香菇多糖产品的鉴定.ppt

11/28/2019,香菇多糖,11/28/2019,香菇多糖图片,11/28/2019,目录,香菇多糖简介,生产工艺,检测项目,生产厂家,11/28/2019,一、香菇多糖简介,香菇是一种珍贵的食用真菌，香菇子实体中除含有蛋白质、氨基酸、矿物质、维生素和对人体有益的微量元素外还含有一种重要的生物活性高分子多糖。此多糖具有提高机体免疫力，防止机体失调、解除体内毒素、保护正常细胞等特殊功能。香菇多糖是从香菇中提取的有效活性成分，具有抗血脂、调节免疫、抗血小板凝集、抗肿瘤、护肝、抗基因突变、抗艾滋病等作用。其多糖部分以甘露糖为主，含少量的岩藻糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等。香菇多糖具有多种药理作用，如：香菇多糖的保肝、护肝作用、抗肝作用、抗肿瘤作用、提高免疫的作用、无毒副作用。香菇多糖易溶于水，无臭无味，可与任何食品添加，改变其色、香、味，制成可口的功能食品，也可与其它有补益作用的天然食品或微量元素配伍，制成香菇多糖系列功能食品，制成胶囊、片剂、饮料或口服液。香菇多糖在提取过程中不加任何化学物质，提取多糖剩余溶液富含氨基酸，可做成口服液，也可制成各种强化营养食品；渣子磨成粉后是非常好的食用纤维，可添加在面包、面条、馒头、点心、饼干中。,11/28/2019,香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等多项功能。它的作用已被世界医学生物界作了充分的研究，尤其在日本，它被广泛应用于药品和保健食品中，以它制成的制剂香菇多糖针剂及片剂，配合放化疗，用于肿瘤患者疗效显著，由于它的特殊的免疫功能，在全世界各地被广泛应用。此外，香菇多糖还具有以下作用：1、增强抗疾病和预防感冒及治序有良好效果。2、预防人体，特别是婴儿因缺乏维生素D而引起的血磷、血钙代谢障碍导致的佝偻病有益，可预防人体各种粘膜及皮肤炎病。3、可预防血管硬化，可降低血压。4、具有降低血清胆固醇的有效作用。5、对心血管系统、内分泌系统的一些疾病乃至肝硬化等有预防作用。,11/28/2019,香菇多糖的结构,11/28/2019,香菇多糖的性质,理化性质:香菇多糖为生物制剂,属植物诱抗剂,抑制病毒的主要组分系食用菌菌体代谢所产生的蛋白多糖。化学名称:-(13)(16)-D-葡萄糖;经验式:(C42H70O35)n;相对分子质量:4080万;性状：纯品为类白色结晶粉末,无臭、无味;比旋光度：D20+13.5+14.5(2%氢氧化钠)；D20+19.5+21.5(10氢氧化钠)。溶解度：溶于水,不溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙醚等。,11/28/2019,二、香菇多糖的生产工艺,香菇多糖是存在于香菇内的一种从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，必须从香菇中提取而得。香菇多糖的主要提取方法有热水浸提法，稀酸（碱）浸提法，酶解法，超声波提取法，微波提取法和深层发酵培养提取法等。,11/28/2019,热水浸提法,工艺流程：香菇粉加蒸馏水过滤静置90摄氏度水浴提取滤液浓缩加入甲醇，充分混匀，静置加入甲醇，静置，离心得沉淀离心，取上清浓缩加甲醇，乙醚洗涤后自然风干得粗的香菇多糖,11/28/2019,稀酸（碱）浸提法,从香菇中提取多糖的提取剂有：酸液，碱液以及热水等等，提取液为酸碱的时候就是所谓的酸碱浸提法,11/28/2019,酶解法酶解法就是指在浸提的过程中加入相应的酶来水解纤维素、果胶、蛋白质分子等，以使多糖从细胞里分离出来。,11/28/2019,超声波提取法,香菇多糖的超声波（20KHz50MHz）提取是利用超声波的空化作用产生巨大的瞬时压力分散破坏植物组织加速植物多糖成分的浸出提取。,11/28/2019,超声波空化作用是指存在于液体中的微气核空化泡在声波的作用下振动，当声压达到一定值时发生的生长和崩溃的动力学过程。空化作用一般包括3个阶段：空化泡的形成、长大和剧烈的崩溃。当盛满液体的容器通入超声波后，由于液体振动而产生数以万计的微小气泡，即空化泡。这些气泡在超声波纵向传播形成的负压区生长，而在正压区迅速闭合，从而在交替正负压强下受到压缩和拉伸。在气泡被压缩直至崩溃的一瞬间，会产生巨大的瞬时压力，一般可高达几十兆帕至上百兆帕。,11/28/2019,微波提取法,微波提取法是一种新型的提取法，由于溶剂及细胞液吸收微波能，微波射线辐射于溶剂并且透过细胞壁内部时，细胞内部温度升高压力增大，当压力超过细胞的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的多糖就会释放出来。,11/28/2019,深层发酵提取法,深层液体培养法也叫液体深层发酵法，它是目前发酵工业上常用的一种发酵方法。该方法在发酵罐中完成，使用的培养基是液态的发酵液，在向发酵罐中投入发酵液后，经历有灭菌、接种、发酵等过程，在发酵中还可以根据需要向发酵罐中补充氧气和底物，使微生物生长代谢达到极致，大大提高了生产效率。,11/28/2019,11/28/2019,香菇多糖的纯化,取上述香菇多糖提取物溶于蒸馏水中，离心除去不溶物。用SephadexG50凝胶装好柱，用蒸馏水平衡48h（控制好流速：4滴/min），然后将上清液上柱分离，用蒸馏水洗脱，洗脱速度5ml/min（可用恒流泵控制洗脱速度）,200nm波长紫外检测，收集主要峰部分（当记录仪上出现波峰时即用试管开始收集洗脱液），冷冻干燥得白色香菇多糖。,11/28/2019,三、香菇多糖的检测,香菇多糖分为：香菇多糖片，香菇多糖胶囊，香菇多糖注射液等等，以下来注重介绍香菇多糖片的检测方法,11/28/2019,【鉴别】取本品0.05g，用乙醇洗涤数次，残渣加蒸馏水20ml，加热使溶解,加稀硫酸1ml，置水浴上加热15分钟，放冷，加氢氧化钠试液至中性,加入碱性酒石酸铜试液适量，置水浴上加热数分钟，即生成红色沉淀。干燥失重取本品在105干燥至恒重，减少重量不得过10.0重金属取本品2g，依法检查含重金属不得过百万分之十。炽灼残渣不得过1.0。蛋白质检查取样品溶于蒸馏水中，使含量为100mg/ml，加入30磺基水杨酸，不得混浊。,11/28/2019,磺基水杨酸检测蛋白质原理,蛋白质为两性物资，在酸性环境中带正电荷，而磺基水杨酸根带负电，正好与蛋白质结合沉淀，显示液体中有蛋白存在。注意：磺基水杨酸正好使液体呈酸性，促使二者结合。此法常用来检测微量人体蛋白，如尿液、脑脊液等是否有蛋白渗漏。,磺基水杨酸,11/28/2019,香菇多糖片含量测定,（1)总糖取本品40片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量(相当于香菇多糖80mg)，置锥形瓶中，加热水40ml，超声处理10分钟使充分溶解，加酚酞指示液12滴，用氢氧化钠试液调节pH至中性，加稀硫酸25ml，加热回流4小时，放冷，用氢氧化钠试液调节pH至中性，精密加碘滴定液(0.1mol/l)25ml，逐滴加氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/l)滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正，即得。每1ml碘滴定液(0.1mol/l)相当于9.008mg的无水葡萄糖。,11/28/2019,(2)单糖精密称取总糖项下的细粉适量(约相当于香菇多糖80mg)，置具塞锥形瓶中，加热水40mL，超声处理10分钟使充分溶解，加酚酞指示液12滴，用氢氧化钠试液调节pH至中性，精密加入碘滴定液(0.1mol/l)25ml，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/l)滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白校正，即得。每1ml碘滴定液(0.1mol/l)相当于9.008mg。将总糖的含量减去单糖的含量，即为香菇多糖的含量。本品每片含香菇多糖以无水葡萄糖计，不得少于9.0mg。,11/28/2019,香菇多糖测定的方法,为选出一种比较准确、方便的香菇多糖的测定方法,对蒽酮硫酸法、苯酚硫酸法、直接滴定法三法进行了比较。实验结果表明:蒽酮硫酸法所测香菇多糖含量偏高,回收率过高(11316%14511%);直接滴定法灵敏度不高,回收率偏低(4218%8518%);而苯酚硫酸法不仅灵敏度高,回收试验也较理想(9215%11012%)。因而,可认为苯酚硫酸法是测定香菇多糖含量较为理想的方法,11/28/2019,苯酚硫酸法原理苯酚试剂可与香菇多糖中的已糖及其糖醛酸起显色反应,生成橙黄色化合物,于490nm处比色,定量。,11/28/2019,蒽酮硫酸法,原理香菇多糖遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物,可与蒽酮试剂缩合反应,生成蓝绿色化合物,于625nm处,11/28/2019,直接滴定法,原理香菇多糖经沸水浴回流提取,醇析后加酸、加热、回流水解成单糖,以次甲基蓝作指示剂,在加热条件下,滴定经标定过的碱性酒石酸钾钠铜溶液,根据样品水解液消耗体积,计算其含量。,11/28/2019,直接滴定法测定还原糖1、原理斐林试剂甲液（CuSO45H2O+亚甲基蓝），斐林试剂乙液（酒石酸钾钠+NaOH+亚铁氰化钾，混合酒石酸钾钠合铜），酒石酸钾钠合铜+葡萄糖葡萄糖酸+Cu2O(红棕)，亚铁氰化钾使Cu2O（红棕）生成无色络合物K2Cu2Fe(CN)6。Cu2O+K4Fe(CN)6+H2OK2Cu2Fe(CN)6+2KOH红棕无色终点的确定：葡萄糖+亚甲基蓝（氧化态）亚甲基蓝（还原态过量兰色无色,11/28/2019,湖北广仁药业有限公司位于湖北随州广水市，座落在国家级风景区中华山下，公司占地面积2.67万平方米，建筑面积1.57万平方米，是一家集中成药科研、生产和营销为一体的股份制企业，2004年获得国家GMP认证，是湖北省高新技术企业。拥有多功能中药提取罐、真空浓缩罐、中药粉碎机组、沸腾制粒干燥机、高效薄膜包衣机、二维运动混合机、亚高速压片机、液体灌装旋盖机等国内目前最先进的生产设备，还拥有德国、日本和上海生产的高效液相色谱仪、薄层扫描仪、紫外分光光度仪等国际国内先进的检测设备。目前拥有片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、丸剂、煎膏剂、酊剂、露剂、散剂、合剂等10大剂型54个品种。其主导产品香菇菌多糖片、妇月康胶囊、骨刺消痛胶囊、克淋通分散片、腰痛片、乌鸡白凤丸等，深受市场青睐，产品行销全国20多个省市自治区。,湖北广仁药业有限公司,四、香菇多糖的生产企业公司,11/28/2019,上海辅仁药业集团有限公司,辅仁药业集团有限公司是一家以药业、酒业为主导产业，集研发、生产、经营、投资、管理于一体的综合性集团公司。旗下拥有辅仁药业集团医药有限公司、河南辅仁堂制药有限公司、开封制药（集团）有限公司、开封豫港制药有限公司、河南辅仁怀庆堂制药有限公司、河南同源制药有限公司、辅仁医药科技开发有限公司、河南省宋河酒业股份有限公司及上市公司上海辅仁实业（集团）有限公司等多家全资、控股子公司。产品涵盖了中、西药制剂，生化制药，生物制药，原料药等多个门类。辅仁已形成拥有水针剂、粉针剂、冻干粉针剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、滴剂、胶剂等20多个剂型，近1000个品种，剂型及品种数量位居全国前列。,11/28/2019,金陵药业股份有限公司,于1998年9月由南京金陵制药（集团）有限公司等五家单位以优质资产共同发起设立的科工贸一体化、产学研相结合的大型现代化上市公司。从事中、西药原料和制剂、生化制品、医药包装制品、医疗器械、保健食品、天然饮料生产、化妆品生产、销售。公司主要产品和品种有：脉络宁系列产品、塞莱乐、双香排石颗粒、速力菲、胃得安、香菇多糖、丝白袪斑软膏、筋络宁、慢咽宁、明胶海绵等一百六十多个产品与品种，其中“脉络宁注射液”、“胃得安片”、“香菇多糖注射液”为国家中药保护品种。,金陵药业,11/28/2019,湖北创力药业有限公司,