层析柱(色谱柱)填料介质的装载及洗脱操作规程.doc

层析柱（色谱柱）填料介质的装载及洗脱操作规程工业制备层析柱（色谱柱）的填料装载充填和洗脱操作的规范直接影响色谱分离纯化工艺过程的效率，迈思通公司经过多年的实践经验和该行业专家的指导，编写了关于层析柱（色谱柱）吸附介质的充填及洗脱规程的方法，供广大用户和科研者参考。一、 柱头安装是否合适及是否严密的检查1、 检查下柱头是否按图纸要求安装?（要求按图纸要求安装）2、 检查下柱头内，是否安装了防止吸附剂（例如硅胶）漏出的滤布（或滤网）。3、 所用滤布（滤网）的材质要求能耐所用溶剂的腐蚀，而且孔径很小，一般要求使用500目以上孔径大小的滤布（网）。4、 下柱头安好，紧固后，从柱上端（开口）加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂（例如已烷、石油醚、甲苯等），使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米，仔细观察下柱头是否漏溶剂。如果漏，则必须坚固（或重装），直至不漏为止。5、 检查确实不漏后，放出柱内溶剂，准备装吸附剂（例如硅胶等）。二、充填吸附剂以充填（或称装填）硅胶为例，作如下说明：1、 干法装柱、取吸附剂（例如硅胶）记下硅胶的量，（等装完柱后，检查剩余硅胶量，就可以知道装入柱中的硅胶量了）。、工作人员戴上口罩，准备好木槌，有人从柱上端倒入一定时的硅胶，柱下边有人用木槌敲击柱外壁，振实硅胶；一边加硅胶，一边敲击柱；最好硅胶加到什么高度，就在此高度敲击；且向上下移动敲击。如此，直至硅胶装满时为止；再上下移动敲击一阵子；至硅胶上平面不再下沉，而且硅胶面很实时为止。、如果体系中没有设预柱，层析柱中上端硅胶不把装满，留出空间待“上样”用。、如果有预柱的体系，层析柱应装满硅胶。、干法装柱，粉尘大，且敲击声大，柱外表易变成不光亮，但不耗溶剂。2、 湿法装柱、同上，准备一定时的硅胶，且记录下硅胶量。、准备一只30-50升的耐溶剂腐蚀的塑料桶，例入极性小的且配洗脱剂时需用的溶剂（例如已烷，石油醚、甲苯等），再例入硅胶，搅拌混合。再将此浆液倒入（或用勺舀）层析柱中。 这样，一次次倒入后，柱内浆液面上升到柱上部；再将柱下端出液管通过一缓冲罐与真空系统接通（事先接好）。开关真空，使柱上端浆液慢慢下降，再不断补浆液（最好使硅胶面总是在液面下，这样柱中几乎没有空气），直至装满。再不断开真空抽液，不断从柱上端加入溶剂，直至硅胶面基本不降为止。、湿法装柱，有一部分溶剂损耗，且溶剂气味大，环境不佳；但粉尘少，且不伤柱的外表面。、干法装的硅胶量，有可能比湿法装得稍多一点三、上样 1、干法上样 、制样：将物料用极性较大的且洗脱剂中需用的溶剂溶解成浆状（或溶液 状），再加入硅藻土（或硅胶）充分混合，晾干；再粉碎成粉未状，混合均匀。、将制好的样品，置于预柱中或层析柱上端硅胶床层的上面，铺平；再放上滤布（网），筛板，再按图装好柱上端封头。2、 湿法上样、制样：将物料用极性比硅胶小的溶剂（例如：二氯甲烷、乙酸乙醇-乙烷混合液、乙烷、甲苯等）溶解或制成浆状，直接倒在层析柱硅胶床层的上面，铺平即可（如果上样液多，也可以用泵（或氮气）慢慢打（压）入柱中）。、同上，放上滤布（网）筛板，装好上封头。四、洗脱1、 平衡柱子即用洗脱剂中极性小的溶剂（例如乙烷、二氯甲烷、甲苯等）用计量泵（或氮气）打入（压入）层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶，不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来，而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外，此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润，且排出空气，有利于续后的洗脱分离过程。当平衡用的溶剂从柱下流出后，可以停止此过程，改用洗脱剂洗脱分离过程；平衡过程也可以再理行一段时间，将柱子中的空气多排出一些，但溶剂耗量也会增加。2、 洗脱根据小试结果，用一定组成的洗脱剂洗脱柱子中硅胶上吸附着的各种物质，且达到分离。洗脱时溶剂的流速选用1-2cm/min较合适。3、 洗柱当有用物质流出柱子后，再改用极性大的溶剂将硅胶床层内的极性