微生物检验培训总结

1 / 22 微生物检验培训总结 微生物检测培训问题总结 1. “ 菌株的传代次数不得超过 5 代 ” 表示菌株传代只能传递到第四代，使用第四代时意味着菌株已经是第五代，因此，传代记录中不能显示传 5 代。 2. 标准菌株确认工作是否齐全：存活性确认，纯度确认，菌落形态、染色镜检及生化反应进行确认。 3. 菌种保藏所用的冰箱是否经过确认，是否容易结霜，且保存菌种是否采用两种以上的方式，防止意外流失。 4. 培养基的适用性检查： 微生物限度检查中培养基适用性检查：在注重回收率达到70%时，是否确保检查用培养基上的菌落形态同对照培养基上一致。 控制菌检查中培养基适用性检查：促生长能力 -最短培养2 / 22 时间内长出相应的菌落；抑制能力 -最长培养时间下不得有菌生长；细菌培养时间： 18-24-48 小时；真菌培养时间：24-48-72 小时，促生 长取最短时间，抑制取最长时间。因此供试品在检查时，培养时间应取最长时间。 环境监测的培养基适用性检查： “ 中国药典附录：药品微生物实验室规范指导原则 ” 中规定：用于环境监测的培养基须特别防护，最好是双层包装和终端灭菌。如果不能采用终端灭菌的培养基，在使用前应进行 100%的预培养避免假阳性出现。同时做促生长试验，防止假阴性出现。 沉降菌监测所用培养基的适用性检查： 培养基回收率确认； 确认培养基放置最长时间，在标准风速下，一般不宜超过 2 小时； 同时确认温度、湿度及风速对培养基放置的影响。 5. 洁净区微生物监控标准的理解是否到位？如何计算平均值。 6. 生产抗生素的洁 净区进行环境监测，其培养基是否添加有中和剂，如亚硫酸氢钠、聚山梨酯等。 3 / 22 7. 洁净室是否使用消毒剂与杀孢子轮滑使用，杀孢子剂一般半月 1 次 8. 无菌检查： 在结果进行观察 时，最好将集菌器置于黑白背景下观察，确保不能因灯检原因而出现假阴性。 无菌检查结果判断： 集菌器出现浑浊，但证明不是微生物，判供试品符合规定； 以下情况可证明无菌检查结果无效：设备及环境微生物监控结果不符合规定；回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素；供试管中生长的微生物经 鉴定后确认是物品或无菌操作技术所引起。此时可以提出复验申请，复验取样条件： 尽可能使用原样品 尽可能使用与第一份来源相同的另一份样品 尽可能在同一处重新取样 9. 超净工作台及生物安全柜中不能使用酒精灯：酒精灯的使用会导致局部温度对流，在生物安全柜中则会造成洁净气4 / 22 流紊乱，从而将台面污染的灰尘或者周围污染的空气带入到无菌操作区，从而污染样品；另外超净工作台中放置酒精灯，洁净风是超外吹的，对流空气中污染的菌可能对操作人员造成伤害。 10. 实验室进行调查：一般将重分析、重检验、重取样同时进行，可以节省调查时间，延缓车间库存时间。 11. 制药用水中生物膜出现的可能现象： 在同一或同几个监测点多次检测均出现菌落； 菌落的种类多样，形态多样； 措施：采用大量冲洗、化学消毒如次氯酸钠、二氧化氯等其他办法 水质分析微 生物检测培训总结 2016 年 5 月 14 日至 5 曰 17 日，我参加了由武汉水务集团有限公司水质监测中心举办的为期四天的水质分析微生物检测培训班。本次培训班主要针对生活饮用水中细菌数指标即细菌总数和总大肠杆菌群的分析方法而进行的培训，通过这次培训，使我受益匪浅，以下是对这次学习作的一个总结： 5 / 22 一 通过学习，了解到水中所含有的细菌来源于空气、土壤、污水、垃圾和动植物的尸体，所以水中细菌的种类是多种多样的，其中包含病原菌、通过水传播的疾病有痢疾、伤寒、霍乱、肝炎和急性肠胃炎等，这些将对人体健康具有潜在的危害性，原水经过净化消毒后，细菌总数和大肠杆菌群指数如果能达到饮用水标准的要求，说明病原菌被杀灭，普通细菌也明显减少，因此水中细菌总数和总大肠杆菌群的测定是评价水质清洁程度和考核给水净化效果的指标之一 。 二 水中细菌的检测方法 1 细菌总数：水样在营养琼脂上在有氧条件下 37 培养 48小时后，所得 1mL 水样所含菌落的总数。 以无菌操作方法用无菌吸管吸取 1mL充分混匀的水 样注入灭菌平皿中，倾注约 15mL 已融化并冷却 45 左右的营养琼脂培养基，并立即旋匀平皿，使水样与培养基充分混匀，待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上 ，置于 361 培养箱内培养 48 小时，进行菌落计数，此即为水样 1mL 中的菌落总数。 6 / 22 2 总大肠菌群检测方法有：多管发酵法、滤膜法、酶底物 法 多管发酵法：总大肠菌群指一群在 37 培养 24 小时能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。取 10mL 水样接种到 10mL 双料乳糖蛋白胨培养液中，取 1mL水样注入到 9mL 灭菌生理盐水中，混匀后吸取 1mL 注入到10mL 单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种 5 管，将各种管置 361 培养箱内培养 242 小时，如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气产酸，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产 气者，将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于 361 培养箱内培养 1824 小时，观察菌落形态，挑取符合特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实实验。 滤膜法：总大肠菌落滤膜法是指用孔径为 0的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在掺加乳糖的选择性培养基上 37 培养 24小时，能形成特征性菌落 的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌以检测水中总大肠菌群的方法。 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面朝上贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将 100mL 水样注入滤器中，打开滤器阀门，在 -*104Pa 下抽滤，水样抽滤完后再抽气约 5秒，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部7 / 22 分，移放在 红亚硫酸钠培养基上，滤膜截面细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置 ，放入 37 恒温箱内培养 242 小时，挑取符合特征菌落进行革兰氏染色，镜检。 酶底物法：总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生 -半乳糖苷酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体是培养基呈现颜色变化，以此来检测水中总大肠菌群。 以上是我这次培训所学内容的小结，通过学习 ，不仅提高了细菌分析的知识，也为以后开展新的微生物项目打下了良好的基础。 微生物培训总结一 2016 年 12 月 19-20 日，我去杭州参加了关于微生物检验的继续培训。这次培训主要讲了微生物的概念、重要性、以及微生物的一些相关专业基础知识。 药品微生物检验作为一门应用微生物技术、是对药品研制、生产、销售和使用过程中进行质量检测和安全评价的基础专8 / 22 业技术。随着制药工业的迅速发展和科学技术的进步，药品微生物检验经多年时间的不断积累，在理论上不断充实，逐步发展形成药品领 域的一门重要分支学科，专业技术检验已广泛应用药品领域的各项专业和部门。国家药典收藏的微生物学检测项目逐版增加，药品微生物检验已成为执行国家药典、药品标准和对药品进行质量监督的法定依据。 本次培训是为了随着医药工业的发展，药品生产企业，广泛推行 GMP 认证，微生物学检测手段是基本内容。这让我更加适应当前药品的微生物检验技术工作，将理论与实践的想结合，为成为长期从事药品微生物检验的专业人员做准备。 2016 年 12 月 21 日 微生物实验心得体会 这学期的微生物实验已经结束，这是我第一次接触到微生物的世界中，以前也只是在书本中学习，但是真正走进它们的世界中是通过这个课程开始的。在开始微生物实验之前我是以为这个实验不会很难，但是通过本学期的学习发现这个课程真的很难。你不仅需要理论知识作为铺垫，你还需要有严谨的实验精神。 9 / 22 第一节课老师给我们介绍了我们 本学期微生物实验的几个实验和报告的要求，也让我们了解了微生物实验和以往其他实验的不同。实验步骤虽然很简单，但是往往一个微小的细节处理不当也会导致你整个实验结果的失败。这个我真的深有体会，我们小组的实验结果都很不理想。实验步骤说难也不难，其实无非是先对配置培养液，然后对清洗干净的试管、培养皿以及配置好的培养液进行灭菌，等灭菌完了就放入无菌室进行细菌的接种，最后将接种好细菌和培养液的培养皿放进恒温培养箱进行培养。看似很简单的操作过程我却状况百出。我总结了几点导致这么多次实验失败的地方。第一是操作不够规范，在培养 皿中倒入培养液后没有摇匀导致培养基边缘开裂，未等琼脂培养液凝固就倒置导致培养基分布不均匀。第二是理论知识欠缺，没有等培养液冷却至 40 到 50摄氏度就倒入培养基然后马上就接种了细菌，导致细菌已经被烫死。 好在值得欣慰的是最后一个自主实验还是比较成功的。试验以环境对微生物生长的影响为题设计实验，我们小组通过 PH值，温度，紫外线照射三个方面进行研究，结果很满意，很明显。大肠杆菌在 PH 值为 7 时生长最适，在 温度为 37 时生长最佳，紫外线会抑制其生长。 10 / 22 不得不承认，通过这次实验的学习，我们学到了很多，得到了很多，有些是书本上学不到的，只有自己参与了，操作了，才会知道。也要感谢老师对我们的照顾。 一 . 基础知识 微生物基础知识 1. 培养基 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一 般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的 pH 值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在 98 100 下融化，于 45 以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 11 / 22 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 消毒与灭菌知识 灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭 菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。 洁净室行为规范 实验室安全知识 12 / 22 二 . 基本操作 培养基配制、灭菌、使用和保藏 1. 配制 按照培养基瓶签所示，准确称量一定培养基干粉于合适的容器，加纯化 水 溶解。 根据培养基对 pH 的要求，用 5%NaOH 或 5%HC1 溶液调至所需pH。 如需分装，应先加热搅拌，待培养基完全溶解并均一后进行。分装时注 意不要使培养基沾染在管口 或瓶口，以免污染。液体分装高度以试管高度的 1/4 左右为宜。固体分装装量为管高的 1/5，半固体分装试管一般以试管高度的 1/3 为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 13 / 22 培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面， 斜面长度一般以不超过试管长度的 1/2 为 宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 2. 灭菌 按照培养基瓶签所示的灭菌条件对配制好的培养基进行 高压灭菌。配制好的培养基应在 2 小时内进行灭菌。 3. 保藏和使用 液体培养基管 置专用不锈钢筒内， 2 25 避光保存， 3 周内使用。在不锈钢筒贴标签，标明培养基名称、培养基配制日期、高压灭菌编号等信息。不同批次培养基不得置 于同一不锈钢筒内。 平板和接触皿 14 / 22 置专用不锈钢筒，标明培养基名称、制备日期、培养基的灭菌编号，用保鲜膜密封筒口后， 2 25 避光保存， 3 周内使用。不同批次平板和接触皿不得置于同一容器内。 培养基使用之前应预培养，合格后方可使用。 营养琼脂培养基： 25-35 ，预培养 3 天。 硫乙醇酸盐液体培养基： 25-35 ，预培养 2 天。 虎红琼脂培养 基和改良马丁培养基： 23-28 ，预培养 3 天。 消毒剂配制和使用 1. %新洁尔灭溶液的配制和使用 基准处方： 5%新洁尔灭溶液 20ml 注射用水 980ml 作为手部和衣服浸泡消毒，设备、操作台面和洁净室六面擦洗消毒以及 15 / 22 地漏消毒用，有效期为 3 个月。 2. 75%酒精的配制与使用 基准处方： 95%乙醇 790 ml 纯化水 210 ml 作为消毒双手，擦洗设备、操作台等表面消毒剂，有效期为14 天。 3. 2%来苏儿溶液的配制和使用 基准处方： 50%来苏儿溶液 40 ml 纯化水 960 ml 拖擦地面用，临用前配制。 4. 甲醛熏蒸 作为环境空气和表面消毒剂。 操作步骤：关闭风机 无关人员撤出消毒区，操作人员戴防护手套和防毒面具 将设备及器具暴露于空气中 将盛有甲醛溶液的不锈钢饭盒置不锈钢台面 上层饭盒倒入需要16 / 22 体积的甲醛，下层饭盒倒入 300ml 95%或无水乙醇 点燃下层饭盒内乙醇，操作人员迅速离开 保留被消毒空间的甲醛气体 至少 8 小时 消毒结束后，开启风机，直至消毒空间无甲醛刺激性气味，方可进入工作。 5. 臭氧消毒 作为环境空气和表面消毒剂。 操作步骤：关闭风机 无关人员撤出消毒 区，操作人员戴防护手套和防 毒面具 将设备及器具暴露于空气中 设定消毒时间，开启臭氧法生器面 操作人员迅速离开 保留被消毒空间的臭氧气体至少 8 小时 消毒结束后，开启风机，直至消毒空间无臭氧气味，方可进入工作。 6. 消毒剂交替使用 隔周交替使用 %新洁尔灭溶液和 75%酒精进行手部消毒。 隔周交替使用 %新洁尔灭溶液和 2%来苏尔溶液拖擦地面。 17 / 22 洁净区每月对空气消毒一次，甲醛消毒 6 个月一次，其余时间采用臭氧消毒。 微生物室设备与设施 1. 高压灭菌器 原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内， 通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽 ,待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于 100 的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 操作步骤：向高压灭菌器灭菌舱内 加水至排泄管口高度 放入待灭菌物 品，关闭灭菌器盖 开启电源，设置灭菌温度和时间以及排气温度 按 start 键开始灭菌 灭菌结束后，取出灭菌物品，18 / 22 关闭电源 清洁灭菌舱。 注意事项 待灭菌物品间应留适宜间隙，便于蒸汽穿透。 当温度在 80 以上时，盖将不会被打开；当温度低于 60时，即可开盖。 每次灭菌前应保持灭菌舱内水位在规定线以上。 干热灭菌法常用于 空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱