创新科技项目结题报告书

项目类别项目批准号附件3 华南农业大学大学生科技创新活动项目结题书项目名称： 猪增生性肠炎的流行病学调查 申 请 人： 杨明亮 沈远志 刘丽嫦 所在院部： 兽医学院 专业年级： 动物医学2002级 联系电话13580460295指导教师: 黄毓茂 职称 副教授 立项日期： 二五 年 四 月 十 日 结题日期： 二六 年 三 月 十 日华南农业大学大学生科技创新活动项目指导中心 填 表 说 明 一、 填写结题报告书前，请先咨询指导教师或有关专业教师。申请书的各项内容要求实事求是，逐条认真填写。表达明确、严谨，一律要求用打印稿件。 二 、申请书为A4复印纸，于左侧装订成册。一式三份（至少一份原件），由指导教师和所在院（部）审查并签署意见后报大学生科技创新活动项目指导中心。三 、一级标题三号宋体加粗，用“一、二、三”标示；二级标题四号楷体加粗，用“（一）（二）（三）”标示；三级标题四号仿宋加粗，用“1、2、3”标示；四级标题四号仿宋，用“”标示。示例：一、XXXX课题立项与研究的目的意义（一）XXXX课题立项与研究的目的的意义1、XXXX课题立项与研究的目的意义XXXX课题立项与研究的目的意义四、如表格不够，可以加附页。一、简表项目简况项目名称猪增生性肠炎的流行病学调查项目类别A、文科类； B、理科类；申请经费2000元起止年月2005.6-2006.5项目组成员姓 名性别出生年月年级专业班级所在学院上学年综合测评分项目中的分工本人签字沈远志男1983.0602动物医学兽医学院3.23负责,数据处理分析杨明亮男1983.0402动物医学兽医学院3.45样品采集与处理刘丽嫦女1983.0802动物医学兽医学院2.50PCR检测指导教师情况姓名黄毓茂性别男学位博士职称副教授研究方向家畜传染病的诊断与防治授课名称家畜传染病学兽医卫生检验传染病原理项目简介猪增生性肠炎（Porcine Proliferative Enteropathy,PPE）,又称猪回肠炎、猪增生性肠道病等，是一种由专性胞内劳森菌（Lowsonaia intracellularis）引起的猪小肠粘膜腺窝上皮细胞腺瘤样增生的传染病。该菌是一种革兰氏阴性弯曲状杆菌，很难在人工培养基中培养，只能在一些肠系的细胞培养中生长。曾有调查表明国外猪群中有90%呈增生性肠炎血清阳性, 至今已呈全球性流行；该病严重影响生长，影响饲料转化率，延长上市时间，临床用药将提高生产成本，甚至造成严重的药物残留，给养猪业造成巨大经济损失。我国养猪业近年来也对此病相当关注，据相关报导，该病对国内养猪业造成严重的经济损失，并有逐年上升的趋势。目前对该病的预防、诊断和治疗已有一定的研究，但由于在病原认识上的混乱、临床症状不典型等原因，有关该病在我国流行病学资料很少，给该病的预防和诊断带来一定的困难。 本次项目正是针对以上问题，利用简单可行的PCR方法扩增胞内劳森菌基因编码16sRNA的DNA长度为329bp的种属特异性片段，将产物克隆到pGEM-T载体并进行测序，并对该PCR方法的特异性进行试验，建立增生性肠炎的PCR诊断方法。主要对广东省不同地区、不同猪场、不同群体的猪进行分子流行病学的调查，了解省内不同猪群的带菌情况及其危害程度；是国内首次针对该病流行病学研究，为广东省提供此病诊断与防治的依据。二、项目研究的内容与方法基本内容：利用PCR技术对广东省PPE进行分子流行病学调查实施方案： 1、 采集样品。在广东省主要养猪地区取不同年龄、不同品种、不同性别的粪便或其他病理产物，并收集所调查猪群的用药资料和发病情况。2、 引物设计与合成。参考gengbank中编号为L08049长为375pb的胞内劳森菌DNA序列,设计一对引物P1和P2：P1为：5TATGGCTGTCAAACACTCCG3， P2为：5TGAAGGTATTGGTATTCTCC3，P1与P2分别对应L08049基因中5-24位和314-333位的核苷酸，期望的特异性扩增产物的大小为329bp；引物由上海博亚生物工程有限公司。3、 制备模板。将样品装入离心管加适量PBS，进行低速离心，取上清液再高速离心，提取样品DNA，加入70%乙醇洗涤两次，自然风干，加适量灭菌双蒸水或TE溶解，-20保存备用。4、 PCR扩增模板DNA。引物在一定条件下经过预变性、变性、退火，并延伸，如此循环延伸。5、 PCR产物电泳检测。将PCR产物在琼脂糖凝胶中进行电泳，观察结果。6、 PCR产物克隆测序。7、 同时进行序列分析比较。8、 数据分析与整理。获得该病的流行病学资料.三、项目研究过程与资料查阅情况在黄老师的指导下，查阅相关资料制定实验流程，设计特异性引物，采取猪场粪料进行分子流行病学的调查，了解不同猪群的带菌情况及其危害程度，并将调查结果整理成报告形式。相关资料的查阅：1黄毓茂 耿忠海 林绍荣 王声会 猪增生性肠病PCR诊断方法的建立 华南农业大学兽医学院2林绍荣,黄毓茂,苏丹萍. 猪增生性肠炎J . 中国兽医杂志,2001,37(12):40413林绍荣.猪增生性肠炎的诊断与防治A.中国工厂化养猪二十年论文集C.上海,1999.453457.4俞道进. 猪增生性肠炎研究进展J.动物医学进展,2001,3:2426.四、项目成果完成形式和价值（一）完成形式本实验通过应用PCR分子生物学的方法对猪只进行增生性肠炎的调查。经本实验可以准确的检测到猪只是否被胞内劳森菌感染，检测敏感性高，结果可信度高。实验结果表明，增生性肠炎在省内不同猪群的带菌情况十分严重。（二）成果价值 对广东省不同地区、不同猪场、不同群体的猪进行增生性肠炎分子流行病学的调查，了解省内不同猪群的带菌情况及其危害程度；是国内首次针对该病流行病学研究，为广东省提供了此病诊断与防治重要的依据。五、经费使用情况1 科研业务费：包括有资料的收集和复印、论文印制、DNA序列测定等：500 元2实验材料费：包括有粪便样品的收集、PCR试剂及其他分子生物学试剂、实验消耗性材料 1000元总经费预算：1500 元六、申请人对该项目研究工作完成后的认识总结在指导老师黄老师的悉心指导下，我们研究小组通过多次实验，终于完成了这次创新论文的研究工作，得出的成果令我们十分满意。本次创新论文的题目具有十分重要的科研意义，同时也具有十分重要的社会意义。增生性肠病是猪的一种常见病征。进行分子流行病学的调查，可以了解省内不同猪群的带菌情况及其危害程度；是国内首次针对该病流行病学研究，为广东省提供此病诊断与防治的依据。在进行实验的过程中，由于知识上的缺陷以及对各种先进仪器操作的不熟识，我们遇到了很多困难。当然，实验的失败不代表我们理论的错误，我们坚信这个创新课题是可行的。在指导老师帮助下，我们吸取一次次的失败经验，总结个中原因，最后完成了实验，并得到了满意的实验结果。 结果固然重要，但对我们来说，在实验的过程中所学到的各种知识，以及培养不折不挠的实验精神才是我们得到的最到的收获。七、指导教师对项目完成情况的意见由于时间与条件有限，只调查了一个猪场，因此有待进一步研究，增加血清学检测和样品数量。论文内容国内尚未见报道，因此创新性强。学生们在论文进行