑菇（241）45d。栽培性状（无），与母种不同,二、检测内容,栽培种质量要求：容器：可以使用原种规定使用的容器；或17cm35cm耐126高温符合GB9688卫生规定的聚丙烯塑料袋；,二、检测内容,栽培种质量要求感官要求：,二、检测内容,栽培种质量要求和母种、原种质量要求相同微生物学要求：,二、检测内容,栽培种质量要求：菌丝生长速度：在适宜培养基上，在适温（232）下，长满容器40d-50d。栽培性状（无），与母种不同，和原种相同,三、抽样,质检部门的抽样应具有代表性；母种按品种、培养条件、接种时间分批编号；原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。按批随机抽取被检样品母种、原种、栽培种抽样量10、5、1抽样数量不得少于10支(瓶、袋)超过100支(瓶、袋)的，可进行两级抽样.,四、试验方法,感官检验微生物学检验菌丝生长速度母种农艺性状和商品性状留样,四、试验方法,感官检验肉眼观察必要时使用5放大镜鼻嗅,母种感官检验方法（一）,1.棉塞或无棉塑料盖检测方法肉眼观察棉塞的材料、洁净度和干燥与否，手捏棉塞是否松紧适度，是否有弹性,手提棉塞外露部分，棉塞应不松动、不脱落。2.培养基灌入量按常规做培养基斜面的方法目测判断培养基灌入量，应为试管总容积的四分之一至五分之一。3.斜面长度用游标卡尺测量斜面的最上端量起至棉塞的最底部的距离（mm）。,母种感官检验（二）,4.接种块大小（接种量）在无菌条件下挑出接种块,用游标卡尺测量接种菌丝面的长和宽，用mmmm表示，保留整数位。5.菌种外观检测5.1菌丝生长量观察菌丝是否长满整个斜面。5.2菌丝体特征肉眼观察菌丝体的颜色、密集程度，菌丝体是否舒展、旺健及其形态（棉毛状、细羊毛状等）。,母种感官检验（三）,5.3菌丝体表面肉眼观察菌丝体是否生长均匀、平整，有无角变现象。5.4菌丝分泌物肉眼观察有无分泌物，如有则记录分泌物的颜色和数量。5.5菌落边缘肉眼观察菌落边缘是否整齐。5.6杂菌菌落用放大镜观察菌丝体颜色和外观形态，根据颜色和形态是否有差异判定是否有杂菌菌落。,母种感官检验（四）,5.7虫（螨）体用放大镜观察培养物上有无虫（螨）体。6.斜面背面外观根据培养基是否与试管相脱离判断是否干缩；在充足的光线下，对着光源方向，观察颜色是否均匀，有无色素和暗斑。7.气味在无菌条件下打开棉塞（或无棉塑料盖），闻试管内气味是否正常。,菌种退化在母种阶段的表现,1.菌落形态不正常，如本来菌落平展的品种表现为菌落紧皱；丝状的气生菌丝变为雪花状；气生菌丝变多或变少甚至没有了；菌丝色泽变化，如多数种和品种在母种斜面上菌丝呈白色，退化了品种常呈现微黄色、浅褐色或其他色泽，或由鲜亮变暗淡；2.菌丝倒伏，生长势弱；3.长速变慢,过快或过慢都是不正常的；4.个体间长速和长相不均一；5.色素的出现。多数食用菌菌种在母种阶段不形成色素,如果出现色素,说明品种退化严重。,四、试验方法,微生物学检验菌丝生长状态和锁状联合用1040的光学显微镜对培养物的水封片进行观察，每一检样应观察不少于50个视野。细菌检验：取少量疑有细菌污染的培养物，按无菌操作接种于(营养肉汤培养液)GB/T4789.28，25-28振荡培养1d-2d，观察培养液是否混浊。若混浊，则有细菌污染。霉菌检验：取少量疑有霉菌污染的培养物，按无菌操作接种于(PDA)GB/T4789.28，25-28培养5d-7d，菌落出现白色以外的杂色者，或有异味者为霉菌污染。必要时进行水封片进行观察。,菌丝生长状态,取干净载波片，滴1滴无菌水，用无菌操作方法挑取少量菌丝涂于水滴中，盖上盖玻片，置于1040显微镜下观察菌丝形态，是否粗壮、丰满、均匀，是否有锁状联合。每一检样应检查不少于50个视野。,锁状联合,杂菌细菌检验,根据不同菌种选择适用的方法1.1在无菌条件下，挑取少许疑有细菌污染的培养物接种至肉汤培养液中，于2528振荡培养12天，观察培养液是否浑浊，若浑浊则有细菌污染，澄清透明为未污染细菌。1.2在无菌条件下，挑取可疑或有代表性的样品，接种于肉汤培养基斜面或平板，于2528振荡培养12天，观察培养基斜面是否有细菌菌落长出，有细菌菌落长出者做显微镜检查，确认是细菌，则判定为细菌污染；否则为无细菌污染。,杂菌霉菌检验,挑取少许可疑的霉菌污染的培养物或有代表性的样品接至PDA培养基中，于2528培养4天，出现其他色泽的菌落或其他形态的菌落或有异味的为霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。,四、试验方法,菌丝生长速度母种：PDA241原种和栽培种：规定的培养基（241）计算长满天数。,母种生长速度检测方法,菌种不同,对母种生长速度的测定方法和要求亦不同：选择A.1或A.2培养基配方，配制后按菌种生产标准要求分装于试管（18180mm或20200mm）中，121灭菌30min，取出摆成斜面或制备培养基平板（90mm），冷却，随机抽取1020支斜面或3个培养基平板置于282培养24小时，确认灭菌良好后使用。将待检菌种接种于PDA培养基或CPDA培养基上，接种块（35）（35）mm，置于斜面中央偏下或培养皿中央，恒温培养箱适宜条件下培养，计算长满斜面的天数。三个重复。,四、试验方法,母种农艺性状和商品性状将被检母种制成原种。规定的培养基；菌棒45根接种后，分三组进行管理做好栽培记录与该母种的出发菌株设为对照黑木耳含水量622双孢蘑菇含水量68360kg，分3组，每组2m2双孢蘑菇酯酶同工酶,四、试验方法,母种农艺性状和商品性状判定：以时间计的项目，不得推迟5d（含5d）产量显著低于对照的；子实体形态明显与对照不同或畸形的,四、试验方法,留样各级菌种均要留样备查留样数量：3-5支（瓶），于46时间：香菇：母种、原种7个月；栽培种5个月平菇：母种5个月、原种4个月；栽培种2个月黑木耳：母种、原种6个月；栽培种4个月双孢蘑菇：母种5个月、原种4个月；栽培种2个月,五、检验规则,判定规则按照质量要求进行。全部合格的，为合格菌种；任何一项不合格，则为不合格。,六、标签、包装、运输、贮存,标签产品标签5要素：产品名称；品种名称；生产单位；接种日期；执行标准包装标签7要素：产品名称；品种名称；厂名、厂址、联系电话；出厂日期；保质期、贮存条件；数量；执行标准包装储运图示标志5要点（GB/T191）:小心轻放标志；防水、防潮、防冻标志；防晒、防高温标志；防止倒置标志；防止重压标志。,六、标签、包装、运输、贮存,包装母种：木盒或纸箱；缓冲的轻质材料填满原种、栽培种：纸箱；缓冲的轻质材料填满；8cm胶带封口；产品合格证和使用说明书