微生物实验总结

1 / 23 微生物实验总结 微生物实验总结 姓名 :赵叶锋 班级：食品科学 113 学号： 2016013522 大三的第二学期块结 束了，这个学期操作了四个微生物实验，以及一个自主设计性实验。通过前阶段对四个实验的操作和认知的基础上，展开第五个实验的自主设计。实验分别是菌落总数测定，霉菌和酵母的检查和计数，乳酸菌的检验，微生物药敏试验以及探讨环境因素对微生物生长的影响。 这学期的微生物实验是在上学期微生物实验的基础上的累积和扩展延伸：以培养基的制备与灭菌，玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌，微生物接种技术和细菌的革兰氏染色为技术基础 进行的，以加强学生基础理论知识和基本技能的培养为目的。 下面我来谈谈我在实验中的心得体会。 2 / 23 第一个实验是菌落总数测定。让我重新认识了一下这个名词：菌落形成单位，我现在的理解就是： 1ml 或者 1g 待测样品中菌落的个数，一定要注意的是单位是 CFU/ml 或 CFU/g。还有就是要掌握好对高压蒸 汽灭菌锅的操作。实验之前要充分做好预习工作，以便实验的进行。由于是测定微生物实验，就要尤其小心其他杂菌的混入影响实验结果。因此要做好实验仪器和各种试剂的灭菌，有培养皿，试管，移液枪头，按要求配置好的琼脂培养基和生理盐水，按各自要求用纱布和报纸包扎好，送入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。玻璃仪器在包扎前要进行清洗，并烘干，以免水分沾湿报纸。灭完菌后取出物品进入超净工作台，超近工作台的紫外灯在进入 20 分钟前开启，并在进入时关闭，以免影响人体。要对台面进行消毒处理，用酒精擦拭。可以在等待琼脂培养基冷却到 50摄氏度左右前对 待测样品进行 10倍系列稀释至需要的浓度。要注意的是一定要标记好浓度或者按顺序排列在试管架上以免弄混，同一个试管里吸取样品才能用同一个枪头进行移液。再进行平板接种。待琼脂培养基冷却好后，用右手打开纱布并将锥形瓶拿住，将瓶口靠近酒精灯再进行灭菌，左手拿培养皿用大拇指和食指稍微打开培养皿盖，将琼脂培养基倒入培养皿中心内，不用倒很多，使琼脂培养基没过培养皿表面即可。培养皿一定是平拿在手上的，倒好后轻轻盖上培养皿盖，缓慢地平方在超净工作台台面边缘处，再推至中间。3 / 23 再用移液枪取 1ml 样品快速打入培养皿中央，盖上培养皿盖，然后用手轻轻摇晃，千外不要太大力。然后贴上标签记号，静置。如此依次操作下去。静置一段时间待培养基凝固后倒置放入恒温培养箱培养一段时间再取出进行观察计数。 我们组的实验结果不甚理想，培养皿中的微生物都是连成一片的，或者是培养皿壁上也都长着，主要是由于待测样品打入培养皿后，摇晃不均匀或者太大力了，以至于菌液没分散开来或是跑到培养皿壁上去了。 第五个实验是自主设计实验环境因素对微生物生长的影响。选取 3 个环境因素物理、化学和生物因素均可进行设计。根据前四个实验的基础，通过小组探讨和交流设计出实验方案。并加以验证。通过自主设计实验可以结合小组的智慧，加强团队协作精神和创新思维，通过实验可以验证理论，增加感性认识，培养独立工作能力和思考能力，并使具有过硬的专业技术水平。 通过这次的实验 ，我明白了任何事情丢不是一蹴而就的，而是一个慢慢积累的过程。虽然实验结果不是很理想，但是我参与了过程，通过小组讨论我们也分析了失败的原因，找到了解决的方法，避免了下一次失误。并且从中理解了团队讨4 / 23 论和合作的重要性。以上即是我的全部感想。 微生物实验心得体会 这学期的微生物实验已经结束，这是我第一次接触到微生物的世界中，以前也只是在书本中学习，但是真正走进它们的世界中是通过这个课程开始的。在开始微生物实验之前我是以为这个实验不会很难，但是通过本学期的学习发现这个课程真的很难。你不仅需要理论知识作为铺垫，你还需要有严谨的实验精神。 第一节课老师给我们介绍了我们本 学期微生物实验的几个实验和报告的要求，也让我们了解了微生物实验和以往其他实验的不同。实验步骤虽然很简单，但是往往一个微小的细节处理不当也会导致你整个实验结果的失败。这个我真的深有体会，我们小组的实验结果都很不理想。实验步骤说难也不难，其实无非是先对配置培养液，然后对清洗干净的试管、培养皿以及配置好的培养液进行灭菌，等灭菌完了就放入无菌室进行细菌的接种，最后将接种好细菌和培养液的培养皿放进恒温培养箱进行培养。看似很简单的操作过程我却状况百出。我总结了几点导致这么多次实验失败的地方。第一是操作不够规范，在培养皿 中倒入培养液后没有摇匀导致培养5 / 23 基边缘开裂，未等琼脂培养液凝固就倒置导致培养基分布不均匀。第二是理论知识欠缺，没有等培养液冷却至 40 到 50摄氏度就倒入培养基然后马上就接种了细菌，导致细菌已经被烫死。 好在值得欣慰的是最后一个自主实验还是比较成功的。试验以环境对微生物生长的影响为题设计实验，我们小组通过 PH值，温度，紫外线照射三个方面进行研究，结果很满意，很明显。大肠杆菌在 PH 值为 7 时生长最适，在温 度为 37 时生长最佳，紫外线会抑制其生长。 不得不承认，通过这次实验的学习，我们学到了很多，得到了很多，有些是书本上学不到的，只有自己参与了，操作了，才会知道。也要感谢老师对我们的照顾。 一、生物学中常用的试剂成分及用法 成分： /mL NaOH(甲液 )和 g/mL CuSO4(乙液 )。 斐林试剂： 用法： 6 / 23 将斐林试剂 甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则出现砖红色沉淀。 班氏糖定性试剂： 为蓝色溶液。和葡萄糖溶液混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。 双缩脲试剂： 成分： /mL NaOH(A 液 )和 /mL CuSO4(B 液 ) 用法： 向待测液中先加入 2 mL 甲液，摇匀，再向其中加入 34 滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。 苏丹： 用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色 (被苏丹染成红色 ) 二 苯胺： 用于鉴定 DNA。 DNA 遇二苯胺 (沸水浴 )会被染成蓝色。 卡诺氏固定液： 用于细胞有丝分裂根尖的固定 改良苯酚品红染液： 检测染色体，红色 龙胆紫溶液或醋酸洋红： 碱性染料，用于染色体染色，前者呈深蓝 7 / 23 色，后者呈红色 健那绿： 检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色 碘液： 用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。 20%的肝脏研磨液、 3%的过氧化氢、 %的氯化铁： 用于比较过氧化氢酶和 Fe3+的催化效率。 3%的可溶性淀粉溶液、 3%的蔗糖溶液、 2%的新 鲜淀粉酶溶液： 用于探索淀碘液： 用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝 丙酮： 用于提取叶绿体中的色素 层析液： 成分： 20 份石油醚、 2 份丙酮、和 1 份苯混合而成，也可用 93 号汽油 用途： 可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。 SiO2 ： 在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。 CaCO3 ： 研磨绿色叶片时加入，可中和有8 / 23 机酸，防止在研磨时叶绿体中 的色素受破坏。 蔗糖溶液： g/mL 的蔗糖溶液相当于 30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大， 可用于质壁分离实验。 MS 固体培养基成分 g/mL 的柠檬酸钠溶液： 可用于溶解 DNA。当氯化钠浓度为 2 mol/L、 mol/L 时DNA 的溶解度最高，在氯化钠浓度为 mol/L 时， DNA 溶解度最最低。 浓度为 %时可作为生理盐水。 秋水仙素： 人工诱导多倍体试剂。用于萌发的种子或幼苗，可使染色体组 加倍，原理是可抑制正在分裂的细胞纺锤体的形成。 酒精 9 / 23 体积分数为 50%的酒精 ： 在脂肪的鉴定实验中 洗去浮色。 体积分数为 95%的酒精 ： 观察植物细胞的有丝分裂实验 作用：解离：用质量分数为 15%的盐酸和体积分数为 95%的 酒精 1 1 混合 能使组织中的细胞相互分离开来 DNA 的粗提取与鉴定实验 作用：析出提取含杂质较少的 DNA 原因： DNA 不溶于冷酒精，而细胞中的某些物质可以溶解于酒精 体积分数为 70%的酒精 无水酒精 作用：叶绿体中色素的提取与分离实验 用于绿叶脱色 作用：微生物的培养技术 消毒杀菌 氯化钠溶液： 10 / 23 改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞 ，同时使染色体中的 DNA 与 8% ： 蛋白质分离，有利于 DNA 与染色剂结合 HCl 15%： 有丝分裂、低温诱导染色体加倍 实验 调节溶液 pH 重铬酸钾溶液： 检测酒精，橙色灰绿色 溴麝香草酚蓝水溶液： 检测 CO2，由蓝变绿再变黄 Ca(OH)2：甲基绿： 对 DNA 进行染色 吡罗红： 对 RNA 进行染色 伊红美蓝： 鉴定有无大肠杆菌的存在 NaOH： 用于吸收 CO2 或改变溶液的 pH NaHCO3： 提供 CO2 11 / 23 琼脂： 激素或其他物质的载体或培养基 亚甲基蓝： 用于检测污水的细菌含量 刚果红： 检测纤维素分解菌的存在 酚酞溶液： 酸碱指示剂，用于显示 NaOH 渗透入琼脂块的深度。 果胶酶： 水解植物细胞壁的果胶层，以增加果汁的产量和澄清度 检测 CO2 【补充完善】 【补充完善】 【补充完善】 四、实验条件的控制方法 12 / 23 1、加水中氧气 泵入空气或吹气或放入绿色植物 微生物实验总结 微生物在地球上存在了 30 多亿年，人类在数百万年前出现之后就一直和微生物发生着千丝万缕的联系。发面、果酒和啤酒酿造、牛奶和奶制品的发酵等都是那些看不见的小生命做出的贡献。微生物存在于我们生活中的每一个角落，通过微生物实验我们可以更加的了解微生物的“习性”就如同养的宠物一样，什么样的食物会发育更好，什么样的天气会心情好，什么样的玩具会有益等等。培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对 PH 值的要求一般不同。同过这些实验便能一一考证 。 实验是培养学生的动手能力、观察能力、思维能力、表达能力、合作能力、创新能力等的最佳途径。还要求实验技术人员必须具备相应的素质，实验操作人员必须 具备较扎实的专业基础、熟练的实验技能及高度的责任心，在工作中要善于总结，同时还要和理论课老师积极沟通，这样才能够真正13 / 23 的学好微生物实验这门课程。在每一次实验中不仅仅要专心认真的做实验，还要认真的写实验报告，并从实验中总结不足。再比如在调试显微镜的时候由 低倍向高倍慢慢调试，在使用高倍时更应该小心调试细准焦螺旋，以免压坏载玻片，在使用油镜后要将油镜拭擦干净，保证显微镜的清洁，这些细节是需要注意的。 以下就我们做的实验错误做列举： 进行菌种接种的时候，选择合适的 (来自 : 海 达范文网 :微生物实验总结 )方式并，注意不要把平板弄破，等到平板 凝固后才可以进行接种。接种时也要注意在无菌条件下接种。经过培养后，再观察最后得出结论。在酸奶中菌落测定时，封口不及时有外界的细菌污染。药敏实验中因为试验中放置牛津杯时也将培养基戳破，导致实验观察受到影响，并且在接种时因为乱放培养基将未接种和已接种的培养基混淆导致试验中 3 个培养基并没有实验结果，实验失败。 我们的自主设计实验是探究渗透压对微生物生长的影响，原理是将细菌置于抵渗液中，菌体因吸收水分膨 胀甚至破裂；如果将菌体置于高渗液中，则菌体内的水分就会渗出，结果发生质壁分离现象。不同的细菌对渗透压的抵抗力不同。但14 / 23 无论哪种细菌对渗透压的抵抗力是有一定限度的，超过一定限度则使菌体生长受到抑制只有在等渗溶液中，微生物才能正常生长、繁殖。实现这一理论我们需要制作 200ml 的牛肉膏蛋白胨培养基，将其调 PH 至 ,后平均分成四份各 50ml，分别加入 0g、 1g、 5g 的 NaCl 固体，配置成 NaCl 浓度分别为0%、 2%、 5%、 10%的 4 种不同浓度的牛肉膏蛋白胨培养基 .从培养基中吸取 10ml 加入试管中，不同浓度的培养基各取 三支试管。在此操作时因实验思考不严谨是采取分别称量配置了 3 份不同浓度的溶液，而正确的做法应该是配一份未加入NaCl 的培养基，再份为 3 份，加入不同克数的 NaCl，这样一来可以避免由于营养素的计量不同导致的误差。虽后来的实验结果并未受到影响，但思考不严谨是值得反思的。 通过以上的错误我们明白了做好实验的具体要求，实验前做好预习，并思考实验原理。实验中正确选择实验方法与实验器材，学会控制实验条件。 知 道如何实验、判断结果的可靠程度。 理解和掌握有关课程内容和重要的物理概念，以形成物理思想，培养解决物理问题的能力。 通过实验培养掌握基本物理量的测量方法，以培养实验技能。最后就是最重要的一点，培养自己严谨的实验态度、科学的实验方法及良好的实验习惯。 15 / 23 微生物实验工作总结 一、教学实验室的改建与新建工作 XX 年初我院对 qj05 楼一楼进行实验室改造，成果如下： 1. 更换中央实验台 8 只 楼 108 、 112 两个实验室原为工 艺实验室和书库，经改造建成微生物实验室，可兼做化学类实验。 3. 改建预备室 1 个 4. 改建微生物培养室 1 个 5. 改建饲料工艺实验室 1 个 6. 改建计算机房 1 个 此次改造后，我院教学实验室增加面积 200 多平方米，并且将本科教学实验室集中在 qj05 楼一楼，可基本满足本科实验教学的需要，也便于管理。 16 / 23 二、教学实验室仪 器设备的购置计划 最近几年食品学院在调整教学计划，增开大型综合实验的同时，也加强了实验室条件建设，基础实验分室的仪器设备得到补充更新，大大改善了学生的实验条件，因此实践教学的质量也有所提高，生均仪器设备占有量已超过 1000 元。 XX 年食品学院新开了一个食品质量与安全专业，需要进 行必要的建设，另外由于我院教学实验室基础实验分室经改造后，在原信控大楼一楼成立了本科教学实验室，有五个实验室，比原先增加了两个实验室，以前由各研究所承担的部分实验课现在也由院教学实验室承担，现在承担的实验课增加了 14 门学院基础实验分室承担的实验课程增加，需要添置仪器设备；部分仪器设备需要更新；部分 实验分室的 仪器设备需要配套；学院新办专业食品质量与安全也需 要进行必要的建设，由于以上原因学院向校教务处申请实验室条件建设项目预计需要建设经费 80 万元，但该项目 XX 年初批准后，实验室的有关同志从寒假开始就进行了采购工作，在上半年全部完成。本项目建成后，所有实验室，包括仪器设备全部可对食品学院三个专业的学生开放，除教学实17 / 23 验课外，对本科生毕业论文也可提供较好的条件。每年受益的学生人数约 600 多人，并为 XX 年食品分析这门食品学院公共课程的教学实验提供一定的准备，该项目完成后也为 学院的研究生实验课提供了较好的条件。尤其是工艺实验分室购置了一套肉制品的小型实验室加工设备，为本科教学实验以及科研项目的进行提供了必要的条件。本期建设项目结束后，教学实验室已向教务处递交了总结报告。 表 1 XX 年完成的实验室建设项目一览表 项目名称 实验分室名称 申请经费金额 执行金额 食品专业综合实验条件建设 工艺实