hiv试剂说明书

1 / 13 hiv 试剂说明书 HIV-1 p24 抗原 ELISA 检测试剂盒说明书 本试剂盒采用夹心法原理检测人血清 /血浆、培养物上清中的 HIV-1 p24 抗原，预先采用 p24 单克隆抗体包被固相微孔板。若样本中含有 HIV-1 p24 抗原，则与包被板结合，再加入生物素标记 p24 多克隆抗体，反应后再加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，结合形成夹心复合物，洗涤除去未结合的酶标记物，加入 HRP 底物液，读数测量，根据临界值判断样本中是否含有 HIV-1 p24 抗原。 试剂组分 1. 包 被板：包被有抗 HIV -1 p24 抗体的 96 孔酶标板， 2 8保存。 2. 阴性对照： /瓶；含正常人血清，防腐剂和色素，2 8保存。 3. P24 抗原阳性对照： /瓶 1 瓶；含基因工程 P24抗原的人血清，防腐剂和色素， 2 8保存。 4. 结合物 1：含有生物素标记的 P24 多克隆抗体 5. 结合物 2：含有辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素 6. 底物液 A： 7. 底物液 B： 8. 终止液： 2 / 13 9. 浓缩洗涤液： 10. 封板膜： 11. 说明书： 1 份。 操作程序 1 实验设计：将包被板从密封袋中取出，根据所需数量在板架上放好微孔板条。设空白对照一孔，阴性对照两孔， P24 抗原阳性对照 2 孔， HIV 抗体阳性对照 2 孔。 2 加结合物 1：每孔加入结合物 1 25 L。 3 加样：依次加入样品、阴性对照、 P24 抗原阳性对照 75 L。 4 温育：用微量震荡器充分振荡混匀，用封板膜封盖反应板， 37温育 60 分钟； 5 洗板：撕 去封板膜，吸干微孔板中所有液体，每孔加入稀释好的洗涤液 400 L，浸泡至少 30 秒，吸干。如此洗板 5 次，最后在干净的吸水纸上拍干。 6 加酶：空白孔除外，每孔加入结合物 2100 L。 7 温育：用新的封板膜封盖反应板， 37温育 30分钟。 8 洗板：撕去封板膜，如上述洗板方法洗涤 5 次，最后在干净的吸水纸上拍干。 9 加底物液： 每孔加入底物液 A 50 L，底物液B 50 L，用微量震荡器充分振荡混匀， 37避光温育 15 分3 / 13 钟。 10 加终止液 ：每孔加入终止液 50 L。 11 检测：双波长测量 本试剂盒仅供科研使用 HIV 快速检测试剂使用说明 该产品是一种不需要任何仪器设备的全血 /血清 /血浆检测法，是利用免疫层析分析原理、双抗原夹心法快速检测血液中是否含有 HIV1/2 抗体，从而用于临床判断人体是否受到 HIV1/2 型病毒的感染。 【测定原理】 采用高度特 异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测血液中是否含 HIV1/2 抗体，试剂盒中含有被事先固定于膜上测试 区 的重组 HIV 抗原和质控区 的相应抗体。测试时，血标本滴入试剂盒加样孔内，血标本中的 HIV1/2 抗体与预包被在膜上的重组抗原 -乳胶结合物反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析，在测试区与固定在膜上的重组 HIV 抗原反应。如果血液中含有抗 HIV-1 或 HIV-2 抗体，在测试区内会出现一条红色条带，表明是阳性结果。如果在测试区内没有出现红色条带，则血液中不含有抗 HIV1/2 抗体，表明是阴性结果。无论抗 -HIV1/2 抗体是否存在于血液中，混合物都会继续向上层析至质控区，质控区的相应抗体与乳胶结合物反 应出现一条红色条带。质控4 / 13 区内所显现的红色条带是判定层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 【标本收集】 血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在 24 小时内使用以避免融血 血清 /血浆标本的收集：血清 /血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在 2-8 C 可保存一周。如长期保存需冷冻，避免反复冻融。 【操作步骤】 在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明，使用前将检测试剂盒和全血 /血清 /血浆标本恢复至室温，取出反应缓冲液并放臵 20 分钟使其恢复至室温。 从原包装铝箔袋中取出试剂盒。在 1 小时内应尽快地使用，特别是在室温高于 30 C 或是在高度潮湿的环境中应尽快地使用。在一小时内测试将会得到最佳效果。 将试剂盒臵于干净平坦的台面上，用吸管吸取指尖血或静脉血后滴入 1 滴全血 /血清 /血浆于加样孔 S 中，随后加入 1 滴缓冲液于加样孔 S 中。 等待红色条带的出现，在 15 分钟左右读取测试结果。关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的抗 -HIV1/2 抗体，会导致出现的 T 5 / 13 线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。在 20 分钟后读取的结果无效。 【结果判定】 阳性：两条红色条带出现。一条位于测试区内，另一条位于质控区内。 阴性：仅质控区出现一条红色条带，在测试区内 无红色条带出现。 无效：质控 区未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在任何情况下，应 重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 注意：由于样本中抗 -HIV 抗体滴度的不同，测试区内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。 【使用限制】 HIV1/2 乳胶层析法检测试剂盒仅用于体外诊断，并适用于检测全血 /血清 /血浆样本中的抗 -HIV1/2 抗体。 此检测仅 为初筛实验，阳性样品需要转送上级确证实验室确证以后方可报告。 【存储条件】 原包装储存于 2-30 C，并装在密封的袋中，切6 / 13 忌冷冻或超过有效期后使用。 人类免疫缺 陷病毒 1 型 p24 抗原 酶联免疫试剂盒说明书 【产品名称】 通用名：人类免疫缺陷病毒 1 型 p24 抗原酶联免疫试剂盒 英文名： ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURE SUPERNATANT 【包装规格】 96 人份 /盒。 【预期用途】 本试剂盒用于人类免疫缺陷病毒 1 型 p24 抗原的定量检测，适用于人血清及细胞培养上清液等标本，仅供研究使用。 【检验原理】 本产品采用固相酶联免疫吸附分析法检测人血清中的游离 HIV-1 p24 抗原和细胞培养上清液等标本中的 HIV-1 p24 抗原。本分析方法是基于双抗体夹心的非竞争性免疫分析。校准品和样品中 HIV-1 p24 抗原与固相抗 - p24 单克隆抗体和生物素标记的抗 -p24 多克隆抗体通过免疫反应，形成7 / 13 固相抗 -p24 单克隆抗体 p24 抗原 抗 -p24 多克 隆抗体 -生物素复合物；温育后洗涤，洗去非特异或多余的抗原和多余的生物素标记的抗 - p24 多克隆抗体；然后加入 HRP 标记的链亲和素，形成固相抗 - p24 单克隆抗体 p24 抗原 抗 -p24多克隆抗体 -生物素 链亲和素 -HRP 复合物；温育后洗涤，洗去多余的 HRP 标记的链亲和素。加入 TMB-H2O2 底物溶液，HRP 催化 H2O2 氧化 TMB 生成蓝色的产物，加入终止液终止酶催化反应，生成黄色产物。其吸光度与校准品和样品中的HIV-1 p24 抗原浓度成正相关。通过剂量反应曲线可得出样品中 HIV-1 p24 抗原浓度。 反应原理图： Microwell 【主要组成成份】 1. 抗体包被板 2. HIV-1 p24 抗原校准品 3. 校准品稀释液 4. 生物素标记抗体 5. HRP 标记链亲和素 6. 浓缩洗涤液 1 块 1mL 1 支 20mL 1 瓶 5mL 1 瓶 8 / 13 20mL 1 瓶 50mL 1 瓶包被有鼠抗 -HIV-1 p24 单克隆抗体的聚苯乙烯微孔板，约 200ng/孔。 8 孔 12 条。 铝箔袋密封包装，含干燥剂。标签编号为 R1。 重组 HIV-1 p24 抗原溶液， 200IU/mL，稀释液为校准品稀释液。用英国国家生物标准与检定所提供的 WHO 标准品校准。 绿色 PP 盖子和无色 PP 塑料管。标签编号为 R2。 磷酸盐缓冲液，含动物血清和钙化的正常人血浆 ， pH 约。防腐剂为 NaN3 和 EDTA。 绿色 PP 盖子和无色 HPDE 塑料瓶。 标签编号为 R3。 生物素标记的兔抗 -HIV-1 p24 多克隆抗体，约 4g/mL。缓冲液 为 Tris-HCl，含动物血清、稳定剂、表面活性剂和绿色染料， pH 约。防腐剂为 NaN3。 蓝色 PP 盖子和无色 HPDE 塑料瓶。标签编号为 R4。 HRP 标记链亲和素，约 g/mL。 缓冲液为 Tris-HCl，含动物血清、稳定剂、表面活性剂和红色染料， pH 约。防腐剂为 ProClin?300。 红色 PP 盖子和棕色 HPDE 塑料瓶。标签编号为 R5。 含表面活性剂的磷酸盐缓冲液， 20 倍浓缩。防腐 剂为 ProClin?300。 无色 PP 盖子 和无色 HPDE 塑料瓶。标签编号为 R6。 7. 底物缓冲液 9 / 13 10mL 1 瓶 含 H2O2 的乙酸盐缓冲液， pH 约。 无色 PP 盖子和无色 HPDE 塑料瓶。标签编号为 R7。 8. 显色剂 10mL 1 瓶 含 TMB 的乙酸溶液， pH 约。 白色 PP 盖子和棕色 HPDE 塑料瓶。标签编号为 R8。 9. 终止液 10mL 1 瓶 2mol/L H2SO4 溶液。 黄色 PP 盖子和无色 HPDE 塑料瓶。标签编号为 R9。 10. 封板膜 11. 说明书 6 张 用于温育时微孔板的密封。 1 份 本产品使用说明。 【储存条件及有效期】 试剂盒置 28保存，有效期为 12 个月。 【适用仪器】 酶标仪、洗板机、恒温培养箱等。 【样本要求】 1. 样本：人血清样本，和细胞培养上清液等标本。 2. 存放：样本于 28可储存 2 天；样本长期储存应放置于 -20或 -20以下环境中，且不宜反复冻融 5 次以上。 【检验方法】 1. 试剂配制方法 10 / 13 A、 HIV-1 p24 校准品系列的配制： 取 6 支离心管，编号 A、 B、 C、 D、 E 和 F。管 F 中取900 L 校准品稀释液，加入 100 L HIV-1 p24 校准品，混匀，作 1:10 稀释，配制成校准品 F；管 E 中取 500 L 校准品稀释液，加入 500 L 校准品 F，混匀，作 1:2 稀释，配制成校准品 E ；管 D 中取 500 L 校准品稀释液，加入 500 L校准品 E，混匀，作 1:2 稀释，配制成校准品 D；管 C 中取500 L 校准品稀释液，加入 500 L 校准品 D，混匀，作 1:2稀释，配制成校准品 C；管 B 中取 500 L 校准品稀释液，加入 500 L 校准品 C，混匀，作 1:2 稀释，配制成校准品 B；以校准品稀释液作为校准品 A。共配制成 6 个浓度的 HIV-1 p24 校准品系列： A 0、 B /mL、 C /mL、 D 5IU/mL、 E 10IU/mL 和 F 20IU/mL。配制好的 HIV-1 p24 校准品系列应保存在 28?C，于一月内使用。 校准品浓度 20IU/mL 10IU/mL 5IU/mL /mL /mL B、 工作浓度洗涤液的配制： 用纯水将浓缩洗涤液稀释 20 倍，即为工作浓度洗涤液。工作浓度洗涤液应保存在 28，于一月内使用。 2. 标准操作方法 A、 从铝箔袋中取出所需数量的微孔板条，装至微孔板架上。设空白对照 1 孔， HIV-1 p24 校准品 A、 B、 C、 D、 E 和 F 各 2 孔，其余各孔为待测样品，建11 / 13 议每个待测样品均设置 2 孔；编号标记。向各孔内分别加入25 L 的生物素标记抗体，然后再向各孔内分别加入 75 L的 HIV-1 p24 校准品或待测样品，轻轻振荡微孔板，使内容物充分混匀。 B、 用封板膜将微孔板密封，置 37温育 60分钟。 C、 弃去微孔板反应孔内液体，每孔加入 350 L 工作浓度洗涤液，然后将洗涤液弃 去。重复洗板共 5 次，最后拍干。 D、 每孔加 HRP 标记链亲和素 100 L，用封板膜将微孔板密封，置 37温育 30 分钟。 E、 弃去微孔板反应孔内液体，每孔加入 350 L 工作浓度洗涤液，然后将洗涤液弃 去。重复洗板共 5 次，最后拍干。 F、 每孔加底物缓冲液和显色剂各 50 L，用封板膜将微孔板密封，置室温 避光温 育 30 分钟。 G、 每孔加终止液 50 L，轻轻振荡微孔板，使内容物充分混匀。 H、 终止反应后 1 小时内，用酶标仪在 450nm 波长处，测定各孔吸光度值，参考波长选择 620-700nm。 3. 数据处理 12 / 13 A、 求出 HIV-1 p24 抗原校准品的吸光度平均值。 B、 以 HIV-1 p24 抗原校准品的吸光度平均值为纵轴，以 HIV-1 p24 校准品的浓度为横轴，在双对数坐 标图上作出标准曲线。 C、 如果待测样品试验了 2 孔，求出待测样品的吸光度平 均值。 离心管编号 F E D C B 校准品稀释液 900 L 500 L 500 L 50